PCR-SSP法HLA-A、B基因分型与血清学分型的比较

目的比较聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)进行HLA-Ⅰ类A、B抗原位点分型的准确性,并探讨血清学分型错误发生的原因。方法用PCR-SSP以及单克隆抗体血清学分型技术对HLA-A、B分型并比较。结果34例样本PCR-SSP基因分型无假阳性和假阴性出现。PCR-SSP法与血清学比较,血清学检出错误或漏检率分别为HLA-A位点23.5%,B位点26.5%。血清学发生错误或易混淆的抗原有:A2和A68、A32和A33,B5、B60和61。结论PCR-SSP法进行HLA-A、B抗原等位基因分型具有分辨率高、特异性强、重复性好、实验过程简捷快速、分型结果较血清学更加准确可靠的优点。     

HLA-Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析

目的验证微量序列特异性引物(SSP)技术进行HLA-Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法采用聚合酶链反应结合微量SSP技术(简称微量PCR-SSP法)以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果(1)微量PCR-SSP法检测的110例样本中,99例检出HLA-DR的396个等位基因、11例检出HLA-DQ的22个等位基因,检出10%的单倍型个体;(2)两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误或漏检率较高,其误差在DR和DQ分别为38.81%和50.75%;(3)错误发生和易混淆的抗原为:DR15/16、11/12、13/14、8、12和DQ5/6、8/9。结论微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。     

人脐血造血干细胞深低温保存效果观察

人脐血造血干细胞深低温保存效果观察朱为国，邢献志，吴霭，武大林迄今为止，未见到－８０℃保存人脐带血造血干细胞（ＣＢＳＣ）的报道。若能应用－８０Ｃ冰箱较长时间有效地保存ＣＢＳＣ，将有利于ＣＢＳＣ移植的广泛推广使用。我们探讨了－８０℃冰箱保存ＣＢＳＣ的可...     

地中海贫血家系婚配与出生缺陷干预

近亲婚配与出生缺陷密切关联这是众所周知的。地中海贫血(以下简称地贫)是有多种遗传决定的异常情况，其特征是某种血红蛋白链合成减少或缺乏，根据哪一种血红蛋白链缺乏或减少，地贫可进一步分为α、β、δ、γ和εγδβ型。     

华南、华北人群HLA-DQB1等位基因多态性

目的从基因水平调查了中国华南、华北地区人群HLA-DQB1等位基因频率，并研究比较两地区人群HLA-DQB1多态性分布。方法采用深圳益生堂生物企业有限公司研制开发的“HLA-DQB1低分辨率分型基因芯片检测试剂盒”，应用聚合酶链反应．序列特异性引物＋序列特异性寡核苷酸探针芯片检测技术，对700名南方地区的中国人和320名北方地区的中国人进行基因分型。结果鉴定了10个HLA-DQB1等位基因，获得了一组准确、科学的统计数据。结论得到了中国华南、华北地区人群HLA-DQB1等位基因频率差异的数据，证明中国人群HLA-DQB1＊02，05，0601，0602，0603的分布南北差异有统计学意义（P〈0．05），为疾病相关性研究、人文科学研究提供了可靠的遗传学数据。     

播散性马尔尼菲青霉病致死一例

马尔尼菲青霉病国内文献已屡有报道，但仍常有漏诊或误诊。漏诊原因是临床表现像肺结核、败血症或恶性网织细胞增多症等；误诊原因是它主要侵犯肺、肝、脾、淋巴结和骨髓及组织中的菌体形态、大小与主要位于巨噬细胞内等特点酷似荚膜组织胞浆菌。主要鉴别是该菌特有的腊肠样长形菌体及个别菌可见横隔。马尔尼菲青霉病散发流行于我国南方和东南亚各国。各种原因的免疫力低下易感染该病，并已成为东南亚各国获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的常见并发症。治疗深部真菌有效的药物均适用治疗本病，但要持续治疗半年以上方免复发。今介绍播散性马尔尼菲青霉病一例，以帮助读者认识及诊断马尔尼菲青霉病。     

HLA组织相容性对1例心脏移植存活的影响

急、慢性排斥反应是心脏移植术后最常见的并发症,是术后移植心脏功能丧失、危及患者生命的主要原因.通过联合应用免疫抑制剂来抗排斥反应,取得了较好效果,但也带来感染,肝、肾功能损害,骨髓抑制等严重并发症.为了解决这一难题,笔者在心脏移植术前对供、受者人类白细胞抗原(HLA)组织相容性进行检测并选择与受者组织相容性好的供心,效果良好,现报告如下.     

