毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变

目的：探讨利用毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变的临床应用价值。方法：采用毛细管电泳作SSCP分析，检测20例结肠癌肿瘤标本p53基因第7外显子PCR扩增产物，并与传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行比较，最后用DNA序列测定判断其准确性。结果：20例结肠癌标本中，毛细管电泳技术检测出5例标本(Ca4，Ca6，Ca7，Ca8，Ca14)有突变，而凝胶电泳结合银染技术仅检出4例标本(Ca4，Ca6，Ca7，Cal4)有突变，测序证实经毛细管电泳所检出的5例标本均存在点突变。结论：对于PCR产物的单链构象多态性分析，毛细管电泳技术是一种更加快速、简便、敏感的方法，可应用于临床筛查基因点突变。     

重组人脑髓鞘碱性蛋白及其抗体的研究

将EcoR1和SalⅠ酶切的人脑髓鞘碱性蛋白（MBP）基因cDNA克隆片段与表达载体pGEX-5T重组后转化大肠杆菌，经筛选，增殖和IPTG诱导，阳性克隆SDS－PAGE结果证实表达一条特异42KDa区带，Western印记杂交证实该区带具MBP抗原特异性，免疫斑点杂交和ELISA检测表达产量占菌体可溶性蛋白含量6％，达到414.6mg/L菌液，将含可溶性MBP蛋白的菌液后SDS－PAGE分离纯化得重组MBP抗原，对新西兰兔进行背部皮下多点注射，5次免疫后以琼脂板免疫双扩法检测抗效价达1：16，并通过免疫斑点杂交和Western印亦杂交证实证抗体具抗MBP特异性。     

单纯疱疹病毒TK基因介导GCV治疗人RB肿瘤的实验研究

为探讨HSV－TK基因介导的GCV系统对人视网膜母细胞瘤（RB）基因治疗的有效性,利用电穿孔技术把重组逆转录病毒载体pLXSNTK导入包装细胞PA317,筛选出逆转录病毒产生细胞PA317/TK,收获病毒。体外实验：用逆转录病毒感染RB细胞,筛选出含TK基因的RB细胞（RB/TK）,用GCV分别处理RB、RB/TK及不同比例的混合细胞。体内实验：建立人RB裸鼠原位异种移植模型,瘤内注射病毒液后再经GCV处理。结果：体外实验RB/TK细胞对GCV的敏感性显著高于RB细胞,并存在旁观者效应;RB荷瘤裸鼠内TK/GCV系统对RB细胞的生长也有明显的抑制作用。提示HSVTK/GCV系统有望成为人RB肿瘤的基因治疗途径。     

单纯疱疹病毒TK基因介导GCV治疗人RB肿瘤的实验研究

为探讨ＨＳＶ－ＴＫ基因介导的ＧＣＶ系统对人视网膜母细胞瘤（ＲＢ）基因治疗的有效性,利用电穿孔技术把重组逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ＴＫ导入包装细胞ＰＡ３１７,筛选出逆转录病毒产生细胞ＰＡ３１７／ＴＫ,收获病毒。体外实验：用逆转录病毒感染ＲＢ细胞,筛选出含ＴＫ基因的ＲＢ细胞（ＲＢ／ＴＫ）,用ＧＣＶ分别处理ＲＢ,ＲＢ／ＴＫ及不同比例的混合细胞。体内实验：建立人ＲＢ裸鼠原位异种移植模型,瘤内注射病毒液后再     

载自杀基因聚丙交酯乙交酯纳米粒的研制

目的 :对载自杀基因聚丙交酯乙交酯纳米粒的制备工艺进行考察 ,并评价其体外质量。方法 :以聚丙交酯乙交酯为载体材料 ,采用复乳溶媒蒸发法制备载 pEGFP TKAFB重组质粒纳米粒 ,并对其形态、包封率、体外释放、抗核酸酶抗超声的能力等进行研究。结果 :纳米粒形态圆整、大小均匀 ,平均粒径为 72nm ,平均包封率为 91.2 5 % ,体外释药速度依赖于载体材料的分子量 ,质粒制成纳米粒后对抗超声剪切及核酸酶降解的能力增强。结论 :本纳米粒制备工艺简单 ,质量可控。     

