毛细胞PMCA2在小鼠内耳Ca2+调节和听觉平衡中的作用

目的： 研究小鼠内耳毛细胞细胞膜Ca²⁺-ATP酶2型蛋白（PMCA2）在听觉平衡生理中的作用及意义。 方法：利用不同基因型小鼠PMCA2^-/-(突变纯合子)、PMCA2^+/-(杂合子)和PMCA2^+/+(野生型)为实验对象，采用听觉脑干反应(ABR)、畸变产物耳声发射(DPOAE)和耳蜗内电位(EP)检测等方法，分别检测不同基因型小鼠的内耳生理功能。结果：PMCA2^+/+野生型鼠的听力正常，ABR的短声(click)阈值为(13.75±11.08)dB SPL；EP均值为(91.3±11.0)mV。PMCA2^+/-杂合子小鼠听力低于同窝PMCA2^+/+野生型鼠，ABR的短声阈值为(63.89±12.90)dB SPL，与PMCA2^+/+小鼠比较差异显著(P<0.01)；PMCA2^+/-小鼠没有检测出DPOAE的高频区辐值，其EP均值为(80.7±9.0)mV。PMCA2^-/-小鼠的ABR在100 dB SPL无反应，表现出全聋和平衡功能失调，其EP均值为(56.6±13.0)mV；PMCA2^-/-小鼠没有检测出DPOAEs。结论：PMCA2是内耳毛细胞纤毛丛上的重要Ca²⁺转运通道，对维持内耳的Ca²⁺代谢和听觉平衡功能有重要作用。     

离子转运蛋白抑制-听觉实验研究NKCC1和Na,K-ATPase在耳蜗K+循环中的作用

目的通过离子转运蛋白抑制-听觉功能实验,探讨NKCC1和Na,K-ATPase在内耳K 循环及听觉中的作用,并验证耳蜗K 循环模式与听觉的关系。方法应用NKCC1抑制剂呋塞米(Furosemide)和Na,K-ATPase抑制剂乌巴因(Ouabain),对CBA/CaJ和Castel两种鼠系进行离子转运蛋白抑制-听觉实验,检测小鼠的听觉脑干反应(ABR)阈值。结果Furosemide 0.2 mg/g注射30 min后,小鼠的ABR阈值明显升高,与正常对照组比较差异有极显著性意义(P<0.01)。Ouabain 0.003μg/(g.d)连续注射5 d后,小鼠的ABR阈值也明显升高,与对照组相比较差异有极显著性意义(P<0.01)。而先后注射Ouabain和Furosemide,ABR阈值虽较正常对照组升高(P<0.05),但低于单独注射Ouabain组(P<0.05)和明显低于单独注射Furosemide组(P<0.01)。停药3 d后,小鼠的ABR阈值均恢复到接近正常对照组的阈值(均P>0.05)。结论在小鼠实体中验证了NKCC1和Na,K-ATPase是耳蜗K 循环的关键离子转运蛋白,其中任一功能失衡均可影响听觉功能。     

ABR和DPOAE检测研究NKCC1在不同基因型小鼠耳蜗听觉中的作用

目的 应用听性脑干反应(ABR)和畸变产物耳声发射(DPOAE)技术检测不同基因型NKCC1小鼠的听觉功能,研究NKCC1在耳蜗听觉功能中的作用.方法 利用ABR和DPOAE实验检测不同基因型NKCC1小鼠的听觉功能.结果 NKCC1 / 野生型小鼠听力正常,ABR检测的短声(click)阈值为(23.13±3.78) dB SPL;NKCC1 /-杂合子小鼠听力低于NKCC1 / 野生型小鼠,其短声阈值为(38.49±12.29) dB SPL.NKCC1 / 和NKCC1 /-小鼠ABR的阈值均值在各个频率的差异有极显著性意义(均P<0.01);NKCC1-/-突变纯合子鼠的ABR的各个频率在100 dB均无反应,呈现全聋.与NKCC1 / 小鼠比较,NKCC1-/-小鼠没有DPOAE的检出.结论 耳蜗NKCC1在小鼠的听觉生理中有重要作用,NKCC1缺失或是功能受限均可影响耳蜗的听觉功能.     

