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目的 构建鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库,从中筛选出针对幽门螺杆菌关键毒力因子HtrA的鲨鱼纳米抗体。方法 用重组的HtrA蛋白免疫条纹斑竹鲨,从其外周血白细胞(PBLs)和脾脏组织中克隆鲨鱼纳米抗体(VNAR)的编码序列,构建鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库,并从中筛选出抗HtrA的鲨鱼纳米抗体。利用大肠杆菌表达系统对鲨鱼纳米抗体进行重组表达并纯化,并用ELISA检测了鲨鱼纳米抗体的亲和力和稳定性。结果 成功构建了针对HtrA的纳米抗体噬菌体展示文库,筛选出了两个鲨鱼纳米抗体(G11和1A5),分别在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中表达,纯化后进行进一步鉴定。评价了鲨鱼纳米抗体的亲和力和稳定性,G11和1A5的EC50值分别为21.2 nM和27.3 nM,并且在低pH溶液中表现出较高的稳定性。构建了1A5的双价鲨鱼纳米抗体,明显提高了抗原结合活性。 相似文献
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山楂作为一种药食同源的药材,临床上有非常广泛的应用,其质量的优劣直接影响临床治疗的效果,该文对山楂药材从质量标准沿革、影响因素及鉴别与含量测定的研究三方面作一综述,指出存在的问题,以期为山楂质量标准的完善和规范提供依据。 相似文献
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目的:研究响应面优化后的杜仲提取物对线虫寿命的影响。方法:以对羟基自由基、超氧去离子自由基、DPPH自由基的清除能力为指标,通过响应面分析法对杜仲提取物进行工艺优化,优化后的杜仲提取物进行线虫寿命实验,验证其抗氧化、抗衰老效果。结果:优化后的提取条件为提取温度70℃、提取时间2 h、溶剂体积8 mL·g-1。线虫寿命实验证明,杜仲给药组的线虫平均寿命为24.95 d,远大于对照组和总黄酮给药组。结论:该工艺操作简单、耗能少,线虫实验为杜仲提取物的抗氧化活性提供了更有力的依据,为杜仲的进一步开发和利用提供了参考。 相似文献
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为考察干旱胁迫处理对丹参种子萌发及幼苗生产的影响,文章以甘露醇作为引发剂,采用5个引发浓度(1%、3%、5%、7%、9%)和5个引发时间(0、4、8、12、16 h)对丹参种子进行了发芽试验,测定了种子发芽率、发芽势、简化活力指数等指标。结果显示,甘露醇不同引发浓度与引发时间对丹参种子的发芽势、发芽率、苗高、苗根长及简化活力指数均有一定影响,总体趋势是引发浓度越高、引发时间越长,对丹参种子萌发及幼苗生长的抑制作用越强,部分处理有显著提升简化活力指数的作用,以5%甘露醇引发4 h处理可明显提高丹参种苗质量,为丹参药材产量与质量的提高奠定了基础。 相似文献
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为考察干旱胁迫处理对丹参种子萌发及幼苗生产的影响,文章以甘露醇作为引发剂,采用5个引发浓度(1%、3%、5%、7%、9%)和5个引发时间(0、4、8、12、16 h)对丹参种子进行了发芽试验,测定了种子发芽率、发芽势、简化活力指数等指标。结果显示,甘露醇不同引发浓度与引发时间对丹参种子的发芽势、发芽率、苗高、苗根长及简化活力指数均有一定影响,总体趋势是引发浓度越高、引发时间越长,对丹参种子萌发及幼苗生长的抑制作用越强,部分处理有显著提升简化活力指数的作用,以5%甘露醇引发4 h处理可明显提高丹参种苗质量,为丹参药材产量与质量的提高奠定了基础。 相似文献
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目的 开发靶向幽门螺杆菌(H. pylori)尿素酶B亚基(UreB)的鲨鱼纳米抗体。方法 利用大肠杆菌表达系统对UreB进行重组表达,纯化后对条纹斑竹鲨进行免疫,通过间接ELISA检测免疫后鲨鱼血浆的抗体效价。提取鲨鱼外周血淋巴细胞及脾脏组织的总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增鲨鱼纳米抗体片段,构建鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库。扩增噬菌体文库,采用固相淘选,通过噬菌体多克隆ELISA检测特异性噬菌体的富集程度。随后通过单克隆ELISA鉴定阳性噬菌体,并通过序列比对,确定靶向UreB的鲨鱼纳米抗体序列。构建鲨鱼纳米抗体重组表达质粒,利用大肠杆菌表达系统制备重组鲨鱼纳米抗体。通过ELISA检测鲨鱼纳米抗体对重组UreB和H. pylori菌株的结合能力。结果 成功制备了重组UreB蛋白,用于免疫鲨鱼,经6次免疫后构建了库容量为1.28×108 CFU的鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库。淘选到的两株靶向UreB的鲨鱼纳米抗体,具有较高的亲和力,其中1E3可特异性结合H. pylori。结论 成功筛选到靶向UreB鲨鱼纳米抗体,为H. pylori感染的诊断和治疗药物的开发奠定了基础。 相似文献
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目的:研究响应面分析法优化后的淫羊藿提取物抗氧化活性。方法:应用单因素试验结合响应面分析法,以抗氧化体外测定结果为指标对淫羊藿抗氧化成分的提取工艺进行优化,在单因素试验的基础上选择因素与水平,根据中心组合实验(Box-Behnken)设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法确定最佳工艺,通过线虫寿命试验验证抗氧化效果。结果:淫羊藿的最佳提取工艺条件为:提取温度83.00℃、提取时间3.07 h、溶剂体积10.18 m L/g。此条件下淫羊藿提取物抗氧化能力最强且线虫平均寿命较长。结论:该提取工艺实际操作简单,能耗少,使淫羊藿提取物的抗氧化活性显著增强。 相似文献
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