神经生长因子及其受体在先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端表达的下调

目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体(TrkA、P75NTR)在先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)患儿直肠末端的表达,探讨对其肠神经系统发育的影响.方法 收集2011年1月至2013年1月遵义医学院附属医院诊治的ARM患儿直肠末端标本30例.其中,男24例,女6例;高位ARM 15例,中位ARM 6例,低位ARM 9例;手术年龄2 d～13个月,平均1.4个月.一期腹会阴肛门成形8例;分期肛门成形13例,包括:腹腔镜辅助肛门成形7例,腹会阴肛门成形2例,后矢状入路肛门成形术4例,会阴肛门成形9例.肛门成形术中取直肠末端标本,运用苏木素/伊红(HE)染色计数直肠末端黏膜下及肌间神经丛数量,免疫组织化学(IHC)及实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NGF及其受体(TrkA、P75NTR)在低位ARM和中高位ARM患儿直肠末端的表达情况.结果 HE染色:低位ARM患儿直肠末端黏膜下及肌间神经丛分布密集,神经丛面积大,节细胞数量多;中高位ARM患儿神经丛分布明显稀疏,神经丛数量较低位ARM患儿明显减少(1.30±0.82vs5.60±1.36)个,两相比较,差异有统计学意义(P＜0.01).IHC:NGF、TrkA、P75NTR主要在直肠末端黏膜下及肌间神经丛表达,NGF主要定位于胞核,TrkA主要定位于胞核及胞质,P75NTR主要定位于胞核、胞膜.NGF、TrkA、P75NTR在低位ARM患儿直肠黏膜下、肌间神经丛大量表达,其积分光密度(IOD值)分别为43.48±7.11、18.83±3.65和23.39±3.64;NGF、TrkA、P75NTR在中高位ARM患儿直肠末端表达明显减少,其积分光密度(IOD值)分别为3.70±1.21、8.49±2.68和7.17±2.28,两相比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).qRT PCR:NGF、TrkA、P75NTR mRNA在低位ARM患儿直肠末端的相对表达量分别为(172.22±104.38、148.78±72.45和122.83±35.45);明显高于中高位ARM患儿(80.38±43.10、73.95±47.43和75.15±20.23),两相比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 NGF及其受体TrkA、P75NTR可能参与并影响ARM患儿直肠末端肠神经系统的发育.     

TrkA、p75NTR mRNA在肛门直肠畸形胎鼠直肠末端的表达

目的通过检测肛门直肠畸形(ARM)胎鼠直肠末端神经生长因子受体TrkA、p75NTR mRNA的表达水平,探讨ARM直肠末端肠神经系统发育情况。方法成年SD孕鼠16只。其中实验组10只,对照组6只。实验组孕鼠在孕11 d、13 d 2次给予10 g.L-1乙烯硫脲(125 mg.kg-1)灌胃,制作先天性ARM动物模型;对照组灌胃注入等量9 g.L-1盐水。2组孕鼠在孕20 d时行剖宫手术取出胎鼠,取其直肠末端并保存于-80℃冰箱;采用反转录/实时定量PCR(RT-PCR)方法检测正常胎鼠和ARM胎鼠直肠末端TrkA、p75NTR mRNA表达情况。结果 TrkA、p75NTR mRNA在正常胎鼠直肠末端的相对表达量分别是162.221±104.675,129.778±51.976,在ARM胎鼠直肠末端中表达分别是78.937±33.425,87.145±25.812,两组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05);琼脂糖凝胶电泳显示TrkA、p75NTR基因扩增后产物cDNA片段与引物设计的扩增片段完全吻合,TrkA、p75NTR基因条带亮度对照组均高于实验组。结论 TrkA、p75NTR mRNA在ARM胎鼠直肠末端的表达异常,提示神经生长因子及受体TrkA、p75NTR可能参与ARM肠神经系统的发育。     

全胸腔镜下手术治疗小儿肺隔离症的疗效与安全性分析

目的探讨全胸腔镜下手术治疗小儿肺隔离症的临床疗效与安全性。方法回顾性分析本院2014年2月至2017年8月实施的33例全胸腔镜下肺隔离症手术患儿临床资料,其中男22例,女11例;年龄2个月至12岁1个月。患儿均经术前胸部CT增强明确诊断,手术采取三孔法,根据病变情况选择肺叶切除或不规则切除。结果 33例患儿均在全胸腔镜下顺利完成手术,无一例中转开胸手术,19例行肺叶切除术,6例行不规则肺切除术,1例行肺段切除术,7例行叶外型肺隔离症切除术。结论全胸腔镜手术治疗小儿肺隔离症安全、有效,提高手术技巧可减少术中出血,提高手术的安全性。     

