TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变

目的 检测转化生长因子（TGF-β1）能否在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞-间质细胞转变（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及其相应的信号转导机制.方法 在体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型细胞（RLE-6TN）中加入TGF-β1后,于不同时间段收取细胞,分别采用Real-time PCR及Western blot检测上皮及间质细胞标志物表达的改变;Western blot检测TGF-β1对RLE-6TN细胞p-Smad 2/3表达的影响;TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞形态学的改变采用倒置相差显微镜观察,超微结构的改变采用透射电子显微镜观察.结果 加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后,其间质细胞标志物表达上调,上皮细胞标志物的表达下调;加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后,其p-Smad 2/3的表达明显上调;形态学上,TGF-β1诱导RLE-6TN细胞向成肌纤维细胞样细胞转变;超微结构上,TGF-β1诱导RLE-6TN细胞特有的嗜锇性板层小体发生变性、肿胀并随TGF-β1作用时间延长最终完全消失.结论 TGF-β1能在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变,其机制部分与Smad信号转导途径相关.     

泛素特异性修饰酶2-69对大鼠系膜细胞内饰胶蛋白聚糖表达和泛素化降解的调节

目的 研究泛素特异性修饰酶2-69（USP2-69）对系膜细胞（MC）内饰胶蛋白聚糖（DCN）表达和泛素化的调节作用。方法 ①培养MC细胞,采用Western blot法检测大鼠肾MC内USP2-69的表达;②采用免疫共沉淀、激光共聚焦和免疫荧光法,检测MC内USP2-69是否与DCN结合,并观察两者在MC内的定位;③将pRK5-USP2-69-HA质粒瞬时转染MC后,用Western blot法检测HA、USP2-69和DCN的蛋白表达,用免疫共沉淀法检测DCN的泛素化水平;④采用USP2-69 siRNA处理MC,用PCR检测USP2-69和DCN的mRNA表达,用time-course Western blot法检测DCN的半衰期, Western blot法检测DCN的下游效应分子（TGF-β1和Col Ⅳ）的蛋白表达。结果 ① USP2-69在MC、肝细胞（BRL-3A）和足细胞（GEC）内均有表达,其在MC内的基础蛋白表达水平显著高于BRL-3A和GEC［MCs：(0.27±0.05),BRL-3A：(0.035±0.009),GEC：(0.012±0.004), P<0.01］。② MC总蛋白经DCN抗体免疫沉淀后,可检测到USP2-69的表达;经USP2-69抗体免疫沉淀后,可检测到DCN表达;且在MC胞质内,代表USP2-69蛋白的荧光与代表DCN蛋白的荧光存在共定位。③ 转染pRK5-USP2-69-HA质粒的MC内可检测到代表外源性USP2-69表达的HA蛋白,USP2-69和DCN蛋白表达的升高,同时DCN的泛素化水平明显降低。④ 经USP2-69 RNA干扰的MC内DCN的mRNA水平没有明显改变,但其半衰期明显缩短（3 h）,且TGF-β1和Col Ⅳ的蛋白表达均明显升高。结论 大鼠肾MC内USP2-69可与DCN相结合,及两者在胞质内共定位,USP2-69能够降低MC内DCN的泛素化水平及提高DCN蛋白总量并促进其功能。     

以肾小球内"假血栓"形成为表现的三种肾小球病的临床和病理特征的比较——3例报道及文献复习

目的通过对3例以肾小球内“假血栓”形成为表现的不同类型肾小球病的临床和病理特征的比较，提高对其病理形态特点的认识和诊断水平。方法用纤维蛋白染色（Weigert法）鉴别肾小球毛细血管腔内微血栓形成的狼疮性肾炎和“假血栓”形成为表现的脂蛋白性肾病（LPN）、冷球蛋白血症性肾小球肾炎（CrGN）和华氏巨球蛋白血症性肾小球肾炎（WMG），并对其临床特征及肾活检组织的光镜、免疫荧光和电镜观察结果进行详细比较。结果LPN、CrGN和WMG3种肾病均可以肾病综合征为表现，但其血清学检查结果显示：LPN伴发高脂蛋白血症；CrGN伴发于尿本周蛋白呈阳性的淋巴细胞增生症；WMG病例则有血清IgM单株峰升高的特点。这3种肾小球病尽管在病理形态上均以肾小球毛细血管腔内“假血栓”形成为表现，但其纤维蛋白染色结果均为阴性，显然与狼疮性肾炎病变肾小球内形成的“微血栓”不同，又结合其“假血栓”的光镜特点、免疫荧光检查和电镜观察结果可将其加以区别。结论对以肾小球内“假血栓”形成为表现的肾小球病的确诊，必须做到临床和病理学检查的密切结合。     

