《Journal of Pediatric Surgery》2020年第2期导读

《Journal of Pediatric Surgery》2020年第2期刊出文章30余篇,开篇回顾了第66届英国小儿外科医师协会大会的情况,接着刊登了胸外科、结直肠、泌尿外科及创伤等相关疾病的研究文章,对临床决策有一定的指导意义,本文对此进行归纳、总结。一、胸外科疾病胸腔镜下主动脉固定术是治疗气管支气管软化症(tracheobronchomalacia,TBM)的术式之一,英国伦敦大奥蒙德街医院回顾分析了21例胸腔镜下主动脉固定术治疗TBM患儿的临床资料,17例为中、远端气管软化,4例为支气管软化。14%的TBM患儿需要再次干预,其中29%接受了气管切开术。平均随访1年,17例症状缓解。     

Anti-Gr-1去除新生小鼠髓源性抑制细胞的动态变化

目的 分析anti-Gr-1去除新生小鼠髓源性抑制细胞(MDSCs)的动态变化,探讨其去除MDSCs的效率和反应时间.方法 将50只BALB/c新生小鼠随机分成5组,每组10只,根据不同时间点腹腔注射anti-Gr-1(15 μg);于出生后第9天收取肝脏、脾脏标本,并将各自充分研磨后的组织悬液通过Percoll液进行梯度离心,分离出其中的单个核细胞;利用流式细胞仪分别检测肝、脾组织的髓源性抑制细胞(CD11b+Gr-1+)数量.结果 ①经anti-Gr-1注射4h后,实验组脾脏中的MDSCs百分比明显低于正常对照组[(9.19±1.40)％比(26.01±2.26)％,t=20.266,P＜0.05],并能有效维持24～48 h,去除率达到64.6％,当48 h后MDSCs百分比(16.87±3.49)％,去除率下降至35.1％;②经anti-Gr-1注射24h后,实验组肝脏中的MDSCs百分比与正常对照组比较[(8.98±1.03)％比(15.75±1.10)％,t=11.12,P＜0.05],具有统计学意义,去除率为42.9％,至48 h后MDSCs百分比(4.57±0.95)％,去除率达到70.9％;③同一实验组,脾脏和肝脏各自的M-MDSCs/G-MDSCs比值区别较大.结论 Anti-Gr-1对肝脏、脾脏的MDSCs去除效率和反应时间不同:经anti-Gr-1注射后4～48 h,脾脏的MDSCs去除率为35.1％ ～64.6％,而24 ～48 h后肝脏的MDSCs去除率为42.9％～70.9％.     

胆道闭锁患儿5种嗜肝DNA病毒感染状况检测报告

目的 检测几种常见嗜肝DNA病毒在胆道闭锁患儿肝脏组织中的感染率,探讨其与胆道闭锁发生的关系.方法 用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测随机选取的85例胆道闭锁和10例对照组患儿肝脏组织中的5种嗜肝DNA病毒,包括人巨细胞病毒(HCMV)、腺病毒(ADV)、EB病毒(EBV)、单纯疱疹病毒(HSV)和乙肝病毒(HBV),同时进行石蜡切片的病理染色和巨细胞病毒晚期蛋白PP65免疫组化方法检测.结果 在85例胆道闭锁患儿肝脏组织中,嗜肝DNA病毒阳性56例(65.9%),其中HCMV阳性51例(60.0%),ADV阳性5例(5.9%),EBV阳性3例(3.5%),HSV和HBV阳性0例(0%),对照组10例中均未检测到以上病毒的存在.免疫组织化学结果显示:HCMV多集中于肝脏组织中的肝细胞、血管内皮细胞、炎症浸润细胞当中,胆管上皮细胞呈强阳性反应.结论 胆道闭锁与嗜肝DNA病毒感染之间存在相关性,其中以人巨细胞病毒感染关系最为密切.     

EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞促进胆道闭锁肝纤维化的研究

目的 分析在胆道闭锁患儿肝组织中增生的EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞与肝纤维化形成的关系,从而探讨不成熟的胆道上皮细胞在胆道闭锁病程进展中的作用.方法 选取2012年1月至2015年6月于我院就治的患儿肝石蜡标本进行连续切片,其中胆道闭锁(biliary atresia,BA) 65例,胆总管囊肿(choledochal cyst,CC) 27例,门静脉海绵样病变(cavernous transformation of portal vein,CTPV) 15例,应用CK19、EpCAM免疫组织化学染色及饱和苦味酸天狼星红染色方法,分析肝组织中增生的胆道上皮细胞的成熟性、EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞与肝纤维化在位置上的关系,并应用Image-pro对400倍视野下肝组织切片中EpCAM阳性细胞进行计数,观察其增生数量与肝纤维化分级间的关系.结果 在CTPV组可见由CK19阳性的胆道上皮细胞组成的正常成熟的胆管,未见明显增生的胆道上皮细胞.在BA组及有纤维化的CC组可见胆道上皮细胞增生明显,邻近肝纤维化部位的胆道上皮细胞主要为EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞,与肝纤维化存在位置上的关联.在胆道闭锁肝组织中随着肝纤维化的程度越高,EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞的数量越多,且不同肝纤维化分期中EpCAM阳性细胞增生的数量存在显著差异(r=0.56,P＜0.001).结论 在小儿胆道闭锁疾病中,EpCAM阳性的不成熟胆道上皮细胞在短时间内迅速增生,可能是胆道闭锁患儿肝纤维化进展迅速的主要原因.     

人巨细胞病毒感染与胆道闭锁CD4+T细胞因子的相关性研究

目的 检测胆道闭锁患儿肝脏组织中人巨细胞病毒滴度与11种CD4+T细胞因子表达水平之间的相关性,并探讨其意义.方法 分别采用荧光定量PCR和流式微球技术对29例胆道闭锁患儿肝脏组织中的巨细胞病毒滴度和CD4+T细胞表达的11种细胞因子(IL-12p70、IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-8、IL-6、IL4、IL5、IL-1β、TNF-α和TNF-β)进行定量检测,并统计两者之间的相关系数.结果 人巨细胞病毒阳性者15例(51.7%),15例胆道闭锁患儿肝脏组织中人巨细胞病毒滴度与11种细胞因子具有不同程度的相关性,其中与部分细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4、TNF-α及TNF-β)呈强正相关,以IFN-γ的相关性最强(r=0.796),且该病毒的滴度与Th1类细胞因子总量(r=0.914)、促炎因子总量(r=0.913)及11种细胞因子总量(r=0.893)呈强正相关.结论 胆道闭锁可能是由人巨细胞病毒感染所促发,主要由CD4+Th1细胞及其细胞因子所介导的免疫炎症性疾病.

Abstract：

Objective To examine the relationship between human cytomegalovirus and CD4+ T cell's cytokines in biliary atresia. Methods HCMV titres and 11 cytokines (IL-12p70,IFN-γ,IL-2,IL-10, IL-8, IL-6, IL-4, IL- 5, IL- 1β, TNF-α and TNF-β) were assayed with Fluorescent quantitative PCR(FQ-PCR) and flowing microsphere technology respectively. The correlation coefficients were then calculated. Results Fifteen liver specimens(51.7%)were positive for HCMV. The titers of human cytomegalovirus showed different correlations with the 11 cytokines and strong positive correlation with some cytokines( IFN-γ、 IL-2、IL-1 0 、 IL-4 、 TNF-α and TNF-β), IFN-γ is the strongest one( r = 0. 796).Moreover, it shows strong positive correlation with the total of Th1 cytokines(r = 0. 914), pro-inflammatory cytokines(r = 0. 913)and the total of 11 cytokines(r= 0. 893). Conclusions The immune reaction of biliary atreisa may be triggered by the human cytomegalovirus, promoted by the CD4+ Th1 cells and their cytokines.     

CD4+T细胞因子在胆道闭锁患儿肝脏组织中的表达及其意义

Objective To investigate the cytokines produced by CD4 + T cells in liver tissues of the patients with biliary atresia (BA). Methods The liver tissues of the 29 patients with BA were grounded and centrifuged. Then, the supernatants were collected. Nine patients not affected BA served as controls. The 11 cytokines produced by CD4 + T cells including IL- 12p70, IFN-γ, IL-2, IL- 10, IL-8,IL-6, IL-4, IL- 5, IL-1 β, TNF-α and TNF-β were detected using microsphere-based flow cytometry. Results Of the BA patients, the amount of IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IFN-γ and TNF-α were 2 920. 69,1 106. 01,152. 22,12 614. 22,834. 18 and 161.29, respectively. The total amount of the Th1 cytokines including IL-1β, IL-2, IL-8, IL-12p70, IFN-γ, TNF-α and TNF-β was 19 504. The total amount of the proinflammatory cytokines including IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12p70, IFN-γ, TNFα and TNF-β was 19 653. 06. The amounts of these cytokines were significantly higher than those of the control group,which were 1 096.00,243.68,5.98,965.17,147. 28,30.56,2617.93, and 2 623.91, respectively. Conclusions The increased expressions of the cytokines expressed by the CD4 + Th1 cells may be one of the main causes of BA.     

