TIM2转基因细胞瘤苗对小鼠作用的初步研究

目的 观察小鼠TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗在小鼠体内的成瘤作用 ,初步研究其免疫原性.方法 构建TIM2基因真核表达载体pIRES2-EGFP - TIM2,脂质体法转染H22细胞,制备得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗,建立小鼠肝癌移植瘤模型,观察其在小鼠体内的成瘤作用.结果 成功得到TIM2基因修饰的H22 细胞瘤苗,免疫接种小鼠后,可明显抑制小鼠体内肿瘤的发生和发展;给予H22-TIM2接种的小鼠CD4亚群、CD4/CD8比值显著高于H22-EGFP 细胞接种组、荷瘤对照组和正常对照组.结论 TIM2基因修饰H22细胞后,可显著降低H22细胞的体内成瘤性,抑制小鼠肿瘤生长,同时.在体内具有一定的免疫原性,为进一步探讨TIM2 在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据.     

维甲类化合物Ro13-7410对HL-60细胞的作用

目的：探讨合成的第三代维甲类化合物（Ｅ）４［２５，６，７，８ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ５，５，８，８ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ２ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｙｌ１ｐｒｏｐｅｎｙｌ］ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ（Ｒｏｌ３７４１０）对白血病细胞ＨＬ６０的影响。方法：采用ＮＢＴ还原能力测定检测细胞分化，电镜和程序性细胞死亡检测试剂盒（ＰＣＤａｓａｙｋｉｔ）鉴别凋亡细胞，Ｆｕｒａ２／ＡＭ荧光法测定胞浆内Ｃａ２＋浓度，ＰＣＲＥＬＩＳＡ试剂盒检测端粒酶活性，流式细胞术测定细胞周期分布。结果：Ｒｏｌ３７４１０诱导ＨＬ６０细胞分化的同时伴随细胞凋亡的发生。在ＨＬ６０细胞凋亡和分化的过程中胞浆内Ｃａ２＋浓度增高，端粒酶活性明显受抑，多数细胞被阻止在Ｇ２／Ｍ期。结论：Ｒｏｌ３７４１０可诱导ＨＬ６０细胞凋亡和分化的同时发生。胞浆内Ｃａ２＋浓度的增高，端粒酶活性的降低以及细胞周期的阻止与细胞凋亡和分化的诱导有关     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

苦参碱诱导K562细胞分化早期的基因表达分析

目的　比较苦参碱诱导K5 6 2细胞前后的基因表达谱 ,寻找与肿瘤细胞分化相关的基因。方法　 0 .1mg/ml苦参碱作用K5 6 2细胞 3h后 ,采用基因芯片技术测定并分析对照组与苦参碱处理组间的基因表达谱差异。结果　在 84 6 5个候选基因中 ,筛选出 30个差异表达基因 ,苦参碱处理组与对照组比较 ,表达上调的基因有 12个 ,主要涉及代谢相关蛋白基因、细胞受体等 ;表达下调的有18个 ,包括抑癌基因、原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关蛋白基因、细胞信号转导基因等。结论　肿瘤细胞诱导分化是多基因作用的综合结果 ,筛选的基因对了解肿瘤发生、发展与逆转分化 ,以及寻找潜在的药物作用靶点可能有意义。     

苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察苦参碱在体内和体外的抗肿瘤作用.方法:MTT法检测苦参碱对小鼠腹水瘤细胞H22的体外杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对体外培养的H22细胞的诱导凋亡作用;在BALB/C小鼠H22移植瘤模型上观察苦参碱的体内抑瘤活性,透射电镜观察苦参碱治疗后荷瘤小鼠肝癌细胞的超微结构改变;免疫组化法检测荷瘤小鼠肝癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:苦参碱在体外能够明显抑制H22细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡;对小鼠肿瘤生长也有明显抑制作用,高、低浓度组抑瘤率分别为60.71%和62.53%;用药组小鼠肿瘤组织中,电镜下可见较为典型的细胞凋亡的形态学改变;肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达增强,与荷瘤对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:苦参碱在体内外对H22肿瘤细胞生长均有抑制作用,同时可促进肿瘤细胞表达Bax蛋白,抑制Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡.     

K562细胞未知基因KH的开放阅读框架在大肠杆菌中的表达

目的:构建K562细胞未知基因KH的开放阅读框架(open reading flame,ORF)的原核表达体系.方法:采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架(KH-ORF)的表达载体pCI-neo-KH-ORF,热休克法转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导后,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达.结果:经IPTG诱导0.5h后KH-ORF在BL21(DE3)plysS中获得表达,表达产物以包涵体形式存在,分子产量约24kD.结论:成功构建了KH-ORF的原核表达体系,为进一步研究其功能奠定了基础.     

苦参诱导K562细胞分化的研究

K562细胞属于人红白血病细胞株，是骨髓多能干细胞。以苦参作诱导分化剂，可使K562细胞有分化现象并向多方向分化，这为临床探索中药非杀伤性治疗白血病打下了良好的基础。     

端粒酶活性与白血病细胞系的分化

为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法采用ＰＣＲ－ＬＩＳＡ方法检测白血病细胞株Ｋ－５６２和ＨＬ－６０诱导分化前后的端粒酶活性。结论分化是细胞自身调控的过程,端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态密切相关。     

酵母双杂交系统的发展与细胞信号转导研究

酵母双杂交系统是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法,主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与已知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中,通过酵母双杂交系统能较全面真实地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。