骨髓基质培养上清作用下脐血造血细胞体外生长与表面标志的关系

目的 探讨骨髓基质细胞培养上清(SN)协细胞因子对人脐血造血细胞体外生长的影响。方法 使用rIL-3，rI-1β，rIL-6，和SCF等细胞因子或SN或者两者联用长期培养人脐血造血细胞，进行细胞增殖和表面标志测定。结果 培养7d细胞已开始增殖，14d达高峰，细胞总数在细胞因子组(1)增加了134．5倍和SN组(3)增加81．5倍，两者联用(2)增加了171．3倍。21d开始下降，(3)组下降最明显，35d时细胞总数为培养前的(3)组26．65倍，(1)组54．15倍．(2)仍组有92．25倍。CD34^ 细胞第7天已升高。14d达高峰。(1)、(3)组和(2)组分别比培养前增加了68．43％、69．77％和82．47％，2ld开始减少。分别比培养前增加56．16％、12．33％和71．72％；CD33^ 细胞7天时均显著增加，14d达高峰，分别比培养前增加了80．67％、82．14％和69．69％，21d时维持在14d水平；CD38 细胞7d时均有显著增加，分别比培养前增加了66．65％、70．42％和73．8％，14～21d均在该水平维持，三组问无显著性差异。结论 骨髓基质细胞培养上清可促进脐血造血细胞的增殖，但比细胞因子作用弱，两者联用时作用明显强于两者分别使用，提示骨髓基质细胞还可产生其它物质刺激造血细胞增殖。     

人参皂苷Rb1干预长春新碱抑制骨髓基质细胞增殖的研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(GS Rb1)促进小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长及干预长春新碱(VCR)抑制小鼠BMSCs增殖的作用。方法:正常对照组,GS Rb1(1.0、5.0、10.0、15.0μg/ml)诱导BMSCs增殖组,VCR(2.5、5.0、10.0、15.0μg/ml)抑制BM-SCs增殖组,GS Rb1干预VCR抑制BMSCs增殖组,应用MTT法测定BMSCs增殖。结果:①与正常对照组比较,GS Rb1 1.0～10.0μg/ml随浓度升高其促进BMSCs增殖也增加,GS Rb1为10.0μg/ml时差异具有显著性(P<0.05);VCR 2.5～15.0μg/ml随浓度的升高抑制BMSCs增殖也增强,VCR 5.0～15.0μg/ml时差异具有显著性(P<0.05);GS Rb1 1.0～15μg/ml各组与VCR 5.0～15.0μg/ml各组比较,以及GS Rb1 10.0μg/ml组与VCR 2.5μg/ml组比较其BMSCs增殖显著增加(P均<0.05)。②GS Rb1 5.0μg/ml、10.0μg/ml1、5.0μg/ml分别与VCR 5.0μg/ml培养,其能显著干预VCR对BMSCs增殖的抑制(P均<0.05)。结论:长春新碱明显抑制骨髓基质细胞生长;人参皂苷Rb1可促进骨髓基质细胞生长且具有干预长春新碱对骨髓基质细胞增殖的抑制作用。     