L型电压门控钙通道α1D亚基在内耳毛细胞的分布及在听力中的作用

目的探讨L型电压门控钙通道α1D亚基在内耳毛细胞的分布及在听力中的作用。方法应用免疫细胞化学荧光标记观察L型电压门控钙通道α1D亚基在牛蛙毛细胞上的分布;利用听性脑干反应(ABR)检测携带不同L型电压门控钙通道α1D基因型(α1D / 、α1D /-和α1D-/-)小鼠的听力。结果L型电压门控钙通道α1D亚基主要密集分布于毛细胞侧膜和顶膜,在毛细胞的胞核区域和纤毛丛处没有阳性荧光染色。三种α1D基因型小鼠的ABR检测结果显示,α1D / 野生型小鼠的短声反应阈正常,为34.8±5.7dBSPL;α1D /-杂合子小鼠反应阈高于同窝生α1D / 野生型小鼠,为54.4±12.4dBSPL;α1D-/-小鼠呈现全聋,ABR在100dBSPL时仍无反应。结论L型电压门控钙通道的α1D亚基分布在牛蛙毛细胞的侧膜和顶膜,在内耳的听觉生理中具有重要作用。L型电压门控钙通道α1D亚基缺失或是数量的减少均可以影响小鼠听力。     

3例累及邻近多部位的儿童鼻腔鼻窦胚胎型横纹肌肉瘤临床分析

目的探讨儿童横纹肌肉瘤（rhabdomyosarcoma,RMS）的临床特点、影像学检查及临床病理学特征,以期减少漏诊误诊,提高临床诊断和鉴别诊断水平。方法回顾性分析3例不典型学龄前期儿童RMS的详细临床资料并复习相关文献。结果2例以眼部症状为主诉收入院,1例罕见以反复鼻腔出血并睡觉打鼾为主诉收入院,相关影像学检查显示肿瘤多已广泛侵犯破坏周围结构,行相关手术病理确诊,均为胚胎性RMS。免疫组化显示3例患者Myogenin均为阳性,Ki 67（LIt分别约为90%、80%、70%）,其中2例VIM阳性,2例DES（部分或者局灶性）阳性,2例CD99阳性。后转入肿瘤科规律治疗。结论儿童RMS早期临床表现不典型呈现多样化,具有恶性程度高、侵袭性强、进展快等特点,需要根据临床特征结合影像学检查及免疫组化结果确诊。     

小鼠内耳显微解剖技术照明方法的改进

目的介绍连续变倍体视显微镜(Zoom-stereo microscope)的一种特殊的暗视野照明方法在内耳显微解剖中的应用。方法在小鼠耳蜗解剖中,采用纤维导光束(也称万向冷光源)从玻璃平皿侧面照射(侧射式),使光线从侧面进入,经标本反射后进入连续变倍体视显微镜光学系统而成像;并与常规的两种照明方法(落射式和透射式)的效果进行比较。结果侧射式照明效果明显比落射式和透射式好,其背景光线的干扰显著降低,达到暗视野成像效果。结论采用侧射式照明,可以提高内耳显微解剖技术的水平。     

耳蜗血管纹钾钠氯化合物协同转运子对年龄相关性听力下降的影响

目的 观察具有年龄相关性听力下降（age-related hearing loss，AHL）特点的不同周龄C57BL／6J鼠和钾钠氯化合物协同联合转运子-1（Na-K-2Cl cotransporter-1，NKCC1）基因敲除鼠年龄相关性听力改变与耳蜗血管纹NKCC1表达的情况，并检测不同龄的NKCC1^＋/-杂合子小鼠耳蜗NKCC1蛋白表达及耳蜗扫描电镜形态变化，研究血管纹NKCC1在老年性聋发病中的作用。方法 应用听性脑于反应（ABR）分别检测4、8、16、32、48、60周龄组C57BL／6J小鼠和两种基因型NKCC1小鼠的听力，采用免疫组化法观察其血管纹NKCC1表达的变化，同时采用免疫印迹杂交（Western Blot）检测不同周龄小鼠耳蜗的NKCC1蛋白的含量，扫描电镜观察不同周龄小鼠的耳蜗基底膜结构。结果 C57BL／6J小鼠随鼠龄增加而出现听力下降，自16周龄时ABR阈值出现显著性增高（P〈0．05）；血管纹NKCC1蛋白表达也呈现随鼠龄增加而逐步减低，其灰度值自16周龄时显著增高（P〈0．01）。NKCC1^＋/-杂合子鼠的听力随鼠龄增长而逐渐下降，老龄小鼠的ABR阈值与其低龄时相比，阈值显著性升高（P〈0．05）。老龄小鼠的耳蜗NKCC1蛋白含量低于低龄小鼠，老龄NKCC1^＋／-小鼠的耳蜗底回外毛细胞（OHC）出现散在性点状缺失。结论 AHL小鼠血管纹NKCC1蛋白表达随年龄增长而减少，显示与AHL相关，老年性聋的发病可能与血管纹NKCC1通道蛋白的遗传特性及功能有关。     

