骨膜剥离加髓腔破坏建立股骨头坏死模型的可行性研究

目的探讨骨膜剥离加髓腔破坏建立股骨头坏死（ONFH）动物模型的可行性。方法成年杂种狗12只（13～17kg）,手术剥离其左侧股骨近端约4cm范围内的全部骨膜及周围组织,并于股骨颈中下1／3处用直径1mm的钻头钻孔,破坏此处髓腔松质骨成分,皮质骨保持完整;右侧做正常对照。采用股动脉数字减影血管造影（DSA）技术检测、比较手术前后股骨头局部的血液循环变化,并分别于术后1、4、8和16周获取股骨头标本,行病理切片检查。结果术后DSA图像显示髋关节局部出现多量新生血管由股骨颈、髓内等处再生进入有坏死改变的股骨头内。四组实验侧股骨头均出现不同程度ONFH表现,第16周股骨头标本示轮廓改变,轻度塌陷外观。结论骨膜剥离加髓腔破坏法能成功建立ONFH模型,可用于ONFH的发生、发展机制及治疗的研究。     

朗格汉斯细胞组织细胞增生症3例临床分析

目的探讨朗格汉斯细胞组织增生症的临床特点及治疗方法。方法回顾分析3例朗格汉斯细胞组织细胞增生症并复习相关文献。结果 2例患者以头部肿物为首发症状,手术切除病灶后经过化疗及免疫治疗存活至今,另1例患者经过颈椎穿刺活检确诊,未行化疗,死于并发症。结论朗格汉斯细胞组织细胞增生症是一组原因不明的罕见疾病,其病理基础是单核巨噬细胞系统中朗格汉斯细胞增殖,由于病变年龄、细胞增生程度、累及组织和器官的不同,其症状表现不一样,预后也不一样。     

应用脱钙骨基质和硫酸钙颗粒治疗骨缺损的初期结果

目的探讨使用骨移植替代物脱钙骨基质（DBM）和硫酸钙颗粒（OSTEOSET）治疗骨缺损的疗效。方法对同期手术治疗的52例骨缺损患者的缺损处,分别于术后第1、4、8周及3、6、12个月进行随访并摄X线片直至骨缺损愈合。统计分析患者的临床资料、X线片辅助分析骨缺损修复程度和并发症。结果随访8-12个月,植骨术后6、12个月分别有95%和99%患者的骨缺损显示有明显的新骨形成,修复水平为60%-100%。并发症为3例（5.77%）,经换药后治愈,未发生骨缺损不愈合。结论DBM和OSTEOSET在骨愈合早期可加速骨缺损的修复,并可作为新鲜自体髂骨的替代物。     

自固化磷酸钙人工骨(CPC)修复骨肿瘤骨缺损的初步临床应用

评价自固化磷酸钙人工骨（CPC）治疗骨肿瘤缺损早期临床效果。方法对23例骨瘤患者行病灶刮除、国产CPC填塞修补术。患者年龄8～45岁，平均24.3岁。术后血液免疫学及X线检查，随访1～2年。结果CPC固化时间在15～30min，平均20min。临床使用后未见明显局部和全身不良反应，6个月后逐渐出现降解。随访X线片示CPC与宿主骨直接愈合，与原骨界面间接触紧密无间隙，骨缺损处解剖形状完全恢复。     

血管内皮生长因子基因稳定转染兔骨髓基质干细胞的研究

目的 检测人血管内皮生长因子(VEGF)基因稳定转染对兔骨髓基质干细胞(BM-SC)VEGF表达的影响.方法 分离并培养兔骨髓基质干细胞,利用脂质体介导pcDNA3.1-VEGF165转染兔BMSC,G418筛选稳定表达pcDNA3.1-VEGFl65的细胞克隆,RT-PCR、Western blot法检测转染前后细胞中VEGF165 mRNA和蛋白的表达.结果 通过筛选获得了稳定表达pcDNA3.1-VEGF165的细胞克隆.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot结果显示:稳定转染组BMSC中可检测到VEGF165 mRNA和蛋白的表达,空白和空载体组未见VEGF表达.结论 pcDNA3.1-VEGF165载体转染的兔BMSC可稳定表达外源性VEGF165 mRNA和蛋白,可作为治疗骨缺损和骨缺血性坏死研究的种子细胞.     

