超临界流体色谱及其应用

介绍了超临界流体的特性,超临界流体色谱(SFC)的概念及其发展。讨论了SFC的设备以及SFC/FTIR,SFC/MS的联用技术,并与经典的色谱法GC和HPLC进行了对照。对其在药物分析中的应用作了介绍。     

高职护理专业学生道德失范原因及对策探析

高职院校大学生道德失范就是道德失范状态下的一种特有现象,笔者通过对高职护理学生道德失范的原因和基本现状进行分析、进一步提出纠正和预防我院高职护理专业学生道德失范的基本对策。     

糖皮质激素治疗肾病综合征耐药的机制探讨

糖皮质激素(GC)是治疗原发性肾病综合征的首选药物,而激素的耐药问题使其治疗面临严峻挑战.GC在体内发挥效应需经历一系列连续的复杂过程,此效应途径中的任何一个环节出现异常,都有可能导致Gc耐药的发生.近年来的研究表明,GC受体前代谢酶、多药耐药基因及其编码蛋白质、GC受体、受体附件蛋白、NPHS2基因等都可能与GC耐药有关,而如何从复杂纷纭中寻找到GC耐药的分子标志物将是今后研究的方向.     

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目的探讨肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)与肾脏病理进展及原发性肾病综合征(INS)糖皮质激素(GC)耐药的关系。方法2005年9月至2007年12月在中南大学湘雅二医院儿科住院行肾穿刺活检的INS患儿40例,分为激素耐药性肾病综合征(SRNS)组(20例)和激素敏感性肾病综合征(SSNS)组(20例)。免疫组化双染法检测INS患儿和5例正常对照组儿童肾组织中细胞角蛋白(CK)和波形蛋白(vimentin)的表达,肾脏病理评分半定量评价肾组织病理损害程度。结果SRNS组肾小管-间质病理评分显著高于SSNS组(P<0.05);正常对照组肾小管上皮细胞内只表达CK,不表达vimentin;INS肾小管上皮细胞均不同程度表达vimentin;SRNS组肾组织CK表达较SSNS组显著降低[分别为(66.25±12.13)%和(76.64±7.64)%,P<0.05],vimentin表达较SSNS组显著增高[分别为(11.51±7.48)%和(4.98±2.27)%,P<0.05];不同肾小管-间质病变(轻、中、重度)组肾小管上皮细胞内CK和vimentin表达量的差异均有统计学意义[CK表达量分别为(79.97±...     

激素耐药型与激素敏感型肾病综合征儿童尿液双向电泳图谱分析

目的建立激素耐药型原发性肾病综合征(SRNS)儿童与激素敏感型原发性肾病综合征(SSNS)儿童尿液全蛋白双向凝胶电泳(2-DE)图谱,分析差异的蛋白质位点,为研究原发性肾病综合征(INS)糖皮质激素耐药的机制提供依据。方法病例来源于湘雅二医院儿科住院部,收集时间为2005-01-2005-10,入选的INS患儿依据中华医学会儿科学分会肾脏病学组制定的诊断标准,分为3组,每组5例。利用2-DE技术分离SRNS与SSNS(治疗前、后)儿童尿液总蛋白质,Image Master 2D V3.01分析软件进行凝胶图像分析。结果获得了图像清晰、分辨率高的SRNS组、SSNS(治疗前)与SSNS(治疗后)组儿童尿液2-DE图谱,3组点数分别为(206±8)个、(204±5)个、(55±5)个;SRNS组与SSNS组(治疗前)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点66个;SRNS组与SSNS组(治疗后)尿液2-DE凝胶共筛选出差异蛋白质点33个。结论该研究成功建立了分辨率高且重复性较好的SRNS与SSNS儿童尿液全蛋白的2-DE图谱;通过组间尿液2-DE图谱分析,发现了一些可能与INS激素耐药或敏感有关的蛋白质位点,为进一步运用蛋白质组学技术寻找与INS激素耐药抑或激素敏感相关的蛋白质打下了基础。     

原发性肾病综合征儿童尿液双向电泳图谱的建立

目的：建立与优化原发性肾病综合征（INS）儿童尿液全蛋白双向凝胶电泳技术(2－DE)。方法：采用4种不同的方法制备蛋白质样本, 以固相pH梯度等电聚焦为第一向, 12%的SDS-PAGE进行第二向电泳,银染显色。结果：以丙酮浓缩蛋白后透析提纯法,制备蛋白质标本,300 μg为上样量时,可获得图像清晰、分辨率高、重复性好的儿童INS尿液2－DE图谱。结论：建立了稳定的原发性肾病综合征儿童尿液双向凝胶电泳技术,为进一步开展疾病的尿液蛋白质组学研究奠定了基础。［中国当代儿科杂志,2007,9（2）：122-124］     

