Fas和mdr-1在急性白血病的表达及其相关性研究

本研究应用流式细胞仪 (FCM)直接免疫荧光法和半定量RT PCR方法分别测定 5 9例初发急性白血病(AL)患者治疗前及完全缓解 (completeremission ,CR)后骨髓Fas和mdr 1mRNA表达情况 ,旨在探讨Fas和mdr 1在AL的表达及二者在多药耐药 (multidrugresistance ,MDR)中的相关性。结果显示 :Fas在初发AML阳性表达率比ALL高 ,两表达率间有差异 (P <0 .0 5 ) ,mdr 1在AML和ALL阳性表达率间无差异 (P >0 .0 5 ) ,Fas 与mdr 1 有负相关性 (r =- 0 .2 82 ,P <0 .0 5 ) ;经单因素及多因素COX分析 ,Fas和mdr 1独立于其他参数 ,更具判断预后价值 ;在Fas 与Fas-的AML和AL ,CR率均有显著性差异 (P <0 .0 1) ,在mdr 1 、mdr 1-的AML和AL中的CR率有显著性差异 (P <0 .0 1) ;经Logrank检验 ,Fas 与Fas-组CR率及中数缓解时间有显著性差异 (χ2 =7.35 ,P =0 .0 0 6 7) ,mdr 1 与mdr 1-组CR率及中数缓解时间有显著性差异 (χ2 =10 .71,P =0 .0 0 11)。结论 :Fas、mdr 1与疗效高度相关 ;Fas阳性表达可能是AL预后良好因素 ;mdr 1为疗效差、预后不良的重要因素。     

环孢素A对急性淋巴细胞白血病细胞P-糖蛋白表达及抑制功能的研究

应用可以干扰P-糖蛋白(P—gp)功能的药物，如环孢素A(CsA)等逆转剂，这些药物与P—gp连接，从而阻止抗癌药物的排泄，这样就增加了表达P—gp的细胞内抗癌药物的浓度，而不增加P—gp^-急性髓系白血病(AML)细胞或敏感细胞内抗癌药物的浓度。本研究CsA对6例初治和15例难治复发急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓白血病细胞P-gp的表     

儿童RRTIsT细胞亚群和NK细胞的变化分析

目的了解3～6岁儿童反复呼吸道感染（RRTIs）T细胞亚群及自然杀伤细胞（NK）的变化,指导临床预防用药,避免过度以及不当治疗。方法严格按照入选标准和剔除标准收集3～6岁儿童160例,其中：病例组73例,对照组87例。采用病例对照研究。用流式细胞仪对病例组和对照组分别进行T细胞亚群、NK细胞的检测,并对有关数据进行统计分析。结果对T细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋）进行两独立样本的Wilcoxon秩和检验,结果表明：CD3＋（Z=-1．588,P=0．112）、CD4＋（Z=-0．541,P=0．588）、CD8＋（Z=-0．733,P=0．463）、CD4＋／CD8＋（Z=-0．315,P=0．753）病例组和对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。对NK细胞（CD3-CD16＋CD56＋）进行t＋检验（t＇=2．779,P=0．006〈0．05;95％CI：0．674～4．003）,病例组和对照组比较差异有统计学意义。结论对RRTIs儿童检测T细胞亚群与NK细胞具有显著的临床指导意义,可避免过度使用免疫调节剂引起的用药不当。     

不同培养方法骨髓破骨细胞样细胞分化及活性的实验观察

目的研究不同骨髓细胞培养方法对大鼠破骨细胞样细胞(OLC)诱导分化及活性的影响。方法大鼠骨髓细胞以巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)作用后与核因子!B受体活化因子配体(RANKL)协同诱导OLC分化,采用全骨髓细胞(A组)及密度梯度离心后骨髓单个核细胞(B组)两种培养方法,通过倒置相差显微镜及细胞染色观察两组OLC分化数量的差异,通过骨吸收陷窝分析及OLC膜表面整合素#3(CD61)表达量比较两组OLC活性的差异。结果B组培养5、7d抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性多核OLC数量及TRAP活性均高于A组,骨吸收陷窝计数亦较A组为多,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);陷窝面积比培养早期两组比较差异无统计学意义,7d时B组大于A组,差异有统计学意义(P<0.01);OLC膜表面CD61表达量及平均荧光强度0及3d时B组均较A组明显增高,随培养时间延长组间比较差异无统计学意义。结论低转速、短时间密度梯度离心后骨髓细胞培养诱导OLC分化获得的细胞数量较多且不影响其活性,是一种简便有效的OLC培养方法。     

