巨细胞病毒感染对调节性T细胞和Ⅰ型、Ⅱ型辅助性T细胞分化增殖的影响

目的定量检测巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）感染小鼠脾细胞调节性T细胞（Treg）、辅助性T细胞1型和2型（Th1/Th2）特异性转录因子Foxp3、T-bet和GATA-3mRNA水平的动态变化,探讨MCMV在急慢性感染期对Treg、Th1和Th2细胞分化增殖的影响及其意义。方法建立MCMV全身播散型感染模型,根据主要脏器内病毒滴度,确定感染后28d为本模型急、慢性期界定点。42只模型鼠分别于接种病毒后第1、3、7、14、28、45、60天各处死6只小鼠,分离脾细胞,以灭活MCMV抗原为刺激原,体外培养5d,另设42只正常小鼠作为模拟感染对照。用Real-timeRT-PCR法检测小鼠脾细胞Foxp3、T-bet和GATA-3mRNA表达强度。结果MCMV感染组第7天T-betmRNA表达显著增高达峰值,与模拟感染对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,随后下降,到第28天降到对照组相当水平,至第60天显著低于对照组（P〈0.01）;而GATA-3mRNA在感染后第3天表达开始升高,第7天达峰值,第14天开始缓慢下降,但至第60天仍显著高于对照组（P〈0.05）;Foxp3mRNA表达在感染后14天明显低于对照组,第28天显著降低（P〈0.01）,但至第45天开始明显上调,第60天升高更显著（P〈0.01）。结论在感染急性期,Treg未被诱导活化,宿主产生有效Th1/Th2应答反应,但随后逐渐下降,并向Th2偏移;在感染慢性期,Treg细胞增殖活化显著,进一步抑制Th1和Th2反应,且对Th1抑制效应更强,提示CMV诱导Treg细胞增殖活化是其抑制宿主抗病毒免疫而呈持续慢性感染的重要原因。     

大蒜新素对巨细胞病毒感染小鼠细胞因子TGF-β1的影响

目的 探讨大蒜新素对全身播散型小鼠巨细胞病毒（MCMV）感染模型鼠转化生长因子β1（TGF-β1）基因转录和蛋白表达的影响. 方法建立MCMV全身播散型感染BALB/c小鼠模型, 将60只模型鼠随机分为安慰药组和大蒜新素（25 mg•kg^-1•d^-1）治疗组, 并设60只同期模拟感染小鼠为对照, 随机分为模拟对照组和大蒜新素对照组, 每组30只. 于药物治疗后1, 3, 7, 14和28 d获取血清和脾细胞（体外培养刺激物为灭活MCMV抗原）. 用双抗体夹心ELISA法检测血清和脾细胞培养上清TGF-β1水平;用逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）法检测脾细胞TGF-β1mRNA表达强度. 结果安慰药组在治疗后3 d血清TGF-β1水平即显著上升达高峰, 随后逐渐下降, 但至28 d仍明显高于模拟对照组;其脾细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达变化一致, 均在治疗后3 d明显增高, 7 d达高峰, 28 d回落到稍高于模拟对照组水平. 与安慰药组比较, 大蒜新素治疗组3 d后血清和脾细胞培养上清TGF-β1水平均有降低, 以治疗后3～7 d差异最为显著;而脾细胞TGF-β1mRNA表达与大蒜新素对照组相近. 结论MCMV在急性感染期可诱导免疫抑制因子TGF-β1基因转录和蛋白表达明显增高, 而大蒜新素治疗可完全阻遏病毒诱导的脾细胞TGF-β1基因转录, 并明显降低模型鼠血清和脾细胞TGF-β1表达水平.