儿童激素耐药型与激素敏感型肾病综合征尿蛋白组学的初步研究

目的：筛选和鉴定激素耐药型（SRNS）与激素敏感型原发性肾病综合征（SSNS）尿液中差异表达的蛋白质,寻找可能与肾病综合征激素耐药和激素敏感相关的蛋白质。方法：SSNS治疗前后病例、SRNS、正常对照各5例,提取尿液全蛋白,采用双向凝胶电泳建立全蛋白凝胶图谱;银染后用Image Master 2D V3.01软件分析差异表达蛋白质点,利用MALDI-TOF-MS分析获得肽质量指纹图谱,通过Mascot软件进入NCBI数据库,鉴定出差异表达蛋白质。结果：SRNS组与SSNS治疗前组尿液2-DE凝胶比较有差异蛋白质点66个,其中仅出现于SRNS组24个、SSNS治疗前组27个;SSNS治疗后组与正常对照组尿液2-DE凝胶比较有差异蛋白质点75个,其中仅出现于SSNS治疗后组11个。对18个差异蛋白质点进行分析,鉴定出α1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、带异类电荷糖蛋白复合体等9类差异表达的蛋白质。结论：成功鉴定了SRNS和SSNS的尿液中存在9类差异表达的蛋白质,部分蛋白可能是SRNS或SSNS的标志物。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：341-345］     

槐杞黄对哮喘大鼠Th1/Th2/Th17细胞因子及肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

目的：研究卵清蛋白（OVA）致敏哮喘大鼠Th1/Th2/Th17细胞因子及肺泡巨噬细胞吞噬功能的变化以及槐杞黄的治疗效应。方法：40只4~6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成正常对照组、哮喘组、布地奈德组、槐杞黄组和布地奈德+槐杞黄组（n=8）。OVA致敏和激发建立哮喘模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定血浆和支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-4、IFN-γ、IL-17水平;分离、纯化BALF的肺泡巨噬细胞,测定肺泡巨噬细胞的吞噬功能。结果：与正常对照组比较,哮喘组血浆和BALF中IL-4和IL-17升高,IFN-γ降低。与哮喘组相比,槐杞黄组IFN-γ升高。布地奈德+槐杞黄组IFN-γ升高及IL-17降低较布地奈德组和槐杞黄组更显著。肺泡巨噬细胞的吞噬功能：哮喘组较正常对照组降低,槐杞黄组和布地奈德+槐杞黄组较正常对照组、哮喘组和布地奈德组均升高。血浆和BALF IFN-γ水平与肺泡巨噬细胞的吞噬功能呈正相关。结论：哮喘大鼠血浆和BALF IL-4和IL-17表达升高、IFN-γ表达降低,肺泡巨噬细胞吞噬功能下降。槐杞黄能明显提高哮喘大鼠血浆和BALF IFN-γ表达和肺泡巨噬细胞的吞噬能力,且与吸入性糖皮质激素合用有协同作用。     

激素耐药性肾病综合征肾小管上皮细胞-间充质转化临床意义研究

探讨肾小管上皮细胞-间充质转化（EMT）与肾脏病理进展及原发性肾病综合征（INS）糖皮质激素（GC）耐药的关系。方法　2005年9月至2007年12月在中南大学湘雅二医院儿科住院行肾穿刺活检的INS患儿40例,分为激素耐药性肾病综合征（SRNS）组（20例）和激素敏感性肾病综合征（SSNS）组（20例）。免疫组化双染法检测INS患儿和5例正常对照组儿童肾组织中细胞角蛋白（CK）和波形蛋白（vimentin）的表达,肾脏病理评分半定量评价肾组织病理损害程度。结果　SRNS组肾小管-间质病理评分显著高于SSNS组（P < 0.05）;正常对照组肾小管上皮细胞内只表达CK,不表达vimentin;INS肾小管上皮细胞均不同程度表达vimentin;SRNS组肾组织CK表达较SSNS组显著降低[分别为（66.25±12.13）%和（76.64±7.64）%,P < 0.05],vimentin表达较SSNS组显著增高[分别为（11.51±7.48）%和（4.98±2.27）%,P < 0.05];不同肾小管-间质病变（轻、中、重度）组肾小管上皮细胞内CK和vimentin表达量的差异均有统计学意义[CK表达量分别为（79.97±3.70）%、（65.47±7.93）%和（48.47±5.98）%,P < 0.05];vimentin表达量分别为（4.74±1.84）%、（9.65±5.10）%、（23.60±7.72）%,P < 0.05];肾小管-间质病理评分与肾小管上皮细胞CK表达呈负相关（r = -0.887,P < 0.01）,与vimentin的表达呈正相关（r = 0.868,P < 0.01）。结论 　肾病综合征肾组织的肾小管上皮细胞存在不同程度的肾小管上皮细胞-间充质细胞转化（EMT）现象,尤以SRNS为甚;检测肾组织EMT水平可能有助于判断INS的预后。     

白蛋白超载对人肾小管上皮细胞EMT及激素耐药相关因素的影响

目的 研究白蛋白超栽对人肾小管上皮株HKC细胞EMT及激素耐药相关因素的影响.方法 用不同浓度人血清白蛋白(HSA)刺激HKC细胞48 h,MTT法测定细胞增殖情况;20 g/L HSA培养HKC细胞48h,观察HKC细胞形态学变化;采用免疫细胞化学方法检测角蛋白(CK)、波形蛋白(Vimentin)、P-糖蛋白(P-gp)、耱皮质激素受体β(GRβ)在HKC细胞中表达的变化.结果 白蛋白超我可促进HKC细胞的增殖(P＜0.05),以20 g/L组更为明显(P＜0.05);经白蛋白超载后,HKC细胞形态发生变化,而且表现为不同程度的CK表达减少和Vimendn、P-gP及GRB表达增加(均P＜0.05).结论 白蛋白超载能够刺激HKC细胞增殖并诱导HKC细胞发生EMT;白蛋白超载能够诱导HKC细胞高表达p-gP和GRβ.