黄精多糖干预长春新碱诱导的骨髓基质细胞生长抑制及凋亡

目的:探讨黄精多糖(PSP,polygonatum sibiricum polysaccharides)干预长春新碱(VCR)诱导的小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长抑制及凋亡的作用。方法:①PSP浓度(500、1000、2000、4000mg/L)及VCR浓度(2.5、5、10、15mg/L)分别与骨髓细胞共同培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖。②PSP(500、1000、2000、4000mg/L)与骨髓细胞预培养2h后再分别加入终浓度为5mg/L的VCR继续培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖。③BMSCs培养14d后再加入VCR(2.5、5、10、15mg/L)继续培养24h,经Annexin V/PI双染流式细胞术(FACS)测定细胞凋亡。④PSP(500、1000、2000、4000mg/L)与BMSCs培养14d后再加入5mg/LVCR继续培养24h,经Hoechst 33342荧光染色及Annexin V/PI双染流式细胞术(FACS)测定细胞凋亡。结果:①PSP(1000、2000、4000mg/L)与骨髓细胞培养14d后OD值(3.80、4.48、4.05)均高于正常对照组(3.70),其中PSP 2000mg/L组OD值差异具有显著性(P<0.05);VCR(5、10、15mg/L)组OD值(2.36、1.83、1.67)均显著低于正常对照组(3.70)。②骨髓细胞与PSP孵育2h后再加入5mg/L VCR继续培养14d,PSP 2000mg/L+VCR 5mg/L组OD值(3.51)与VCR 5mg/L组OD值(2.62)比较差异有显著性。③BMSCs培养14d再加VCR继续培养24h后FACS测定VCR(5mg/L、10mg/L、15mg/L)组凋亡率分别为31.12%、39.37%、64.10%,与正常对照组(7.70%)比较差异有显著性。④PSP与BMSCs培养14d再加入5mg/L VCR继续培养24h后,FACS测定PSP(1000mg/L、2000mg/L和4000mg/L)组凋亡率依次为27.77%、24.33%和25.20%,与凋亡诱导组(35.93%)比较差异均有显著性;Hoechst 33342检测,PSP(2000mg/L、4000mg/L)组凋亡率为29.0%和29.67%,与凋亡诱导组(40.33%)比较差异均有显著性。结论:黄精多糖可促进BMSCs增殖,有效地阻止长春新碱对BMSCs生长的抑制及凋亡作用。     

川芎嗪干预长春新碱抑制骨髓基质细胞增殖的研究

目的探讨川芎嗪(LH)促进小鼠骨髓基质细胞(BMSC)生长及干预长春新碱(VCR)抑制小鼠BMSC增殖的作用。方法①LH5、10、20、40μg/mL,以及VCR2.5、5、10、15μg/mL分别与BMC共同培养14d,测定细胞增殖。②LH5、10、20、40μg/mL与BMC预培养1h后再分别加入终浓度为5μg/mLVCR继续培养     

骨髓源性树突状细胞增强CIK细胞抗肿瘤活性的研究

目的探讨骨髓源性树突状细胞（DC）对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）增殖能力、免疫表型、以及抗淋巴瘤细胞的作用。方法取昆明小鼠骨髓单个核细胞在体外诱导DC和CIK细胞,同时用鼠脾脏单个核细胞诱导CIK细胞,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照。用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,流式细胞术检测免疫表型,MTT法测定杀伤活性。结果DC-CIK细胞增殖能力明显高于CIK细胞（P〈0.05）,骨髓DC-CIK细胞与脾脏DC-CIK细胞增殖无明显差异。DC-CIK细胞共培养后,CD3^＋和CD3^＋CD8^＋、CD3^＋NK1.1^＋双阳性细胞比率较同条件下CIK细胞组显著增多（P〈0.05）;在5∶1-40∶1的效靶比范围内,DC-CIK细胞对淋巴瘤细胞的杀伤率显著高于CIK细胞（P〈0.05）,且杀伤率与效靶比呈正相关。结论骨髓源性DC增强CIK细胞的增殖能力,DC-CIK细胞增加抗淋巴瘤细胞的活性。     

抗A组轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白的临床评价

目的：研究抗Ａ组轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白在临床上治疗婴幼儿轮状病毒性肠炎的效果。方法：对１９９６年下半年临床诊断为秋季腹泻并经粪便ＥＬＩＳＡ检测为Ａ组轮状病毒抗原阳性的住院患儿２１８例分组进行研究。结果：实验组总治愈率（９１／１０４）显著高于对照组（７１／１１４）（χ２＝１８１２，Ｐ＜００１）。平均止泻天数实验组（２９８±１４１）天，对照组（４１９±１５２）天。两组差异有非常显著意义（ｕ＝６１０，Ｐ＜００１）。结论：抗Ａ组轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白的被动免疫保护效果显著。     

