食管癌低表达cDNA片段C6-2A的克隆及表达分析

目的　克隆人食管癌发生相关的基因。方法　用ｍ Ｒ Ｎ Ａ 差异显示技术分离、克隆食管癌组织中不表达或低表达的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段,再通过 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 、ｄｏｔ ｂｌｏｔ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 证实。结果　获得２８０ｂｐ 的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段,命名为 Ｃ６２ Ａ。与 Ｇｅｎ Ｂａｎｋ 基因数据库比较,未发现 Ｃ６２ Ａ 与任何已知基因有同源性。查询 Ｅ Ｓ Ｔ 数据库,发现 Ｃ６２ Ａ 与ｎｅ２７ｂ０３ ,ｓ１ Ｎ Ｃ Ｉ Ｃ Ｇ Ａ Ｐ Ｃ０３ 人ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆８９８５４１ 及人卵巢肿瘤ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆７５５１９６ 等高度同源。 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果显示６／６ 例食管癌组织表达丧失或低表达,ｄｏｔ ｂｌｏｔ 分析表明７／８例食管癌组织低表达, Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 显示食管癌细胞系 Ｅ Ｃ１０９ 、 Ｅ Ｃ８７１２ 、 Ｅ Ｃ９７０６ 和肺腺癌细胞系 Ｇ Ｌ Ｃ８２ 极弱表达,１７／２０ 例食管癌组织表达丧失或低表达,胎儿食管、皮肤、大脑、胎盘较高表达,胎儿胃、肝较弱表达,胎儿心、小肠、肾不表达。结论　在食管癌细胞系和食管癌组织高频率的不表达或低表达提示, Ｃ６２ Ａ 很可能与食管癌的发生、发展有关。     

食管癌MAL基因变化的RNA原位杂交研究

目的 观察食管癌组织及癌旁粘膜ＭＡＬ基因ｍＲＮＡ的表达情况。方法 非放射性ＲＮＡ原位杂交。结果 ３３例配对标本中食管粘膜全部表达ＭＡＬ基因,而只有８例食管癌组织表达,表达与否与临床参数无关。结论 ＭＡＬ基因的表达下调可能是食管癌发生中的重要事件。     

肿瘤标记物CA-50，CA-242和唾液精脒在头颈部肿瘤病人中的测定

采用三明治式固相免疫放射测定法，对头颈部恶性肿瘤病人９９人，良性疾病４２人血清中肿瘤相关抗原ＣＡ－５０和ＣＡ－２４２进行测定，此外，对上述病人还采用￣［１２５］Ｉ标记的固相放免法测定唾液精眯。发现ＣＡ－５０，ＣＡ－２４２和精脒水平在恶性肿瘤病人中增高百分比分别为２７％（２６／９８），４９％（４２／８６）和６２％（４９／７９）。在良性疾病中增高比率分别为１０％（４／４２），２８％（１１／３９）和４０％（１１／２７）。联合使用三个标记物，可以相对提高恶性组的阳性率，降低良性组的假阳性率。１４名恶性肿瘤病人的标记物作了连续测定，结果术后１０～１５天时的ＣＡ－５０值明显低于术前和术后３～４个月时的ＣＡ－５０值，而ＣＡ－２４２和唾液精脒却没有明显变化。     

系列肿瘤标志物免疫放射分析试剂盒的建立及临床应用

我们建立了AFP、CEA、CA-503种肿瘤标志物的免疫放射分析试剂盒(IRMAkit,Immunoradiometric assay kit),并报告初步临床应用结果。 这3种肿瘤标志物的IRMA kit均采用固相单克隆抗体技术、“三明治”夹心模     

肿瘤标志物CA－125免疫放射分析

从瑞典引进有关卵巢癌肿瘤抗原的单克隆抗体ＯＶ１９７作为捕捉抗体，以ＯＶ１８５作为标记抗体，建立了碘标固相双位点夹心模式的ＣＡ－１２５免疫放射分析（ＩＲＭＡ）。该方法的标准曲线斜率自０点至５００Ｕ／ｍｌ为９９．７倍，灵敏度在５Ｕ／ｍｌ以下，批内ＣＶ６．３６％，批间ＣＶ９．８％。初步临床应用检测血清ＣＡ－１２５水平的结果为：正常妇女（３３名）为５．８±３．７８Ｕ／ｍｌ，１９例术前或复发的卵巢癌患者为１７６．４±１７７．２Ｕ／ｍｌ，卵巢癌术后（７例）为８．１±６．３Ｕ／ｍｌ；以３５Ｕ／ｍｌ为阳性界值，卵巢癌诊断阳性率为７３．７％，３３名正常人中无假阳性。７例术后卵巢癌患者ＣＡ－１２５水平降至正常范围。说明此ＩＲＭＡ在卵巢癌的诊断和监测中有较大应用价值。该方法是我国第一个国产ＣＡ－１２５ＩＲＭＡ试剂盒，已开始在全国推广应用。     