转染Smad2基因的大鼠肾系膜细胞纤连蛋白和Ⅳ型胶原表达的改变（摘要）

目的 通过对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）转染Smad2基因，观察转染的阳性细胞克隆纤连蛋白（FN）及Ⅳ型胶原（ColⅣ）表达的改变，以探讨转化生长因子β（TGF-β）／Smad信号转导通路引起细胞外基质积聚导致肾小球硬化发生的分子机制。方法经磷酸钙介导将含有Smad2重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及Western印迹分析法鉴定，又分别采用Western印迹分析法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染阳性细胞克隆FN及ColⅣ表达的改变。结果 成功建立高表达Smad2蛋白的阳性MsC克隆（T-12、T-31、T-35、T-40），并证实其FN及ColⅣ的mRNA和蛋白的表达水平均明显上调。阳性MsC克隆FN蛋白为对照组2．4倍（P〈0．05），mRNA为对照组的2．7倍（P〈0．05）；阳性MsC克隆ColⅣ蛋白为对照组的2．9倍（P〈0.01），mRNA为对照组的3．3倍（P〈0．01）。结论 TGF-β／Smad信号转异途径中Smad2可能是促进FN及ColⅣ在肾小球中积聚，是导致肾小球硬化发生的重要信号转导分子。     

槐杞黄颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin和podocin表达的影响

目的：通过观察槐杞黄颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin与podocin基因及蛋白表达的影响,探讨槐杞黄颗粒治疗肾病综合征的作用机制。方法：将Sprague-Dawley大鼠20只随机分为5组（即正常对照组、模型组、激素组、槐杞黄组和槐杞黄＋激素组）,除正常组大鼠外,各组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素造模。分别在建模后第7、14、21及28天收集24h尿液,检测大鼠24h尿中的蛋白含量;第29天处死所有大鼠,取肾脏组织,光学显微镜和电子显微镜下观察大鼠肾脏病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肾组织nephrin与podocin mRNA的表达,蛋白质印迹法检测肾组织nephrin与podocin蛋白的表达。结果：与正常对照组比较,从建模第14天开始模型组大鼠24h尿液中蛋白量增多（P=0.005）,并随造模时间延长逐渐增加（P=0.015,P=0.012）;从第14天开始,槐杞黄组与正常对照组相比,其尿蛋白减少不明显（P〈0.05）;第21天时,激素组与正常对照组相比,其尿蛋白明显增加（P=0.045）。光学显微镜下发现：模型组肾间质有灶性炎症细胞浸润,伴少量纤维组织增生;药物治疗组炎症细胞浸润较少。电子显微镜下发现：模型组肾小球足突大部分融合、消失,或出现部分微绒毛;槐杞黄组基底膜基本光滑均匀,足突融合明显减轻;激素组及槐杞黄＋激素组足突清晰,甚至接近正常对照组。与正常对照组相比,模型组肾组织中nephrin、podocin mRNA及蛋白表达均明显减少（P〈0.05）;与模型组比较,药物治疗组nephrin、podocin mRNA及蛋白表达均明显增加（P〈0.05）。24h尿蛋白量与nephrin mRNA以及nephrin和podocin蛋白的表达呈负相关。结论：槐杞黄颗粒可通过上调裂孔隔膜上的nephrin及podocin的表达维持足细胞裂孔隔膜的完整性,减轻肾小球滤过屏障的损伤,以此降低尿蛋白漏出。     

泛素特异性加工酶2—69对乳腺癌细胞增殖的影响北大核心CSCD

目的探讨泛素特异性加工酶2—69（USP2—69）在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义。方法收集2013至2015年复旦大学附属华山医院24例人乳腺浸润性导管癌组织,分别应用分子杂交技术、Western blot及免疫组织化学法检测其USP2-69mRNA和蛋白水平表达。采用体外人乳腺癌细胞株MCF-7瞬时转染USP2-69质粒,使其过表达USP2-69,检测细胞增殖能力。结果乳腺浸润性导管癌的肿瘤组织中,USP2—69在mRNA及蛋白水平均高表达,与癌旁组织相比差异有统计学意义（P〈0．01）。USP2—69蛋白高表达的组织其Ki-67的蛋白表达也升高,Western blot免疫印迹法检测发现人乳腺浸润性导管癌组织中USP2-69的蛋白表达显著高于癌旁组织。细胞实验中转染USP2-69质粒的MCF-7细胞中cyclin D1较空载组表达增高,p27表达下降。细胞增殖速度明显加快,S期比例明显增高,平板阳性克隆明显增加（P〈0．01）。结论乳腺浸润性导管癌组织中USP2-69表达升高,与促进肿瘤细胞增殖能力密切有关。实验结果为进一步研究调节乳腺癌增殖的分子机制提供重要的实验基础。     