CD4+T细胞因子在胆道闭锁患儿肝脏组织中的表达及其意义

目的 检测T淋巴细胞中的11种CD4+T细胞因子在胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝脏组织中的表达,以探讨其在胆道闭锁发病机制中的意义.方法 在病理的基础上,采用流式微球技术对29例BA及9例对照组患儿肝脏组织CD4+T细胞表达的11种细胞因子(IL-12p70、IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-8、IL-6、IL-4、IL-5、IL-1β、TNF-α和TNF-β)同时进行定量检测,并对其代表因子IFN-γ进行免疫组化定位分析.结果 CD4+T细胞表达的11种细胞因子中,BA组患儿肝脏组织中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α以及Th1细胞因子总量(IL-1β、IL-2、IL-8、IL-12p70、IFN-γ、TNF-α、TNF-β)与促炎因子总量(IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12p70、IFN-γ、TNF-α、TNF-β)分别为2920.69、1 106.01、152.22、12 614.22、834.18、161.29、19 504.55、19653.06,数值明显高于对照组的1 096.00、243.68、5.98、965.17、147.28、30.56、2 617.93、2 623.91,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 由CD4+Th1细胞及其细胞因子所介导的针对胆道上皮细胞的免疫炎症性疾病可能是造成胆道闭锁的主要原因之一.     

人类全基因组编码蛋白质芯片技术筛选胆道闭锁自身免疫靶抗原

目的筛选胆道闭锁(biliary atresia,BA)自身免疫相关靶抗原,建立疾病差异性抗原谱,寻找疾病诊断及发病机制研究线索。方法以20例BA患儿、5例疾病对照组患儿(包括婴儿肝炎综合征2例、胆总管囊肿3例)和5例正常儿童对照组的血清为探针,采用全基因组蛋白质芯片技术进行检测,并进行生物学聚类分析和GO功能分析。结果通过比较BA组与对照组,共筛选出存在明显差异的免疫响应蛋白281个,其中Ig G响应105个,Ig M响应176个,Ig G和Ig M同时响应的26个;依据差异倍数≥2、表达稳定的标准得出49个高响应蛋白。GO功能分析发现差异抗原主要涉及调控细胞发育、增殖、凋亡及胆道形成。其中CENP6、UBQLN3、PDCD2、SPEG和RBPJ蛋白在BA组中阳性率显著高于正常对照组(100%vs 0%,P0.05)。结论成功建立BA相关自身抗原差异谱,为BA的早期诊断、发病机制的阐明提供新的科学依据,但仍需更为深入的鉴定和更多临床样本的验证。     

N-乙酰半胱氨酸治疗胆道闭锁小鼠脑损伤的实验研究

目的探讨胆道闭锁(biliary atresia, BA)小鼠生存晚期的脑损伤情况及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)对BA小鼠脑损伤的治疗作用。方法将160只新生BALB/c小鼠按随机数字表法平均分为疾病组、空白对照组、治疗组及药物对照组, 每组各40只。疾病组出生后第3天腹腔注射30 μl恒河猴轮状病毒(rhesus rotavirus, RRV)诱导BA小鼠模型;治疗组出生后第3天注射等量RRV后每日腹腔注射10 mg/kg的NAC治疗至第12天;空白对照组出生后第3天予腹腔注射30 μl未扩增RRV的MA104细胞培养上清;药物对照组出生后第3天起每日腹腔注射10 mg/kg的NAC至第12天。取第19天小鼠进行神经功能评分, 检测血浆脑损伤标志物神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)和中枢神经特异蛋白S100β水平。评估小鼠海马锥体细胞层病理切片苏木精-伊红(hematoxylin and eosin, HE)染色、尼氏染色及Iba1免疫组织化学染色情况。评估小鼠肝门管区HE染色、细胞角蛋白19(cytok...