前动力蛋白Prokineticin-1对神经母细胞瘤QDDQ-NM细胞VEGF表达的影响

目的 探讨前动力蛋白(prokineticin-1,Prok-1)对神经母细胞瘤细胞QDDQ-NM细胞血管生成的影响.方法 应用Prok-1蛋白受体基因PKR1小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染人神经母细胞瘤ODDQ-NM细胞,分别用Prok-1、AKT蛋白激酶抑制剂LY294002处理后,采用Western blot检测AKT蛋白磷酸化水平,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清内血管内皮生长因子(VEGF)的含量.结果 Prok-1可激活ATK信号通路,磷酸化AKT蛋白水平升高;同时上调QDDQ-NM细胞VEGF的表达.在Prok-1蛋白激酶抑制剂处理浓度分别为0和100 ng/ml时,培养细胞上清VEGF浓度分别为(212±23) pg/ml和(416±43) pg/ml,两者差异有统计学意义(P＜0.01).而AKT蛋白激酶抑制剂LY-294002可抑制Prok-1上调VEGF的表达.结论 Prok-1可能通过AKT信号传导途径上调神经母细胞瘤VEGF的表达,促进肿瘤血管形成,进而促进神经母细胞瘤的增殖和转移.     

miR-144通过靶定ITGβ1调控神经母细胞瘤的侵袭转移

目的 本研究旨在探讨miR-144对神经母细胞瘤的侵袭和转移的影响,并探索miR-144是否通过靶定ITGβ1调节神经母细胞瘤的侵袭和转移.方法 利用生物信息学技术预测miR-144的靶基因ITGβ1,应用荧光报告基因检测以及荧光定量PCR、Western Blot实验对靶基因进行验证.在神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-BE分别瞬时转染化学合成的成熟双链miR-144和靶基因敲降质粒及对照质粒,建立过表达miR-144细胞模型和靶基因敲降细胞模型.通过 Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞的体外侵袭和转移能力.结果 Transwell实验结果表明,在神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和SK-N-BE中过表达miR-144后,细胞的侵袭数目分别为41±2和55±2,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).抑制ITGβ1基因的表达后,体外划痕实验结果表明,过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞的转移能力分别下降了65.45%和75.41%(P<0.01).荧光报告基因检测结果显示过表达miR-144后,含有结合位点的荧光报告质粒的相对荧光量降低了37.11%(P<0.01),而将结合位点进行基因突变后miR-144对靶基因的抑制作用消失.过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞内的ITGβ1 mRNA水平分别降低了40%和43%,Western Blot检测结果显示,ITGβ1蛋白水平分别降低了39%和40%.结论 miR-144通过靶定ITGβ1基因抑制神经母细胞瘤的侵袭和转移过程.