慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究

目的　观察慢病毒载体（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒ,ＬＶ）介导ＴＬＲ２基因干扰大鼠角膜上皮细胞（ｃｏｒｎｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＣＥＣ）和基质细胞（ｃｏｒｎｅａｌｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ,ＣＳＣ）的有效性和安全性。方法　分别培养大鼠ＣＥＣ和ＣＳＣ,转染组用携带绿色荧光蛋白（ｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ｅＧＦＰ）和ＴＬＲ２小干扰ＲＮＡ（ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＲＮＡ,ｓｉＲＮＡ）的ＬＶ转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的ＬＶ。转染组按最佳感染复数（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ,ＭＯＩ）分别为１０、５０、１００、２００加入ＬＶ-ＴＬＲ２-ｓｉＲＮＡ-ｅＧＦＰ,选择ｅＧＦＰ表达最强的ＭＯＩ进行后续实验,观察细胞形态,ＣＣＫ８检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,ＲＴ-ＰＣＲ检测转染后ＴＬＲ２ｍＲＮＡ的表达情况。结果　ＭＯＩ＝２００时转染ＣＥＣ和ＣＳＣ荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;ＣＣＫ８结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的ＩＯＤ值差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;流式细胞仪检测ＣＥＣ和ＣＳＣ转染效率分别为７７．６００％ ±１．１００％和７６．３００％ ±１．３８７％,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。ＲＴ-ＰＣＲ检测转染后ＣＥＣ和ＣＳＣＴＬＲ２ｍＲＮＡ相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。结论　ＬＶ-ＴＬＲ２-ｓｉＲＮＡ-ｅＧＦＰ可在体外稳定有效转染ＣＥＣ和ＣＳＣ,且对细胞安全性无影响,可有效下调ＴＬＲ２ｍＲＮＡ的表达。     

经鼻塞式持续气道正压通气治疗新生儿呼吸窘迫综合征患儿的效果分析

目的探讨经鼻塞式持续气道正压通气治疗新生儿呼吸窘迫综合征患儿的效果。方法对佛山市妇幼保健院2016年9月-2017年9月间70例新生儿呼吸窘迫综合征患儿进行研究,根据通气方式分为鼻塞组(n=35)和传统组(n=35),鼻塞组进行经鼻塞式持续气道正压通气治疗,传统组进行鼻导管或面罩吸氧,分析总结两种通气方式的运用效果。结果鼻塞组患儿治疗24 h后Pa O2(73.8±6.7)mm Hg、p H(7.3±0.1)与传统组(64.2±7.8)mm Hg、(7.2±0.1)相比显著升高,Pa CO2水平(44.8±5.8)mm Hg与传统组(49.5±6.2)mm Hg相比显著降低(P=0.000、0.002、0.000)。鼻塞组患儿通气时间(25.3±5.1)h、住院时间(22.1±4.2)d、住院费用(2.1±1.4)元与传统组(31.2±5.6)h、(28.5±4.6)d、(2.8±1.1)元相比显著降低(P=0.000、0.000、0.023)。鼻塞组患儿并发症发生率8.6%与传统组31.4%相比显著降低(P=0.017),差异具有统计学意义。结论经鼻塞式持续气道正压通气治疗新生儿呼吸窘迫综合征,效果显著。