问号钩端螺旋体胶原酶结构和功能分析

目的：研究问号钩端螺旋体(简称问号钩体)致病机理，预测问号钩体胶原酶结构和功能，为进一步实验验证提供线索。方法：利用各种公共核酸及蛋白数据库资源，运用多种生物学软件对钩体胶原酶基因及其编码产物的结构和功能深入分析。结果：对问号钩体胶原酶进行了结构域归类；对其基因、蛋白的一般特性，蛋白一级结构，二级结构和超二级结构等作了对比性分析；对其序列中的部分片段：进行三维结构模拟；并绘制了其分子进化树，分析其垂直进化关系。结论：问号钩体胶原酶和其它多：种致病性微生物胶原酶具有不同层次、程度不等的相似性。它属于锌蛋白酶超家族和M9-蛋白酶家族。它可能在钩体浸润宿主并造成宿主多脏器出血等方面起重要作用。     

淋巴因子激活的杀伤细胞和重组的白细胞介素2对肿瘤的过继性免疫疗法

过继性免疫疗法(adoptive immun-otherapy)是将具有抗肿瘤效应的单个核细胞输入带瘤宿主,通过直接或间接的机制介导肿瘤的消退。过继性免疫疗法的主要优点包括:1.抗肿瘤作用不依赖于宿主的免疫成份;2.对肿瘤有特异的杀伤活性,对受者正常组织无害,所以宿主的毒性反应轻微;3.应用了已知的参与同系肿瘤和同种异体移植排斥的细胞机制。通过动物模型实验,对肿瘤过继性免疫疗法的疗效已有许多报导,并提出判定过继     

健康人群外周血各类血细胞CD55/CD59的表达

目的了解健康人群外周血细胞CD55/CD59表达情况。方法用流式细胞仪检测健康人红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞膜上CD55/CD59表达。结果80名健康人外周血不同类型的血细胞膜上CD55/CD59表达不同。正常红细胞CD55/CD59双阳性的红细胞中位数为85.100%,阵发性血红蛋白尿症(PNH)细胞<0.200%;正常中性粒细胞双阳性细胞中位数为99.900%,PNH细胞<0.100%;单核细胞双阳性细胞的中位数为93.000%,PNH细胞<2.900%。淋巴细胞双阳性细胞中位数为72.600%,PNH细胞<18.000%。正常淋巴细胞中所含的PNH细胞比例明显高于其他细胞(P<0.01),且主要为T淋巴细胞。结论健康人的外周血各种血细胞CD55/CD59表达不同,分析结果有助于对PNH等干细胞疾病的诊断和发病机制进行探讨。     

DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG_2细胞的作用

目的:构建DRAM全长cDNA的真核表达载体pEGFP-DRAM,观察DRAM在人肝细胞HepG2中的作用。方法:应用RT-PCR技术扩增获得DRAM全长cNDA,克隆扩增产物,经酶切、DNA测序鉴定正确后,构成pEGFP-DRAM的真核表达重组质粒。用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,在激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察DRAM的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和死亡细胞,MTS法检测细胞增殖能力,Westernblot鉴定细胞表达蛋白质的水平,并在透射电子显微镜下观察自噬体。结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-DRAM,经DNA测序证实与GenBank中的人DRAM cDNA序列一致。LSCM下可观察到转染DRAM的细胞中有绿色荧光蛋白的表达。流式细胞分析仪检测显示,转染DRAM的HepG2死亡细胞明显增高(P<0.05);G1期细胞百分数则明显减少(P<0.05);MTS法检测结果显示转染DRAM的HepG2细胞增殖力明显增高(P     

结肠癌组织中TGFβ1及其Ⅱ型受体和Smad4蛋白的表达

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Sm ad4的关系,及其在结肠癌中的可能作用机制。方法用EnV ision免疫组化法检测38例石蜡包埋人结肠癌标本中TGF-β1、TβRⅡ和Sm ad4蛋白的表达情况。结果TGF-β1阳性率为52.6%(20/38),65.8%的TβRⅡ和63.2%的Sm ad4表达下降。Sm ad4的表达与肿瘤分化程度及Dukes分期相关(P<0.05)。TGF-β1与TβRⅡ之间有相关关系(P<0.05)。结论TGF-β1与TβRⅡ对结肠癌的发生可能有协同作用。Sm ad4是TGF-β信号通路中的关键因子,但Sm ad4上游可能还存在其他信号通路,调控其表达。     