黄精多糖干预长春新碱抑制骨髓基质细胞增殖的研究

目的:探讨黄精多糖(PSP)促进小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长及干预长春新碱(VCR)对小鼠BMSCs增殖的抑制。方法:①PSP 0.5、1.0、2.0、4.0g/L,以及VCR 2.5、5.0、10、15mg/L分别与骨髓单个核细胞(BMMCs)共同培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖。②PSP 0.5、1.0、2.0、4.0g/L与BMMCs预培养2h后再分别加入终浓度为5.0mg/L的VCR继续培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖。结果:BMSCs培养14d后,PSP 1.0、2.0、4.0g/L组的OD值(3.80、4.48、4.05)均高于正常对照组(3.70),其中PSP 2.0g/L组OD值与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。VCR 5.0、10.0、15.0mg/L 3组OD值(2.36、1.83、1.67)均显著低于正常对照组(3.70)(P<0.05)。BMSCs培养第14d PSP 2.0g/L+VCR 5.0mg/L组OD值(3.51)与VCR 5.0mg/L组OD值(2.62)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VCR明显抑制BMSCs生长;PSP可促进BMSCs生长,且干预VCR对BMSCs增殖的抑制。     

JAK2V617F基因突变在骨髓增生性疾病中的发生率及其临床意义

目的:探讨JAK2V617F基因突变在骨髓增生性疾病(MPD)中的发生率及其与血液学变化的相关性.方法:68例MPD患者骨髓及外周血细胞抽提DNA,应用等位基因特异性PCR技术,检测JAK2V617F基因突变,对突变基因进行序列分析,结合临床资料以及外周血细胞计数作进一步分析.结果:68例MPD患者中JAK2V617F突变的阳性率为65.28%,其中真性红细胞增多症(PV)患者阳性率为77.77%(28∕36例),原发性血小板增多症(ET)患者阳性率为56.52%(13∕23例),慢性骨髓纤维化(IMF)患者阳性率为44.44%(4∕9例). 各组患者骨髓及外周血JAK2V617F基因突变阳性率大致相同.PV突变阳性患者的白细胞计数及血红蛋白较突变阴性患者高,差异具有统计学意义(P<0.05);ET突变阳性患者的白细胞计数较突变阴性患者的高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:JAK2V617F基因突变有助于BCR/ABL阴性的MPD的诊断.JAK2V617F突变对血液学特征有一定影响.     

耐受性树突状细胞体外培养的基本特征

背景：树突状细胞是体内最重要的抗原提呈细胞,在免疫调节中扮演着免疫应答和免疫耐受的双重角色,对维持机体的免疫平衡起重要作用。 目的：探讨耐受性树突状细胞的体外培养方法,观察不同培养条件下耐受性树突状细胞的基本特征。 设计、时间及地点：以细胞为观察对象,随机分组设计,于2006-09/2008-02在南昌大学第一附属医院中心实验室完成。 材料：8周龄的Balb/c纯系雄性小鼠,体质量20~25 g,用于分离和制备骨髓单个核细胞。 方法：将小鼠骨髓单个核细胞分为5组在不同的培养体系中进行体外诱导培养：空白对照组(不加任何因子)、树突状细胞组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4)、血管活性肠肽组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽)、地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+地塞米松)、血管活性肠肽+地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽+地塞米松)。 主要观察指标：光镜下动态观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞CD80、CD86、CD40、CD11c表达,四甲基偶氮唑盐法检测树突状细胞刺激淋巴细胞增殖的活性,特异性夹心酶联免疫分析测定树突状细胞上清液中白细胞介素10、白细胞介素12的水平。 结果：①利用粒-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4、血管活性肠肽、地塞米松、脂多糖等因子体外培养能生成具有典型树枝状突起的树突状细胞。②树突状细胞组、血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD11c的表达高于空白对照组(P < 0.05)。血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD40、CD80和CD86表达,淋巴细胞增殖活性及培养上清液白细胞介素12水平均低于树突状细胞组(P < 0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40 μg/L、地塞米松组以10 μg/L减低明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40 μg/L、地塞米松为10 μg/L条件下为最低,差异具有显著性意义(P < 0.05)。③血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组细胞培养上清液中白细胞介素10水平均高于树突状细胞组(P < 0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40 μg/L,地塞米松组以10 μg/L升高明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40 μg/L、地塞米松为10 μg/L条件下为最高,差异具有显著性意义(P < 0.05)。 结论：①小鼠骨髓单个核细胞体外经粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽或/和地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成致耐受性树突状细胞。②与常规诱导培养树突状细胞方法比较,耐受性树突状细胞具有CD40、CD80、CD86表达低,刺激淋巴细胞增殖弱的特点;耐受性树突状细胞培养体系上清液白细胞介素10水平高而白细胞介素12水平低。③粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽+地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成耐受性树突状细胞效果较佳,其中以血管活性肠肽40 μg/L、地塞米松10 μg/L的培养条件为最好。     