高糖对大鼠系膜细胞肝细胞生长因子受体表达的影响及其机制研究

目的 观察高糖作用下大鼠系膜细胞(MsC)肝细胞生长因子（HGF）受体c-Met的表达，并探讨其机制和意义。 方法 用RT-PCR和Western 印迹方法检测高糖作用大鼠MsC的不同时间点（0、12、24、48、96 h）c-Met的表达。分别用光辉霉素A（mithramycin A）和SU11274抑制转录因子Sp1的DNA结合活性和阻断c-Met。用电泳迁移率改变实验(EMSA)观察Sp1与c-Met基因启动子的结合活性。以荧光探剂二氯双氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)捕获细胞内活性氧。 结果 大鼠MsC的c-Met表达在高糖作用12、24和48 h都明显上升，96 h开始下降。光辉霉素A呈浓度依赖性抑制高糖作用下大鼠MsC的c-Met表达上调。大鼠MsC内Sp1与c-Met基因启动子的结合活性在高糖作用下明显增强。HGF及c-Met显著抑制高糖诱导的大鼠MsC内活性氧的增多。 结论 高糖作用下大鼠MsC的c-Met表达增强，其机制可能是通过Sp1介导。HGF-c-Met信号通路激活能抑制高糖所致大鼠MsC内的氧化应激反应。     

肾上腺髓质肽在大鼠足细胞损伤模型中调控肾小球壁层上皮细胞分化

 目的  探讨肾上腺髓质肽(adrenomedullin,AM)是否通过调控肾小球壁层上皮细胞(parietal epithelial cells,PECs)分化参与对大鼠足细胞损伤模型的保护作用及可能的分子机制。方法  雄性SD大鼠经一次性腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷(puromycinaminonucleoside,PAN) (15 mg/100 g体重)建立足细胞损伤模型,随机分为模型组和治疗组,治疗组每天经尾静脉注射AM 蛋白质(6.6 μg/100 g体重)。分别在首次注射PAN后7、14 和21 天,观察大鼠尿蛋白水平及肾组织形态改变,并经免疫组化染色、双重或三重免疫荧光染色,检测足细胞数量、肾小球AM的表达、PECs分化以及Notch3表达变化。结果  大鼠 PAN肾病模型表现为大量蛋白尿、肾小球节段性损伤、足细胞计数显著减少。AM/claudin-1双重荧光染色显示PECs中AM表达显著增强且出现于毛细血管袢内。AM治疗可改善大鼠尿蛋白及肾组织形态,减少足细胞丢失,14天时显著增加共表达PECs(claudin-1)及足细胞特异性标志蛋白(WT-1和synaptopodin)的细胞数。Ki67与claudin-1共定位表达于PECs,但未与WT-1共表达。AM显著抑制由PAN所致的Notch3表达。结论  在大鼠PAN足细胞损伤模型中,PECs中AM表达上调提示机体的一种代偿性保护机制,AM可能通过下调Notch3信号通路而促进PECs分化,参与其促进损伤后修复的作用。     

饰胶蛋白聚糖基因转染对大鼠肾系膜细胞转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体表达的影响

目的探讨饰胶蛋白聚糖(DCN)拮抗肾小球硬化进展的作用是否与其抑制系膜细胞(MsC)转化生长因子βⅠ、βⅡ型受体(TGF-βRⅠ、TGF—βRⅡ)表达有关。方法经外源性TGF-βⅠ刺激培养的大鼠肾MsC，采用RT—PCR、Western印迹法检测其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ的表达。用脂质体介导法将DCN基因转染MsC，经筛选和鉴定，用RT—PCR、Western印迹法和免疫荧光法分别观察DCN基因转染对TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ表达的影响。结果经外源性TGF-βⅠ刺激的正常MsC，其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ基因转录及蛋白表达均明显升高，且呈时间依赖性，于作用24h达高峰。与转染空载体的MsC(1P-1)相比，转染。DCN基因的MsC克隆(3D-5，7D-1)的TGF-βRⅠmRNA表达分别为对照组的20％和32％，TGF-βRⅡmRNA表达分别为对照组的64％和59％；TGF-βRⅠ蛋白表达分别为对照组的34％和25％，TGF-βRⅡ蛋白表达分别为对照组的49％和57％。同时转染DCN基因也能阻止MsC对外源性TGF-βⅠ刺激所致的两种受体表达升高作用。结论过表达DCN基因的MsC，其TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ和蛋白表达水平均明显降低，这可能是DCN拮抗由TGF-β介导的肾小球硬化发生的重要机制之一。     

英美两国医疗保障制度变革比较

由于医疗服务市场的不完善和医疗服务的“消费外部性”,各国政府都或多或少对医疗服务领域进行管制,在融资和医疗服务提供方面扮演重要角色。近年来,由于医疗费用的日益膨胀和人们对医疗服务的要求不断提高,各国都在对本国的医疗制度进行改革。本文试图比较分析英美两国医疗保障制度的发展变化,探讨医疗保障制度的变革趋势。1 两种医疗保障制度模式的比较由于各国具有不同的历史渊源、传统习惯和政治环境,各国的医疗保障制度是千差万别的,既有公共出资和政府提供占主导地位的国家,也有私人出资和市场提供占主导地位的国家,还包括许多混合…