富血小板血浆通过调节细胞周期抑制蛋白p27促进大鼠脂肪干细胞成骨分化

目的 观察富血小板血浆(PRP)通过调节细胞周期蛋白p27表达,促进脂肪干细胞(ADSCs)向成骨细胞分化过程中的具体机制.方法 酶消化法获得大鼠ADSCs,观察PRP对大鼠ADSCs向成骨细胞分化的影响.流式细胞仪检测PRP作用与ADSCs对细胞周期和细胞周期蛋白表达的影响,Western blot法检测细胞周期蛋白表达的变化.结果 PRP干预组ADSCs增殖率为41.0％,空白对照组增殖率为7.4％.S期ADSCs的比例由诱导前的26.5％提高到67.9％.结论 PRP通过下调细胞周期抑制蛋白,提高ADSCs的增殖和分化率,促进ADSCs的成骨分化.     

朗格汉斯细胞组织细胞增生症1例并文献复习

朗格汉斯细胞组织细胞增生症（LCH）是一组少见的原因未明的疾病,主要发生于儿童,其病理学中以组织细胞增生为主要特点,属于网状内皮或单核一吞噬细胞浸润增生病变,由朗格汉斯组织细胞和其他免疫细胞异常聚集引起,可累及骨、皮肤和淋巴结等多个器官,我科最近收治1例,现报道如下。     

Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察Survivin基因反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法靶向Survivin基因的反义寡核苷酸经脂质体介导转染骨肉瘤MG63细胞系，倒置显微镜观察转染后细胞形态学变化、半定量RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达，噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况，吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。结果转染反义寡核苷酸后，MG63细胞中Survivin基因mRNA水平表达显著下降；细胞增殖受到显著抑制，抑制率达61％；倒置显微镜显示细胞变圆，漂浮细胞增多；吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变。结论Survivin基因的反义寡核苷酸可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。     

鼠胚成骨细胞的原代培养与鉴定

目的 探讨经济、高效的原代成骨细胞培养方法,为进一步的实验研究奠定基础。方法孕龄19天的昆明孕鼠（KM）,无菌条件下剖腹取出胎鼠,然后取胎鼠的颅盖骨,剔净、漂洗、剪碎。甩0．25％胰蛋白酶消化10分钟,终止消化后,将碎骨块接种于培养瓶中培养,通过相差显微镜、透射电镜观察,并用碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫组化染色和钙结节茜素红染色等方法对所获得的细胞进行鉴定。结果所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,碱性磷酸酶染色、骨钙素染色和钙结节染色均呈阳性。结论改良的组织块培养法可在较短时间内获得大量成骨细胞,所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。     

靶向Survivin的小分子干扰RNA对骨肉瘤细胞的体内外抑制作用

目的 观察靶向Survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体对人骨肉瘤细胞MG-63的体内外抑制作用.方法 体外构建Survivin siRNA表达载体pSilence2.1-neo-Survivin,转染骨肉瘤细胞株MG-63、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学(SP)法检测转染前后Survivin mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡,建立裸鼠移植瘤模型,记录瘤体形成时间及肿瘤生长.结果 转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降,转染后mRAN表达抑制率为85.08%,增殖指数为空白组的28.20%;细胞周期分析显示:shRNA组G0/G1期细胞明显增多,而G2/M期、S期细胞数目减少;吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变,转染组凋亡率为24.54%;稳定转染组细胞裸鼠体内致瘤能力降低,转染组成瘤时间为(13.2±2.0)d,空白组为(6.5±1.6)d,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).4周时同空白组相比转染组瘤体体积小62.89%(P＜0.01),重量轻59.07%(P＜0.01).结论 靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞MG-63增殖,促进细胞凋亡;明显抑制人骨肉瘤细胞的致瘤活性及裸鼠移植瘤的生长.