嘌呤受体亚型（P2Y2）在肛门直肠畸形动物模型直肠末端的表达

目的检测嘌呤受体亚型（P2Y2）在肛门直肠畸形（ARM）胎鼠直肠末端的表达情况,探讨其可能对肠壁神经系统发育的影响。方法 SD孕鼠随机分正常组和乙烯硫脲（ETU）实验组,两组孕鼠在孕20d取出宫内胎鼠直肠末端,应用HE染色观察直肠末端组织结构变化,Western blot和qRT-PCR方法检测P2Y2在直肠末端的表达情况。结果正常组胎鼠直肠末端组织结构分界清楚,黏膜下和肌间神经元细胞数目多,胞浆丰富,轴突清晰;ETU组中患ARM的胎鼠各层组织结构分层不清,可见较多空腔,神经元细胞数目较少。Western blot和qRT-PCR结果显示ARM组胎鼠直肠末端蛋白含量及mRNA量明显低于正常组（0.23±0.06比0.42±0.05;49.40±26.49比98.53±52.25,P〈0.05）。结论 P2Y2可能参与ARM胎鼠直肠末端肠神经系统的发育。     

腹腔镜治疗小儿胆囊结石28例

目的 探讨腹腔镜在小儿胆囊结石胆囊切除术中的安全性和有效性;方法 总结我院2008年5月-2012年7月收治的28例胆囊结石临床资料,男15例,女13例,年龄5～14岁,平均10岁,病程5d至3年,所有患儿均2次B超检查确诊,其中单纯胆囊结石10例,胆囊结石伴慢性胆囊炎12例,急性胆囊炎症6例,白细胞计数升高8例,肝功能异常7例,本组无合并胆总管结石及血液系统疾病患儿.结果 本组28例均经腹腔镜完成手术,无中转开腹,其中泥沙样结石10例,颗粒状结石18例,单发结石7例,多发结石21例,结石直径2～10 mm;手术时间25～55 min,平均40 min,术中出血量15 ～45 mL,平均30 mL.其中有1例5岁女患,术后第2天出现低热、黄疸,行MRI检查疑胆道损伤,术后第5天再次剖腹探查,发现是合成夹夹闭了胆总管造成胆总管横断损伤,行肝总管空肠Roux-Y吻合,术后患儿恢复好,随诊4年,无并发症发生,其余患儿住院时间4～7d,平均4.5d;时间6个月～3.5年,其中1例男孩术后6月因暴饮暴食,发生胰腺炎,其余患儿恢复好. 结论 正确解剖Calot三角是预防小儿腹腔镜胆囊切除术胆道损伤的关键,选择具有腹腔镜操作经验的外科医生实施小儿腹腔镜胆囊切除术是安全、有效的.     

胆管闭锁患儿肝脏组织中跨膜转运蛋白39A表达观察

目的 通过观察胆管闭锁患儿肝脏组织中跨膜转运蛋白39A(TMEM39A)的表达变化，初步探讨TMEM39A与胆管闭锁发病的关系。方法 选取胆管闭锁患儿30例纳入病例组，同期收治的先天性胆总管囊肿患儿30例纳入对照组。分别采用免疫组化法和Western blotting法检测两组患儿肝脏组织中的TMEM39A蛋白，采用RT-qPCR法检测TMEM39A mRNA。结果 免疫组化检测结果显示，TMEM39A蛋白主要分布在汇管区周围肝细胞胞质内，病例组TMEM39A蛋白相对表达量高于对照组（分别为0.695±0.137、0.375±0.096,P<0.05）;Western blotting检测结果显示，病例组TMEM39A蛋白相对表达量高于对照组（分别为0.624±0.082、0.352±0.082,P<0.05）。病例组TMEM39A mRNA相对表达量高于对照组（分别为5.724±1.490、2.338±0.984,P<0.05）。结论 胆管闭锁患儿肝脏组织中TMEM39A蛋白及mRNA呈高表达，TMEM39A异常表达可能与胆管闭锁的发病有关。