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目的通过体内外实验探究血小板衍生生长因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)对川崎病(Kawasaki disease,KD)小鼠和人巨核细胞株Dami细胞生成血小板的作用及机制。方法ELISA检测KD及健康儿童各40例血清PDGF表达水平。C57BL/6小鼠构建KD模型,随机分为正常组、KD组、伊马替尼组,每组30只。检测各组血常规及PDGF-BB、巨核细胞集落形成单位(megakaryocyte colony forming unit,CFU-MK)、巨核细胞标记物CD41表达。采用CCK-8、流式细胞术、实时定量PCR、Western blot检测PDGF-BB对Dami细胞生成血小板的作用和机制。结果PDGF-BB在KD患儿血清中高表达(P<0.001)。KD组小鼠血清PDGF-BB高表达(P<0.05)、CFU-MK及巨核细胞标记物CD41表达增加(P<0.001);伊马替尼组CFU-MK及CD41表达减少(P<0.001)。体外实验结果显示,PDGF-BB促进Dami细胞增殖、血小板生成、PDGFR-βmRNA及p-Akt蛋白表达(P<0.05);联合组(PDGF-BB 25 ng/mL+伊马替尼20μmol/L)血小板生成、PDGFR-βmRNA和p-Akt蛋白表达少于PDGF-BB组(P<0.05)。结论PDGF-BB可能通过与PDGFR-β结合,激活PI3K/Akt通路,促进巨核细胞增殖、分化及血小板生成;PDGFR-β抑制剂伊马替尼可减少血小板生成,为KD血小板增多的诊疗提供了新的策略。 相似文献
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目的 建立SYBR Green Ⅰ FQ-PCR检测人外周血单个核细胞(PBMC)中miR-202表达的方法,并初步探讨其检测MM的意义.方法 采用特异miR-202茎环引物逆转录后,用FQ-PCR对21例MM患者及20名健康人PBMC中miR-202表达水平做相对定量分析;结果用Mann-Whitney法进行两组间miR-202表达差异比较.此外,用1份1∶125稀释标本重复检测5次;及同一标本连续检测3d,每天检测1次,每次重复5管,根据循环阈值(Ct)计算标准差和变异系数(CV),以评价所建方法的重复性.结果 FQ-PCR检测PBMC中miR-202的扩增曲线呈标准的S型,熔解曲线峰值单一,未见杂峰,显示其特异性较好.批内CV为1.2%,批间CV为3.2%,当标本miR-202浓度被稀释为12.8 pmol/μl时,仍可稳定地得到扩增曲线.FQ-PCR检测MM组中miR-202表达量为1.844(0.162 ~3.966),健康对照组表达量为0.014(0.007~0.221),MM组中miR-202表达明显高于健康对照组(U=48.000,P<0.01).结论 FQ-PCR是一种快速简便、特异性和重复性较好的检测miR-202的方法,MM患者PBMC中miR-202表达升高,其可能参与MM的发生过程,并有可能成为MM诊断和治疗的新指标. 相似文献
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目的探讨B淋巴细胞刺激因子(BAFF)及其特异性受体BAFF—R对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用流式细胞术(FCM)、RT—PCR、WesternBlot、荧光免疫细胞化学技术检测BAFF及其受体BAFF—R的表达与定位;wsT细胞增殖实验及TUNEL法检测BAFF及其受体BAFF—R对MM肿瘤细胞生长、存活与凋亡的影响。结果①MM细胞能够表达BAFF及其特异性受体BAFF—R;②BAFF及其受体BAFF—R定位表达于KM3细胞的浆膜上;③BAFF及其受体BAFF—R促进MM细胞的增殖、存活,抗细胞凋亡。结论BAFF及其受体BAFF—R对于骨髓瘤发生、发展可能起着重要的作用。 相似文献
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目的 研究B淋巴细胞刺激因子受体(BAFF-R)介导的NF-κB信号通路在多发性骨髓瘤(MM)中的作用,并进一步研究NF-кB信号通路对MM细胞存活的影响。 方法 应用Western blot法分析BAFF-R对NF-κB信号通路相关蛋白的激活情况;同时通过RT-PCR、ELISA、WST-1检测NF-κB信号通路抑制剂(BAY11-7082)干预前后BAFF-R mRNA和蛋白表达水平以及对MM细胞增殖的影响。 结果 BAFF-R阻断性抗体(0、1、5和15μg/ml)能够减少p52和p65蛋白的入核,增加IκB-α蛋白表达量,即BAFF-R能够激活NF-κB信号通路。BAY11-7082(1、2和4μmol/L)显著降低BAFF-R mRNA、蛋白表达水平,减少MM细胞增殖和存活。 结论 BAFF-R激活NF-κB信号通路促进多发性骨髓瘤细胞的增殖及存活,进而参与多发性骨髓瘤的发生、发展。 相似文献
