B族链球菌C5a肽酶蛋白表位的克隆、表达和免疫学分析

目的应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白表位，结合基因工程手段进行表位重组、表达和免疫原性分析。方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测B族链球菌C5a肽酶蛋白的表位，应用PCR技术扩增出编码该表位基因片段，克隆PCR产物构建重组质粒，测序验证。在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达融合蛋白。表达的蛋白经质谱分析和Western blot鉴定。纯化该融合蛋白并免疫C57／BL小鼠，萃取GBS表面蛋白，双向琼脂扩散试验检测抗体水平。结果在SCPB中预测到1个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段。重组和表达了这一肽段，质谱得出与SCPB蛋白的相似性分数为79，Western-blot证实能与抗SCPB的抗体反应，纯化后融合蛋白纯度〉90％。动物实验证实融合蛋白能产生特异性的抗GBS抗体。结论重组表位具有一定免疫原性。为相关蛋白的毒力机制研究和亚单位疫苗等方面的研究打下了良好的基础。     

儿童社区获得性呼吸道感染的肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药性监测

目的监测2000-2004年连续5年5岁以下呼吸道感染患儿鼻咽拭子分离的肺炎链球菌和流感嗜血杆菌对抗菌药物的耐药性.方法采用E试验和K-B纸片法对临床分离541株肺炎链球菌、521株流感嗜血杆菌进行抗菌药物耐药性测定.结果肺炎链球菌对青霉素不敏感率由2000年的22%增加到2004年的32.9%,P＜0.05;对头孢呋辛和头孢克洛不敏感率由7%增加到25%左右,P＜0.01;对红霉素不敏感率由88%增加到94.3%,P＞0.05;对四环素和复方磺胺甲噁唑不敏感率分别为90%以上和80%以上.流感嗜血杆菌对氨苄西林耐药率和产β内酰胺酶率由2000年的5.0%增加到2004年的14.3%,P＜0.05;对阿莫西林-克拉维酸、头孢曲松和头孢呋辛非常敏感;对头孢克洛不敏感率由2%增加到14.3%,P＜0.01.结论肺炎链球菌对青霉素不敏感率和流感嗜血杆菌对氨苄西林耐药率和产β内酰胺酶率呈明显上升趋势.     

儿童肺炎链球菌对β-内酰胺类、大环内酯类和氟喹诺酮类抗菌药物敏感性研究

目的了解2002 2004年北京儿童医院门诊5岁以下呼吸道感染儿童鼻咽拭子中分离出的肺炎链球菌,对β-内酰胺类、大环内酯类和氟喹诺酮类抗菌药物的耐药性。方法使用E试验法(E-test)对114株肺炎链球菌进行抗菌药物的敏感性试验。结果114株肺炎链球菌对青霉素不敏感率为36%,对阿莫西林/棒酸全部敏感,对头孢菌素中头孢曲松不敏感率为6.1%,头孢呋辛为30.7%,头孢克洛为29%,大环内酯类耐药率在90%左右,全部菌株对氟喹诺酮类敏感。结论儿童肺炎链球菌对青霉素和头孢二代抗菌药物不敏感率为29%~36%,对大环内酯类耐药在90%左右,未发现对氟喹诺酮类耐药菌株。     

murM基因变异与肺炎链球菌青霉素高度耐药及头孢曲松耐药的相关性

目的　研究肺炎链球菌murM基因变异与青霉素及头孢曲松耐药的相关性。方法　应用PCR技术扩增肺炎链球菌murM基因并进行基因测序。选取肺炎链球菌株 5 5株 ,包括青霉素敏感株 10株 (MIC≤ 0 .0 6 μg/ml) ;青霉素耐药株 4 5株 ,其中低水平耐药 10株 (MIC 0 .12～ 1μg /ml) ,高水平耐药 35株 (MIC≥ 2 μg/ml) ,在青霉素高水平耐药菌株中 ,对头孢曲松耐药 13株 (MIC≥ 2 μg/ml)。用敏感株R36AmurM基因序列作为比较标准。结果　 5 5株肺炎链球菌murM基因PCR产物测序结果 ,16株murM基因发生显著变异 (变异率≥ 3% ) ,1株青霉素MIC 3μg/ml、头孢曲松MIC 2 μg/ml的菌株 ,其murM基因变异率 3.4 % ;15株青霉素MIC≥ 8μg/ml或头孢曲松MIC≥ 2 μg/ml的菌株 ,murM基因变异率达 10 % ,呈嵌合式变异。murM基因变异与肺炎链球菌青霉素及头孢曲松MIC显著相关 (χ2 =36 .5 32 ,P <0 .0 1;χ2 =37.116 ,P <0 .0 1)。结论　肺炎链球菌murM基因变异与青霉素高度耐药 (MIC≥8μg/ml)及头孢曲松耐药 (MIC≥ 2 μg/ml)有显著的相关性。     

B族链球菌表面蛋白Sip的制备及其免疫原性的研究

20世纪70年代以来，B族链球菌（Group B Streptococcus，GBs）成为引起新生儿感染的首位原因。疫苗是预防GBS疾病简便有效的方法，传统的荚膜多糖疫苗及单一的荚膜多糖结合疫苗因其保护作用范围有限而使其应用受到限制。用GBS表面保守的蛋白作为疫苗成分可能会对多种血清型GBS的感染提供保护作用，因此引起人们的关注。     

B族链球菌普通和选择性培养基的比较

Ｂ族链球菌（ＧＢＳ）是孕妇生殖道主要携带菌之一。孕妇生殖道有多种细菌存在,在普通培养基中这些细菌生长速度快,常使比较娇嫩ＧＢＳ菌生长受到抑制,造成ＧＢＳ菌漏检。我们在普通培养基（ＴＨＢ）基础上,加入结晶紫、萘啶酮酸、多粘菌素,其目的为抑制其他细菌生长,而不影响ＧＢＳ生长,其结果报告如下。一、材料１－菌株来源：标准ＧＢＳ族和Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ⅱ、Ⅲ型菌株由俄罗斯圣彼得堡实验医学研究所提供。临床分离１０株ＧＢＳ和凝固酶阳、阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、变形杆菌、绿脓假单胞菌各１株均为北京儿童医院微生物室…     

前降钙素对新生儿重症感染的诊断价值

目的评价前降钙素(procalcitonin,PCT)对新生儿重症细菌感染的诊断价值。方法应用免疫发光法对30例重症感染新生儿和30例非感染对照组病人在入院时进行血清PCT的定量检测,并与C反应蛋白(CRP)和白细胞计数(WBC)进行比较。同时检测其敏感度、特异性、预计值和ROC曲线下面积(AUC)。结果重症细菌感染病人在入院时血PCT质量浓度明显增高(中位数7.82μg/L,范围0.97~256.81μg/L),而非感染对照组为0.16μg/L(0.10~1.49μg/L)。PCT、CRP和WBC的ROC曲线下面积分别为0.99、0.62和0.60。预计重症感染的最佳截断值为:PCT>2μg/L(敏感度87%、特异性和阳性预计值100%、阴性预计值88%);CRP>20 mg/L、PCT>0.9μg/L时,敏感度和阴性预计值为100%,可以确诊所有重症细菌感染病人。结论重症感染新生儿入院时的PCT血质量浓度是优于CRP和WBC的细菌感染诊断指标。     

提高对未来发展机遇的掌控能力

不久前,笔者参加了在哈佛大学公共卫生学院举办的卫生发展与改革高级国际研修班,看到了美国及其他发达国家在医疗卫生发展中的新理念、新思路、新方法,这对我们提高对未来发展机遇的掌控能力,有很大的帮助。