耐受性树突状细胞体外培养的基本特征

背景:树突状细胞是体内最重要的抗原提呈细胞,在免疫调节中扮演着免疫应答和免疫耐受的双重角色,对维持机体的免疫平衡起重要作用.目的:探讨耐受性树突状细胞的体外培养方法,观察不同培养条件下耐受性树突状细胞的基本特征.设计、时间及地点:以细胞为观察对象,随机分组设计,于2006-09/2008-02在南昌大学第一附属医院中心实验室完成.材料:8周龄的Balb/c纯系雄性小鼠,体质量20～25 g,用于分离和制备骨髓单个核细胞.方法:将小鼠骨髓单个核细胞分为5组在不同的培养体系中进行体外诱导培养:空白对照组(不加任何因子)、树突状细胞组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4)、血管活性肠肽组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽)、地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+地塞米松)、血管活性肠肽+地塞米松组(粒-巨噬细胞集落刺激因子+血管活性肠肽+地塞米松).主要观察指标:光镜下动态观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞CDS0、CD86、CD40、CD11c表达,四甲基偶氮唑盐法检测树突状细胞刺激淋巴细胞增殖的活性,特异性夹心酶联免疫分析测定树突状细胞上清液中白细胞介素10、白细胞介素12的水平.结果:①利用粒-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素4、血管活性肠肽、地塞米松、脂多糖等因子体外培养能生成具有典型树枝状突起的树突状细胞.②树突状细胞组、血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD11c的表达高于空白对照组(P＜0.05).血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组CD40、CD80和CD86表达,淋巴细胞增殖活性及培养上清液白细胞介素12水平均低于树突状细胞组(P＜0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40μg/L、地塞米松组以10 μg/L减低明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40 μg/L、地塞米松为10 μg/L条件下为最低,差异具有显著性意义(P＜0.05).③血管活性肠肽组、地塞米松组、血管活性肠肽+地塞米松组细胞培养上清液中白细胞介素10水平均高于树突状细胞组(P＜0.05),血管活性肠肽组以质量浓度为40 μg/L,地塞米松组以10 μg/L升高明显,其中血管活性肠肽+地塞米松组在血管活性肠肽质量浓度为40 μg/L,地塞米松为10 μg/L条件下为最高,差异具有显著性意义(P＜0.05).结论:①小鼠骨髓单个核细胞体外经粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽或/和地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成致耐受性树突状细胞.②与常规诱导培养树突状细胞方法比较,耐受性树突状细胞具有CD40、CD80、CD86表达低,刺激淋巴细胞增殖弱的特点;耐受性树突状细胞培养体系上清液白细胞介素10水平高而白细胞介素12水平低.③粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管活性肠肽+地塞米松、脂多糖联合诱导培养生成耐受性树突状细胞效果较佳,其中以血管活性肠肽40μg/L、地塞米松10 pg/L的培养条件为最好.