小鼠耳蜗侧壁α2 Na,K-ATPase在听觉及年龄相关性听力下降中的作用

目的探讨耳蜗侧壁α2Na,K-ATPase通道在听觉功能和年龄相关性听力减退中的作用。方法利用半拷贝基因的α2Na,K-ATPase /-杂合子小鼠作为试验平台,采用听性脑干反应(ABR)和耳蜗内电位(endoco-chlear potential,EP)检测方法,对α2Na,K-ATPase /-杂合子小鼠和α2Na,K-ATPase / 野生型小鼠进行ABR和EP检测,并对各个鼠龄段的小鼠进行ABR检测。结果α2Na,K-ATPase /-杂合子小鼠的听力和EP值均低于α2Na,K-ATPase / 野生型鼠;α2Na,K-ATPase /-杂合子小鼠的听力随鼠龄增长而逐渐下降,高龄期小鼠的ABR阈值与其低龄时相比显著性升高(P<0.05)。结论耳蜗侧壁的α2Na,K-ATPase通道对听觉功能具有重要作用;携带半拷贝基因的αNa,K-ATPase /-杂合子小鼠表现出轻度年龄相关性听力减退。     

质膜钙ATP酶异构体1～3在新生大鼠耳蜗基底膜的表达

目的：通过 Western blot 方法检测质膜钙 ATP 酶异构体1～3（plasma membrane Ca2＋－ATPase isoforms 1～3,PMCA1～3）在新生大鼠耳蜗基底膜（basilar membrane,BM）的表达,并检测PMCA2在单个新生大鼠耳蜗毛细胞纤毛的表达量。方法①取出生后2天（P2）和8天（P8）健康SD大鼠各4只,断头后分离出BM,提取总蛋白,分别取20μg,通过 Western blot法检测BM的PMCA1～3表达。②取P2和P8大鼠BM总蛋白3μg,通过 Western blot方法检测BM的PMCA2的表达。③取4只P8大鼠,分离出BM,提取总蛋白,分别取5、10、20μg总蛋白并取100、400和800 ng牛血清白蛋白（BSA）作为对照组,跑完电泳后将胶分为2部分,部分泳道用于SYPRO染胶,其余泳道用于 Western blot检测PMCA2的表达。结果①在20μg 的 P2和 P8大鼠BM总蛋白中,PMCA1仅有微弱的表达（分别为0．126±0．024、0．131±0．012）,PMCA2表达水平较高（分别为4．16±0．528、4．25±0．319）,PMCA3几乎没有表达（均为0）,三者间差异有统计学意义（P＜0．05）。②在3μg 的P2和P8大鼠BM总蛋白中,P8大鼠PMCA2的表达水平（4．571±0．336）高于P2大鼠（3．622±0．285）,差异有统计学意义（P＜0．05）。③PMCA2在单个P8大鼠BM的含量约为2．5 ng。结论 PMCA1～3在新生大鼠耳蜗BM的表达水平不同,PMCA2表达量最大,这可能是由于耳蜗毛细胞对这几种PMCA亚型有不同的Ca2＋调节需求。     

耳蜗电图诊断梅尼埃病的灵敏度研究

目的：探讨耳蜗电图在梅尼埃病（MD）诊断中的应用价值。方法：将测试对象分为确诊、可能和疑似MD组,将可能和疑似MD组合并为可疑MD组。依据纯音听阈测试结果对确诊MD组患耳按听力损失程度进行病情分级。采用短声（click）和1 000、2 000、4 000Hz 3种频率tone burst（TB）分别对测试耳进行耳蜗电图测试,并计算和电位（SP）与听神经复合动作电位（AP）的振幅比值（SP/AP）,同时采用由click刺激声引出的AP疏波和密波潜伏期的差值（AP shift）辅助诊断。分别计算不同刺激声不同测试方法的诊断阳性率,比较MD的诊断阳性率。结果：确诊MD组click SP/AP阳性率为41.2%,TB 1 000、2 000、4 000Hz阳性率分别为80.4%、72.5%、37.3%,AP shift阳性率为45.1%。配对χ^2检验显示,TB 1 000 Hz与click SP/AP阳性率比较、TB 2 000Hz与click SP/AP阳性率比较均差异有统计学意义（均P〈0.01）,其中TB 1 000Hz诊断阳性率最高,即灵敏度最高。确诊MD组与可疑MD组患耳click SP/AP阳性率分别为41.2%和12.0%（P〈0.05）,AP shift阳性率分别为45.1%和8.0%（P〈0.01）,χ^2检验显示2组间click SP/AP和AP shift阳性率差异有统计学意义。结论：耳蜗电图在MD诊断及鉴别诊断中作用显著,特别是采用1 000Hz和2 000HzTB刺激声,其诊断灵敏度高达80.4%和72.5%。AP shift也被证明是一种有效的测量方法,在辅助诊断MD中作用显著。