限制-修饰系统的克隆研究

迄今为止,已有72种限制性核酸内切酶基因或(和)117种限制性核酸甲基化酶基因成功地克隆入大肠杆菌。本文综述了微生物体内限制-修饰系统基因克隆及获得这些克隆的方法;同时讨论了宿主细胞限制系统对克隆的影响。     

分子生物学基础

分子生物学基础强伯勤，方福德一、基本概念基因（ｇｅｎｅ）的概念最初来自遗传学，表示体现一定遗传特征的功能单元。现在已经知道它的化学本质是ＤＮＡ分子上一段能够表达多肽链、核糖体ＲＮＡ或转移ＲＮＡ的核苷酸序列，这便是基因的分子生物学概念。按照这个概念，基...     

Polycomb家族基因Nspcl在斑马鱼早期发育的表达

目的 探讨Polycomb家族基因Nspel在模式生物斑马鱼发育早期的表达模式.方法 根据GenBank中斑马鱼Nspcl的cDNA序列设计Nspcl原位杂交探针片断,并制备地高辛标记的探针.收取单细胞期、双细胞期、胚芽期及不同时间点的体节期斑马鱼胚胎,用制备好的探针作原位杂交,显微镜下拍照,获得信号适当的杂交结果.结果 在斑马鱼体节期前,Nspcl在全身表达;从体节期开始,其表达逐渐表现出特异性,主要在头部的神经系统中表达.结论 Nspcl在模式生物斑马鱼的早期发育、尤其是神经系统发育的过程中可能扮演重要角色.     

人Polycomb家族成员NSPc1蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备

目的 Polycomb家族成员NSPc1多克隆抗体的制备与检测。方法 应用PCR技术扩增人NSPc1编码区全长序列并插入到pET-43.1a(+)载体中，在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白HIS-NSPc1。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His 标签进行亲和纯化。用所获得的纯化蛋白免疫新西兰大白兔，获得兔抗人NSPc1多克隆抗体。用Western blot检测抗体免疫反应的特异性。结果 在大肠杆菌中表达并纯化了人NSPc1重组蛋白，纯度达95％，用其免疫新西兰大白兔，成功制备了相应兔源多克隆抗体，Western blot实验中该抗体可以特异识别内源及外源性NSPc1蛋白。结论 原核表达的NSPc1融合蛋白可以被纯化，并具有足够的蛋白免疫原性，所制备的相应多克隆抗体具有良好的特异性，可以运用于NSPc1基因的功能研究。     

EcoRI限制及修饰酶基因的克隆和高效表达研究(简报)

限制性内切酶是进行基因分析和DNA重组不可少的工具。EcoRI是其中最常用的酶之一.本文简述了利用重组DNA技术克隆EcoRI的限制和修饰酶基因及其高效表达的研究结果. 据文献报导,EcoRI的限制和修饰酶基因定位于质粒DNA上.我们从酶的生产菌株E.coli~5RY13中纯化了一种分子量约为9kb(千硷基对)的质粒DNA,并藉PvuⅡ和BstNI联合酶解,分得一含限制和修饰酶基因的片段(～2.2kb)。片段用Klenow酶补齐末端后,经平端连接插入pBR32     

2020中国医学科学和技术发展的战略研究(节选)

国际发展现状和趋势人口与健康问题成为全人类关注的焦点。世界总体人口不断增长,人口老龄化日趋严重,身心疾病的负担不断加重。大多数发达国家不断加大对医疗卫生的投入,强化在公共卫生服务提供和保障方面的主导作用,建立了比较完善的医学科学研究和医疗卫生预防保健系统;在不少欠发达的国家中,居民医疗保健没有保障,各种疾病流行,缺医少药或无力就医,爱滋病等烈性传染病使非洲一些国家遭到致命性打击。联合国人权宣言和巴西宣言都强调了各国政府在保证本国人民基本医疗保健方面所应负有的职责。医学模式转变引发医学科学研究向全方位发展。     

疟原虫抗原B表位NKNDD和NANP串联重复片段与脊灰病毒全长cDNA嵌合体的构建

人工合成含有恶性疟原虫抗原B表位NKND的单拷贝抗原基因片段NKNDD和恶性疟原虫环子抱子蛋白CSP的重复性抗原B表位NANP的2拷贝基因片段，将NKNDD和（NANP）。分别进行自串联后克隆到中介载体PSKMM，得到一系列不同拷贝数的串联多拷贝克隆。从（NKNDD）n／PSKMM和（NANP）n／pSKMM的各拷贝克隆中挑选3、4、5、8拷贝的（NKNDD）n／PSKMM和4、6拷贝的（NANP）n／pSKMM，将（NKNDD）n和（NANP）n从中介载体转移到表达型载体pSV202H＋，得到3、4、5、8拷贝的（NKNDD）n和4、6拷贝的（NANP）n插入脊髓灰质炎病毒Ⅰ型Mahoney株全长cDNA的N－AgⅠ区域所构成的嵌合体。实验中由于引入了半定量杂交技术，使得单位DNA片段的系列串联和克隆过程明显简化。     

第六届全国医学生物化学与分子生物学第二届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术大会闭幕

为加强医学基础研究与临床应用间的沟通，中国生物化学与分子生物学会医学生物化学与分子生物学分会和临床应用生物化学与分子生物学分会于2007年8月12日至15日在乌鲁木齐市联合召开第六届全国医学生物化学与分子生物学及第二届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术大会。[第一段]     

蛋白激酶Cξ亚型基因及UrotensinⅡ基因中各有一个单核苷酸位点与中国北方汉族人群2型糖尿病相关

目的采用单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)标记,在以往中国北方汉族人群2型糖尿病相关基因定位区域(1p36.33-p36.23)内寻找疾病易感基因位点。方法通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找定位区域内10个候选基因中的23个SNP位点,用单碱基延伸反应(singlebaseextension,SBE)法对北方汉族人群散发2型糖尿病患者(192例)及对照组(172例)进行分型及病例-对照关联分析。结果23个SNP位点中有8个为中国北方人群常见SNP位点;对病例组和对照组分型分析显示,位于蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)基因中的一个位点(rs436045)及urotensinⅡ(UTS2)基因中的一个位点(rs228648),其等位基因频率在两组的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论上述两个SNP位点可能和中国北方汉族人群2型糖尿病相关,以上结果为进一步研究上述两个位点所在的基因与2型糖尿病的关系提供了理论依据。