FBL3细胞在小鼠体内外诱导CD4+CD25+调节性T细胞增殖的实验研究

目的：通过小鼠体内外实验观察肿瘤细胞是否可以诱导CD4^＋CD25^＋Treg的分化增殖。方法：将小鼠的红白血病瘤细胞系FBL3接种于C57BL/6小鼠腹壁皮下,流式细胞仪检测小鼠外周血、脾脏及瘤组织CD4^＋CD25^＋Treg细胞含量,RT-PCR检测小鼠脾脏及瘤组织Foxp3 mRNA的表达;体外实验检测FBL3细胞培养上清液对小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg细胞的作用。结果：荷瘤鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg比例与正常鼠比较无统计学差异（P〉0.05）,但荷瘤鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg比例显著高于正常对照（P〈0.01）,荷瘤小鼠脾脏组织Foxp3 mRNA的表达量明显增加;体外实验表明FBL3培养上清液促使CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例增高,并诱导Foxp3 mRNA表达增加。结论：FBL3细胞及其分泌的可溶性物质能诱导CD4^＋CD25^＋Treg细胞的增殖,说明是肿瘤的发生促进了CD4^＋CD25^＋Treg增高。     

FLT3 I836/M837位三碱基缺失的急性髓系白血病1例报告

FLT3属型受体酪氨酸酪激酶成员,对造血发育起重要调节作用。近年研究发现急性髓系白血病(AML)患者常带有FLT3突变,其中内部串联重复(FLTE-ITD)约占成人急性AML20%,酪氨酸激酶结构域(TKD)点突变约占7.7%,常位于D835及其附近。关于FLT3D835/I836缺失突变国外偶见报道[1],国内尚未     

流式细胞仪检测IgA肾病患者尿巨噬细胞的临床意义

目的:研究尿巨噬细胞含量与IgA肾病(IgAN)患者肾脏功能损伤程度的关系。方法:用流式细胞仪(FCM)测定30例IgAN患者尿巨噬细胞含量,并与肾脏功能损伤程度进行对照。结果:轻度肾功能损伤组尿巨噬细胞含量为(10.5±2.7)%,中、重度肾功能损伤组尿巨噬细胞含量为(24.1±3.6)%,中、重度肾功能损伤组尿巨噬细胞含量明显高于轻度肾功能损伤组(P<0.05)。结论:尿巨噬细胞含量检测可作为协助判断IgAN肾功能损伤程度的指标之一。     

下调WT1基因对K562细胞血管内皮生长因子表达的影响

 目的　探讨WT1基因沉默对人类白血病细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法　将已构建的WT1小发夹RNA（shRNA）质粒载体转染入K562细胞，流式细胞术检测转染效率并对转染细胞进行分选，实时荧光定量PCR检测细胞转染前后WT1及VEGF基因mRNA的表达变化，用ELISA检测转染前后细胞培养液中VEGF浓度的变化。结果　转染48 h，WT1shRNA质粒转入K562细胞，转染效率为（65±4.5）%，通过流式细胞术分选，可以得到纯度达98 %以上的WT1shRNA阳性细胞，转染后的K562细胞WT1及VEGF基因mRNA表达较转染前及对照组均明显降低（P＜0.05），转染后48、72 h细胞培养液中VEGF的含量较对照组明显降低（P＜0.05）。结论　WT1干扰质粒在体外可以抑制白血病细胞株VEGF的表达，提示WT1基因可能通过上调VEGF基因的表达而参与白血病的血管新生。     

高危型HPV监测评估宫颈电环切术治疗宫颈上皮内瘤样病变

目的：探讨宫颈电圈环行切除术（LEEP）治疗宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）疗效，特别是高危型入乳头瘤病毒感染（HPV）是否消失，以此评估该治疗方法对CIN治疗的有效性。方法：对56例超薄液基细胞学（TCT）涂片异常并经阴道镜检病变小于2cm，组织学检查证实为CIN1～3的妇女实行了宫颈电圈环行切除术（LEEP），治疗后3个月随诊时再次行TCT检查并采用HC-2法检测高危型HPV。结果：①CIN1组HPV转阴率为72．5％（29／40），病变残留（切缘阳性）率为5％（2／40），病变残留与HPV持续阳性成正比。②CIN2～3组HPV转阴率为44％（7／16），病变残留率为31％（5／16），病变残留与HPV持续阳性成正比。③CIN1组治疗后HPV阴转率及病灶彻底切除率均高于CIN2～3组，经统计学处理有显著意义。结论：①高危型HPV感染率与CIN程度成正比，在CIN2～3中高于CIN1。②LEEP不仅可以有效的治疗CIN1，而且可以使其伴行的HPV感染消失；③LEEP治疗部分CIN2～3尚不够充分，应加大宫颈组织的切除范围和深度。④LEEP治疗后残留病变和HPV持续阳性密切相关；⑤TCT和HPV检测不仅可以评价宫颈疾病治疗效果而且可以作为CIN治疗后追踪随访的有效手段。