临床教学实训中心的构建和应用

临床教学是医学教育过程的重要组成部分,临床教学质量的高低与医学人才的培养质量有直接关系。随着医学模式的转变、医疗体制改革的深化以及患者自我保护意识的提高,医学生的临床教学面临着许多新的课题。为有效解决临床技能教学与临床医疗之间的矛盾,本院于2003年底在承担本科以上临床医学教学的5个附属医院建立了临床教学实训中心,运用高级综合模拟人系统和其他模拟模型,对学生进行临床技能训练,取得了满意的教学效果。     

hVEGF基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面中Fn和整合素α5表达的研究

目的探讨将含人血管内皮细胞生长因子（hVEGF）重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,在创面愈合过程中对细胞外基质中纤维连接蛋白（Fn）及其受体整合素α5表达的影响。方法通过建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,采用免疫组化方法并结合图像分析,分别观察并测定实验组和对照组大鼠创面愈合3、7、14、29d时创面中Fn和整合素α5表达的平均光密度值,判断其在创面中表达的强弱。结果在术后3、7、14d时,实验组中Fn表达显著高于对照组（P〈0．05）;在术后14、29d时,实验组中整合素α5表达显著高于对照组（P〈0．05）。结论将hVEGF基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,在创面愈合的早、中期促进Fn的表达;在创面愈合中、晚期,上调整合素α5的合成与分泌,从而有利于创面愈合。     

致病性钩端螺旋体对豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的抑制作用

目的通过比较不同毒力钩端螺旋体对豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨固有免疫在钩端螺旋体病发病机制中的作用。方法用三种不同毒力的钩体（致病性问号钩端螺旋体赖型有毒株Lai株、赖型无毒株IPAV株以及非致病性双曲钩端螺旋体Patoc型Patoc Ⅰ株）分别感染体外培养的豚鼠腹腔巨噬细胞,并分别于感染后0.5、1．5、3和6h加入热灭活表皮葡萄球菌孵育30min,通过计算巨噬细胞对灭活表皮葡萄球菌的吞噬率和吞噬指数,检测钩体对巨噬细胞吞噬功能的影响;感染后3h透射电镜观察巨噬细胞对钧体的吞噬、降解和细胞超微结构的变化;     

豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬钩端螺旋体的机制研究

目的 研究豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬钩端螺旋体毒力株的机制,探讨天然免疫在钩端螺旋体病发病机制中的作用。方法 提取豚鼠腹腔巨噬细胞,感染1 h前分别加入细胞微丝阻断剂cytochalasin D、微管阻断剂colchicine和PI3K信号通路阻断剂LY294002,同时设立不含阻断剂的对照组,1 h后检测细胞活性。与致病性问号钩体赖型Lai株共同孵育3 h后,激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞吞噬钩体的形态学特征,流式细胞术检测各组吞噬率。结果 对照组巨噬细胞对钩体的吞噬率为（38.98±0.91）%;cytochalasin D组、colchicine组和LY294002组的吞噬率分别为（23.99±1.40）%、（40.81±0.91）%和（39.64±3.56）%;cytochalasin D组吞噬率明显低于对照组（P<0.05）;colchicine组和LY294002组与对照组比较差异无统计学意义（均P>0.05）。结论 微丝参与了豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬毒力钩体的过程,微管在吞噬过程中不起关键作用,微丝的变化不依赖PI3K信号通路。     

问号钩体趋化相关基因特征分析

目的 预测问号钩体黄疸出血群赖型赖株的趋化信号传导途径，并深入分析趋化相关基因。方法 使用ProtParam tool，NCBI／Blastp进行蛋白参数分析和结构域分析，使用Clustalw软件进行多序列对比，与大肠埃希菌K-12趋化相关基因进行比较。结果 问号钩体趋化相关基因共30个，分为MCPs和che两组基因，功能与大肠埃希菌趋化相关基因相似，并预测出问号钩体趋化信号传导途径。结论 问号钩体趋化相关基因较大肠埃希菌、苍白密螺旋体和伯氏疏螺旋体多，提示其趋化传导途径更为复杂，适应宿主的能力也更强，可能是钩体的重要毒力因子之一。