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目的探讨工程菌表达的耐热DNA聚合酶的纯化方法。②方法收集IPTG诱导带有耐热DNA聚合酶(TD聚合酶)基因表达质粒的工程菌株DH-TD4,用溶菌酶裂解,60℃处理后,上清液用硫酸铵沉淀,根据溶解度差异进行粗分级,然后进行离子交换层析细分级,并经聚合酶链式反应(PCR扩增)鉴定其活性。③结果纯化的TD聚合酶具有良好的聚合活性。④结论溶解度差异与离子交换层析是工程菌表达的耐热DNA聚合酶纯化的主要步骤。基因工程制备的DNA聚合酶可用于PCR检测 相似文献
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目的:研究褐藻糖胶对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法:不同浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖;Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡的形态学及生化改变;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹分别测定细胞〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗和bax mRNA及其蛋白的表达。结果:不同实验浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.01),抑制率呈浓度依赖性增大;褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加,且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带;在褐藻糖胶存在下,〖STBX〗 bcl-2〖STBZ〗 mRNA和蛋白表达减少,而bax mRNA和蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05)。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖,且诱导其凋亡,其凋亡机制是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。 相似文献
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fat-1基因对乳腺癌细胞的增殖抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的: 以胃癌特异性多肽抗原MG7为靶点研制胃癌特异性纳米疫苗,并观察其对小鼠的免疫效能.方法: 人工合成胃癌MG7-Ag的模拟表位多肽,用磁力超声法将其包封于纳米乳剂中,通过透析纯化,HPLC检测其包封效率.用包封有MG7抗原肽的纳米疫苗免疫健康Balb/c小鼠,以空白纳米疫苗和PBS作为对照,测定其免疫活性,通过ELISA测定血清中抗MG7抗体的效价;ELISPOT测定小鼠脾CTL活性.同时,用表达MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击2周,观察疫苗对小鼠的保护作用.结果: 成功制备了胃癌MG7-Ag的纳米疫苗,并具有较好的包封率和较好的稳定性,小鼠产生MG7抗体, ELISPOT检测包封组与对照组相比分泌IFN-γ的活性淋巴细胞数量明显增高.疫苗免疫组8只小鼠中有2只未见肿瘤形成, 而对照组8只小鼠则全部成瘤.结论: 胃癌MG7-Ag表位纳米疫苗具有免疫原性,可以诱导小鼠产生抗肿瘤免疫. 相似文献
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目的构建和鉴定携带有外源fat-1基因的转基因小鼠。方法将fat-1基因的cDNA与动物表达载体pEF—neo连接,构建pEF-fat-1重组质粒,酶切、测序鉴定正确后,以显微注射法把线性化重组质粒注射到小鼠受精卵的雄原核中,并将受精卵移植到受体鼠的输卵管中产出转基因小鼠,通过PCR、Southern blot杂交等方法确立阳性整合有目的基因的G0代小鼠。结果成功构建了pEF-fat-1重组质粒,将其显微注射到小鼠受精卵中,得到G0代小鼠,PCR、Southern blot杂交确立了4只整合有fat-1基因的首建鼠。结论fat-1基因可整合到小鼠体内,得到的转基因小鼠为研究fat-1基因的生物学功能提供了动物模型。 相似文献
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2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖影响 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 研究2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响。方法 应用MTT比色法观察2,3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞生长的抑制情况;流式细胞仪检测2,3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞周期分布的影响;Western blot方法观察其对细胞信号传导通路蛋白有丝分裂原激活的蛋白激酶(ERK)的作用,同时结合免疫细胞化学方法检测2,3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞caspase-3的影响。结果 2,3-吲哚醌能显著抑制SH—SY5Y细胞增殖,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;caspase-3蛋白表达随着药物浓度的升高逐渐增加;加2,3-吲哚醌后磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶蛋白(ERK1/2)相对表达量降低。结论 2,3-吲哚醌对SH—SY5Y细胞具有抗增殖作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期以及作用于细胞通路而实现的。 相似文献
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目的探讨体外水平利用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)敲减含激酶插入区受体(KDR)基因治疗乳癌的可行性和特异性。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000TM作为转染试剂,将针对人KDR基因的siRNA转染人乳癌细胞株MCF-7敲减KDR基因的表达。通过Hoechst 33258染色观察MCF-7细胞的凋亡情况;采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测NES1基因和RUNX3基因甲基化状态和mRNA的转录水平。结果靶向KDR的siRNA转染MCF-7细胞后可诱导细胞凋亡,NES1基因和RUNX3基因甲基化程度降低,出现非甲基化条带,同时mRNA表达上调。结论KDR siRNA在体外能逆转MCF-7细胞的NES1基因和RUNX3基因甲基化,并诱导细胞凋亡。 相似文献
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目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织新型抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)和p16的表达及其与肿瘤生物学行为的关系.方法 应用免疫组化SP法,对72例NSCLC组织及其癌旁组织RUNX3和P16蛋白表达进行检测.结果 RUNX3和P16的阳性染色均定位于细胞核,NSCLC组织RUNX3阳性表达率为30.... 相似文献
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目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)对小鼠乳癌4T1细胞凋亡的诱导作用及其对死亡受体(DR)蛋白表达的影响。方法 体外培养4T1细胞,应用MTT方法观察不同浓度的DHA对4T1细胞增殖活力的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术分析不同浓度DHA对4T1细胞凋亡率影响;采用Western blotting方法检测DR4、DR5和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的变化。结果 采用不同浓度DHA处理后,4T1细胞增殖活力较对照组显著下降(F=84.62,q=16.54~25.31,P<0.05);细胞凋亡率明显增高(F=287.68,q=32.74~56.58,P<0.05);DR5和TRAIL表达均明显上调(F=64.75、149.72,q=9.32~51.59,P<0.05)。结论 DHA可能通过DR途径抑制小鼠4T1乳癌细胞的生长,诱导其凋亡。 相似文献