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目的以B淋巴细胞刺激因子受体BAFF-R基因5'上游区序列为研究对象,初步鉴定、分析该基因的启动子所在区域。方法克隆BAFF-R基因5'侧翼区1823 bp序列,构建8个含有不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-B1~B8,将这8个序列缺失重组质粒与psv-β-gal质粒共转染细胞,检测荧光素酶的相对活性,确定启动子所在区域。结果8个重组质粒中pGL3-B2、pGL3-B3、pGL3-B5、pGL3-B6启动子的活性较低;pGL3-B7启动子的活性最强,pGL3-B8启动子活性最低。结论BAFF-R基因5'端-288~-430、-712~-868和-1420~-1562三个区段可能存在转录沉默子元件,-617~-712和-1277~-1420区段存在转录增强子元件,BAFF-R基因的核心启动子可能位于-1420~+261区域。 相似文献
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目的:建立基于实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测血清长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)zinc finger antisense 1(ZFAS1)的方法,应用该技术检测胃癌(gastric cancer, GC)患者、胃良性病变患者及健康体检者血清ZFAS1相对表达水平,探讨血清ZFAS1对GC辅助诊断的应用价值。方法:随机采集南通大学附属医院经病理确诊的94例GC患者(其中包括初诊患者54例,术后患者35例和复发/转移5例)、20例胃良性病变患者的血清标本,同期匹配47例年龄相仿的健康体检者血清标本进行对比分析。通过qRT-PCR检测血清ZFAS1的相对表达水平,并评价其线性、重复性及特异性;分析血清ZFAS1表达与GC患者临床病理参数的相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC曲线)评价血清ZFAS1、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)及糖类抗原19-9(carbohydrate antigen19-9, CA19-9)单独及联合检测对GC的诊断价值。结果:检测血清ZFAS1含量的qRT-PCR方法线性良好,重复性较好,特异性较高,熔解曲线单峰特异。GC初诊患者血清ZFAS1的表达水平显著高于良性病变组、正常对照组(P<0.001);GC患者术后血清ZFAS1显著低于术前(P<0.01);GC初诊患者血清ZFAS1含量与患者肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05);ROC曲线分析显示,ZFAS1、CEA、CA19-9单独作为诊断指标时,ROC曲线下面积分别为0.816 4、0.658 8、0.556 3,三者联合诊断可提高诊断灵敏度。结论:血清ZFAS1在GC辅助诊断及术后病程监测中发挥作用。 相似文献
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目的探讨micorRNA-335(miR-335)表达及甲基化水平在多发性骨髓瘤(MM)诊断中的应用。方法用荧光定量PCR检测43例MM患者和30例体检健康者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-335的表达水平,用甲基化特异性PCR(MSP)检测miR-335启动子区甲基化水平,分析其与各临床指标的相关性。结果 43例MM患者PBMC中miR-335的表达水平为34.8(15.3,84.9),显著低于健康对照组的269.4(63.3,780.2),Z=4.384,P0.05。11例MM患者(25.6%,11/43)呈现完全甲基化,其余患者均为部分甲基化,而23例体检健康者(76.7%)呈现完全非甲基化(Uc=6.62,P0.05)。初诊MM患者miR-335表达量高于复发/进展期患者(Z=2.309,P0.05),但复发/进展期患者中miR-335启动子区甲基化程度(75%)高于初诊患者(25%),T=24.5,P0.05。MM患者miR-335表达水平与轻链λ浓度呈相关性(r=0.51,P0.05)。结论 MM患者miR-335表达水平和甲基化可作为MM潜在的辅助诊断指标。 相似文献