改良一步法微量淋巴细胞毒交叉试验的应用分析

淋巴细胞毒交叉试验也称补体依赖细胞毒试验(Complement-Dependent Cytotoxieity,CDC),它是检查受者体内有无针对供者(主侧)或者供者针对受者(次侧)的淋巴细胞抗体,器官移植前一定要做CDC。如果受体血清中检出针对供体的淋巴细胞抗体,一般认为是配合禁忌,移植后受体会发生超急性排斥反应,导致移植失败。由于CDC是器官移植术前临时匹配的试验,要求在短时间内报告结果,因此笔者对该技术作了改良并与传统方法进行比较,收到满意效果,现报告如下。     

中国华南地区慢性乙型肝炎患者HLA-A等位基因分布的初步调查及其意义

目的 了解中国华南地区慢性乙型肝炎(CHB)患者HLA-A11、A2、A24、A33等位基因的分布状况,并为筛选HBV特异性CTL新表位提供必要背景资料.方法 以267例CHB患者和300例健康献血员为研究对象,提取其外周血染色体基因组DNA,用PCR-SSP法进行HLA-A11、A2、A24、A33等位基因检测型,并进行统计学比较.结果 CHB组HLA-A11、A2、A24、A33的基因频率分别为57%、41%、21%、7%,以HLA-A11最常见,较HLA-A2的基因频率高16%.健康对照组四种HLA-A等位基因的频率分别为57%、46%、24%、14%,HLA-A11较HLA-A2的频率高¨%.HLA-A33的频率在两组间有显著差异(x2=7.556,P=0.006).CHB组HLA-A2/A11、A2/A24、A2/A33、A11/A24、A11/A33、A24/A33的基因频率分别为17%、4%、1%、16%、4%、0.4%,健康人群则为18%、8%、4%、11%、5%、1%,各种基因组合的出现率在两组间近似.HBeAg( )与HBeAg(-)CHB组比较,HLA-A11(x2=3.324,P=0.072)、A2(x2=0.324,P=0.569)、A24(x2=0.308,P=0.579)、A33(x2=1.159,P=0.282)等位基因的频率分布在两组间无显著性差异.结论 中国华南地区CHB患者和健康人群的主要HLA-A等位基因均为HLA-A11、A2、A24及A33,以HLA-A11最为多见,提示鉴定HLA-A11限制性HBV特异性CTL新表位具有十分重要的意义;此四种等位基因及其组合模式与CHB患者的HBeAg状态无明显相关,但与HBV感染的其他临床特点及抗病毒治疗应答之间的关系有待研究.     

实时荧光定量PCR检测外周血TREC的方法研究

目的建立及优化检测移植后患者外周血TREC拷贝数的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）的方法及实验影响条件，为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础。方法在ABI7000 PCR仪上实时扩增检测构建的TREC质粒标准品，摸索最佳扩增条件及建立标准曲线，然后用优化的FQ-PCR方法检测临床样本。结果T3、T4引物和R3、R4引物的扩增效率分别优于T1、T2引物和R1、R2引物。TaqMan-MGB探针比普通的TaqMan探针扩增效率高。金牌热启动Taq酶，比较普通Taq酶而言。提高了PCR的特异性和敏感性。FQ-PCR的反应条件设定：95℃10min后95℃5s，53℃30s，40循环结束。结论通过摸索与优化实验条件，建立了实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中TREC的方法。