转基因斑马鱼模型应用于索拉非尼抗肝癌活性筛选的方法研究

目的 使用斑马鱼 (Danio rerio) 肝癌模型进行药物筛选,确定筛选方法和最适条件。方法 用不同浓度盐酸多西环素 (Dox) 处理转基因斑马鱼胚胎,诱导其肝脏异常增生,通过综合评价诱导效应与毒性效应,确定适合的诱导浓度;选择适宜的诱导浓度,对索拉非尼抑制肝部异常增生的能力进行评估。结果 确定了盐酸多西环素的最适诱导浓度为30~60mg/L,索拉非尼对斑马鱼模型的肝部异常增生有显著的抑制作用,同时也观察到药物的毒副作用。结论 该模型适用于索拉非尼及其类似物抗肝癌活性的评价与筛选,是评估化合物体内生物活性的快速筛选模型,同时也可以观测毒副作用,在其它抗肝癌药物及与Ras下游信号通路相关靶点的药物的筛选等方面具有广阔的应用前景。     

高尔基体磷酸蛋白3在癌症治疗领域的研究进展

高尔基体磷酸蛋白3是一个外周膜蛋白,主要定位于高尔基体及囊泡.高尔基体磷酸蛋白3在肿瘤细胞的存活,增殖,侵袭迁移中发挥着至关重要的作用,因此在癌症的临床研究中具有很大的潜在价值.本文对高尔基体磷酸蛋白3的生物功能进行剖析,对近些年高尔基体磷酸蛋白3通过不同的方式促进肿瘤发生发展的相关研究进行总结,以期为开发出以高尔基体磷酸蛋白3为靶点的癌症治疗方式提供理论依据,为肿瘤的诊断和预后提供新思路.     

基于斑马鱼胚胎表型的Wnt/β-catenin信号通路小分子抑制剂的筛选方法

目的利用模式生物斑马鱼,建立1种基于胚胎表型的直观、快速的小分子抑制剂筛选方法,从而高效筛选和评价小分子化合物对体内Wnt/β-catenin信号通路的抑制活性。方法 Wnt/β-catenin信号通路激活剂6-bromoindirubin-3-oxime(BIO)处理受精后6 h斑马鱼胚胎,检测胚胎48 hpf眼睛发育情况;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理6 hpf斑马鱼胚胎,检测48 hpf胚胎心脏不对称发育情况;小分子化合物与BIO共同处理6 hpf斑马鱼胚胎,检测斑马鱼眼部表型营救情况。结果 Wnt/β-catenin信号通路激活剂BIO处理斑马鱼胚胎,48 hpf胚胎出现"无眼"表型;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂i CRT3、PNU-74654处理斑马鱼胚胎,48 hpf胚胎心脏左右不对称发育出现异常;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939、PNU-74654分别与BIO共同处理斑马鱼胚胎,48 hpf能够显著营救由BIO激活所导致斑马鱼的眼部缺失表型。已知Wnt/β-catenin信号通路异常激活与诸多癌症密切相关,实验为筛选具有靶向...     

利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼sf3a1基因敲除突变体

目的 剪接因子SF3A (splicing factor 3a) 的三个亚基(SF3A1、SF3A2、SF3A3)对U2 snRNP的功能发挥和前剪接小体(prespliceosome)的组装至关重要。SF3A1突变会导致骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性粒细胞白血病(CMML)和急性粒细胞白血病(AML)等血液系统疾病。为了研究SF3A1/Sf3a1在生物体中的详细生理功能及其调控机制,本文构建了斑马鱼sf3a1基因敲除突变体。方法 利用CRISPR/ Cas9技术构建斑马鱼sf3a1突变体,通过T7酶切及基因组测序筛选得到F0代及能够稳定遗传的F1代突变体,F1代自交后得到F2代,观察sf3a1纯合缺失对斑马鱼生长发育的影响。结果 基因型鉴定结果显示,本研究得到了2种不同类型的突变品系,分别为-7 bp和-2+13 bp。杂合sf3a1突变体正常存活且可育,而合子型纯合突变体斑马鱼胚胎发育出现明显异常,24 hpf时期胚胎细胞出现大量凋亡,胚胎发育迟缓,并于72 hpf之前死亡。结论 研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了斑马鱼sf3a1基因敲除突变体,为探索sf3a1对斑马鱼生长发育的影响提供了实验材料和依据。