肿瘤相关抗原CA 19－9免疫放射分析（IRMA）与免疫酶标分析（IEMA）

以抗ＣＡ１９－９单克隆抗体Ｃ２４１为捕捉抗体，以Ｃ１９２为标记抗体建立了ＣＡ１９－９免疫放射分析（ＩＲＭＡ）和ＣＡ１９－９免疫酶标分析（ＩＥＭＡ），ＣＡ１９－９ＩＲＭＡ的标准曲线斜率Ｂ３００ｕ／Ｂ０为３７．１倍，可测定下限在４Ｕ／ｍｌ以下，批内ＣＶ５．１％，批间ＣＶ９．４％，平均回收率９８．６％。ＣＡ１９－９ＩＥＭＡ的标准曲线斜率Ｂ１５０ｕ／Ｂ０为８８．２倍，批内ＣＶ为２．４７％，批间ＣＶ为５．４％，回收率９９．５％。以ＩＲＭＡ方法检测正常血清９９例，ＣＡ１９．９为１２．９±８．５Ｕ／ｍｌ；胰腺癌患者３０例，血清ＣＡ１９－９为１６５．３±１１７．２Ｕ／ｍｌ。以３０Ｕ／ｍｌ为正常上限，则对胰腺癌检测的灵敏度为８６．６％，特异性９６．９７％，说明该方法在胰腺癌诊断中有重要应用价值。本文中的ＣＡ１９－９ＩＲＭＡ已成为第一个国产ＣＡ１９－９试剂盒，开始在全国推广应用。     

用灵敏的甲胎蛋白的免疫放射分析测定正常中国人血清AFP的水平

自1963年Abeleu等发生现甲胎蛋白(α—fetoprotein简称AFP)后,使原发性肝细胞瘤的诊断有所突破,也为肝癌的监测,提供有效的手段。同时,甲胎蛋白的测试为睾丸、卵巢胚胎性肿瘤的诊断和鉴别诊断,胎儿先天性疾病的诊断都贡献了新的方法。甲胎蛋白的研究为肝癌流行病调查,及其他理论研究提供重要途径,成为最有用的肿瘤标志之一。本文介绍应用固相技术,~(125)I标记甲胎蛋白单克隆抗体建立新一代的免疫放射(Immunoradio metric assdy,IRMA)分析法,并用于临床检测的初步结果。     

甲胎蛋白的时间分辨荧光免疫分析

免疫分析方法问世的三十年来,相继发展了放射免疫(RIA),酶免疫(EIA),荧光免疫(FIA)以及化学发光(CIA)等多种同位素和非同位素免疫分析方法,分析灵敏度有了很大的提高。新近研制的时间分辨荧光免疫分析(Timeresolved fluoroimmunoassay,简称Tr—FIA)是免疫分析中具有最高灵敏度的超微量分析技术之一,其最小检出值为10~(17)Mol。Tr     

甲胎蛋白的免疫酶量度分析(IEMA)

将纯化的抗甲胎蛋白单克隆抗体包被到聚苯乙烯小珠(Φ=6mm)上,制成“固相抗体”,用过碘酸钠法使辣根过氧化物酶与甲胎蛋白的单克隆抗体醛化缩合。经过还原、硫酸铵沉淀等程序,制成纯度高、稳定性好的“标记抗体”。当反应系统中加入标准AFP或被测血清时,形成“三明治”固相夹心模式的双位点免疫酶量度分析(IEMA)。该方法灵敏度高、标准曲线斜率大,能测出2.5ng/ml 以下的AFP含量,且准确度高,批内变异系数为4.3％、批间为15.5％。加入血清中AFP的回收率为88.5％。30名正常人血清AFP水平为1.81±1.08ng/ml,一般都在10ng/ml以下,这与国外报道的测定值一致。18例原发性肝细胞癌患者,血清AFP值为5105±489.1ng/     

MAL基因在人食管癌中表达显著下调

研究ＭＡＬ基因在人食管癌中的表达下调状况。方法采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测了ＭＡＬ基因在４１对配对的食管癌组织和相应癌旁食管粘膜中的表达;应用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ方法分析了ＭＡＬ基因在３个食管癌细胞系ＥＣ１０９、ＥＣ８７１２和ＥＣ９７０６中的存在及其表达。