人生长激素真核细胞瞬时表达及活性鉴定

目的　研究人生长激素真核细胞表达质粒在COS 1细胞的瞬时表达及活性鉴定。方法　将重组pcDNA3 GHcDNA用脂质体转染COS 1细胞 ,用免疫组织化学和ELISA法分别检测细胞和培养上清中生长激素(GH)的表达情况 ,用Jurkat细胞增殖法测定其生物活性。结果　重组真核细胞表达质粒pcDNA3 GHcDNA转染的COS 1细胞分泌高浓度GH ,且具有明显的促进Jurkat细胞增殖能力。结论　pcDNA3 GHcDNA能够高效表达有活性的GH ,这对进一步研究GH体内过量表达对免疫功能的影响奠定基础     

体外培养新生大鼠心肌细胞的形态及其增殖能力

目的:心脏组织中心肌细胞增殖分化转变发生于出生后3～4d,有细胞周期调控机制的参与。观察新生大鼠心室肌细胞培养过程中细胞形态学和细胞周期素E表达的变化规律。方法:实验于2005-01/2006-03在新乡医学院解剖学与组织胚胎学重点学科实验室完成。①实验材料:1日龄Wistar大鼠20只,体质量7～10g。②实验方法及评估:心肌细胞分离、纯化及培养后用倒置显微镜观察其形态变化,免疫细胞化学染色及图像分析方法检测培养第1～53天新生大鼠心室肌细胞周期素E的表达。结果:纳入大鼠20只,均进入结果分析。①培养心肌细胞4h后贴壁,偶见单个细胞开始自发性搏动,部分细胞为梭形;以后细胞变为双核细胞,三角形或柱形细胞。第3天细胞聚集成片并同步搏动,第10天搏动频率最快,之后搏动频率逐渐减慢。②心肌细胞周期素E位于细胞核和核周的胞浆中。培养1～3d染色较深,以后逐渐变浅。③心肌细胞核内细胞周期素E表达量逐渐下降,第2天与第1天比较,差异无显著性(P>0.05)。从第3天开始差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:新生大鼠心肌细胞出生后早期体外培养的前3天有一定增殖能力,但以后呈下降趋势。细胞周期素E表达下调与心肌细胞增殖能力降低呈正相关。