microRNA启动子区甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响

目的研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs（miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a）表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR) 处理人肺癌细胞A549,分别作用24 h、48 h、72 h,采用CCK8法检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率。20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h,通过甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞相关miRNAs启动子甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测A549细胞相关miRNAs表达水平的变化。20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞0 h、24 h、48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力（计算细胞在24 h和48 h的划痕愈合率）;作用48 h,采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果CCK8结果显示,随着5-Aza-CdR的处理浓度升高、时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加。经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MSP结果表明,实验组相对于对照组甲基化引物扩增条带减弱,而非甲基化引物扩增条带增强;Real-time PCR结果显示,相关miRNAs表达水平升高（P<0.05）。由划痕实验和Transwell检测结果揭示,经5-Aza-CdR处理后,A549细胞的生长愈合能力降低（P<0.05）,并且侵袭到Transwell小室滤膜下表面的细胞数亦减少（P<0.05）。结论人肺癌细胞A549经5-Aza-CdR去甲基化处理后,miRNAs表达水平升高,进一步抑制肺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。     

新兵强化训练前后精神卫生状况分析

采用症状自评量表（ＳＣＬ－９０）、艾森克个性问卷（ＥＰＱ）为工具，在某部队参加强化训练的新兵团体抽取了９４５名战士进行追踪观察半年，结果表明：强化训练后新兵症状因子总分、阳性项目数及大部分因子分明显高于训练前，提示新兵强化训练后精神卫生状况较训练前差。这为今后战士精神疾患的防治提供了参考依据。     

DNA错配修复基因MSH2和MLH1单核苷酸多态性与食管癌发生风险相关性研究

目的:探讨DNA错配修复基因MSH2和MLH1单核苷酸多态性对于食管癌易感性的潜在作用。方法:采用医院为基础的病例-对照研究方法,应用PCR-RFLP检测包括正常对照132例,食管癌患者169例MSH2c.2063TG和MLH1IVS14-19AG两个基因多态性位点的基因型。通过Logistic回归分析计算出比值比(OR)和95%置信区间(95%CI),估计不同基因型频率分布与食管癌发生风险的关系。结果:MSH2c.2063TG携带突变等位基因个体发生食管癌的风险是非携带者的3.24倍。MLH1IVS14-19AG突变等位基因携带者发生食管癌风险是非携带者的1.58倍。对MSH2和MLH1基因交互作用分析发现两突变基因型携带者发生食管癌风险大大增加并具有显著的统计学意义。结论:DNA错配修复基因MSH2c.2063G突变等位基因和MLH1IVS14-19G突变等位基因可能在促成食管癌发生过程起到一定作用。     

给男人最受用的待遇

很多女人会说,我付出了那么多,怎么遇到的尽是"白眼狼"?有个很资深的心理学家说:付出只是单方面的行为,对方并不一定受用。你给了他在家的待遇吗?待遇是一种发自内心的尊重,而不是你单方面的操心着急,柴米油盐,板起脸的一餐饭。友人丹妮聊起严歌苓的一个访谈,她提到了丈夫的待遇问题:有些女人在家里穿着邋遢,从来无视先生的目光。严说自己在家写作,但是在先生下班时会尽量穿戴整洁,头发梳整齐,神清气爽,让先生看到一个干净清     

咽鼓管导管在分泌性中耳炎治疗中的应用

分泌性中耳炎是以传导性聋和鼓室积液为主要特征的中耳非化脓性疾病,是儿童和成人常见听力下降原因之一。本病病因至今尚不明了,可能与咽鼓管功能障碍、中耳局部感染和变态反应等有关。目前,临床治疗原则为积极治疗原发病,应用抗生素、促纤毛运动及黏液溶解药物、波氏球咽鼓管吹张、鼓膜穿刺抽液、鼓膜切开置管等。近年来咽鼓管导管被更多的应用于分泌性中耳炎的治疗中,取得了一定的疗效,统计我科于2010～2011年以咽鼓管导管治疗分泌性中耳炎67例,取得了很好的疗效,同时也感受到该种治疗不能在任何情况下都做为首选,更不能做为唯一的治疗手段。现报道如下。