Ⅰ型登革病毒NS1抗原捕获ELISA的建立和初步临床诊断应用

目的以登革病毒特异性非结构蛋白1（NS1）单克隆抗体为基础建立Ⅰ型登革病毒（DEN1）抗原检测的酶联免疫吸附（ELISA）法，并探索从病人早期血清样品中检测DEN1-NS1的可行性。方法利用已制备的抗DEN1-NS1单克隆抗体（单抗），进行多种抗体组合配对优化模式的分析，建立双抗体夹心抗原捕获ELISA，以469份健康人血清样品确定cut off值，检测DEN1感染患者急性期血清样品。结果对多种抗体组合反复筛选，最终确立了最佳的包被单抗和酶标测定单抗，建立了抗体夹心捕获DEN1-NS1抗原的酶联免疫测定方法，能特异检测DEN1，与其他血清型登革病毒不发生交叉反应。检测16例临床确诊DEN1感染病人急性期血清样品，15例呈特异的抗原反应阳性。结论成功建立了DEN1-NS1抗原捕获ELISA并应用于临床血清样品的检测，为登革热的早期实验室诊断提供技术方法。     

2002年广州地区暴发的登革热流行特点分析

目的 了解2002年广州地区暴发登革热(DF)的流行特点,为其诊断、预防和治疗提供依据。方法 采用间接酶联免疫(ELISA)法、免疫斑点法、免疫层析法,对3 716例发热待查、疑似患者的血清特异性抗体IgM、IgG进行检测。用C6/36细胞对DF病例176份标本进行病毒分离,以间接免疫荧光(McAb-IFA)、RT-PCR方法鉴定。结果 本次广州地区暴发流行的登革热血清学确诊病人为886人。流行开始于5月份,8、9、10 月份达高峰期,11月有明显下降。发病以青壮年为主。在3 716例发热待查、疑似患者中,血清IgG、IgM抗体阳 性886例,阻性率27.84％。病毒分离阳性46份,阳性率26.1％。经单克隆抗体间接免疫荧光(McAb-IFA)、 RT-PCR检测鉴定为I型登革热病毒。结论 在疾控工作中,应加强Ⅰ型登革热病毒的监测工作。     

2018年广州市输入型登革病毒3型基因组全序列测定和特征分析

目的 分析广州市2018年输入型登革热病毒3型（DENV - III）毒生物学来源,为本地登革热防控提供科学依据和基线数据。方法 通过传染病监测网络收集广州市2018年输入型DENV - Ⅲ病例,对患者急性期血清进行病毒分离培养、全基因组测序、系统发生树重建和生物信息学分析。结果 共分离到4株DENV - Ⅲ型毒株,株间核苷酸（氨基酸）同源性为91.8%～97.3%（97.6%～99.4%）;泰国输入的分离株属于G - I型,与印度尼西亚2016年分离株的距离最近;其余3株分离株属于G - Ⅲ型,在进化树上处于同一分支,分别与老挝、巴基斯坦和新加坡分离株的距离最近;经过比对,4株分离株和13株参考株的E蛋白区域有18个氨基酸位点出现替换,NS1蛋白区域有7个氨基酸位点出现替换,NS5蛋白区域有21个氨基酸位点出现替换。结论 广州市2018年输入型DENV - Ⅲ毒株分属于2个不同的基因型亚群,在进化上距离较远,抗原性差异较大;通过全基因组测序和特征分析,逐步完善周边地区的病毒特征信息,为防控工作提供生物学溯源依据,具有重要意义。     

2014－2017年广州市禽类市场外环境H7N9禽流感病毒监测与遗传进化分析

目的对广州市禽类市场外环境H7N9禽流感病毒流行情况和基因进化特点进行监测分析,为人感染H7N9禽流感防控提供研究数据。方法采集2014 — 2017年广州市禽类市场外环境标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测H7N9禽流感病毒并绘制血凝素（HA）基因遗传进化树,分析H7N9禽流感病毒流行特点和基因进化特点。结果2014 — 2017年累计检测外环境标本28 252份,检出H7N9阳性标本888份,阳性率为3.14%。 检出率2015年最低,2014年最高,分别为1.60%和3.89%。2 — 5月出现H7N9禽流感病毒流行高峰,4月检出率最高为13.00%。 测序分析结果显示,HA基因核苷酸同源性为88.6% ~ 100%,氨基酸同源性为92.0% ~ 100%。 裂解位点分析发现,2017年外环境开始出现高致病性H7N9病毒。 进化分析发现,HA基因呈现多进化分支特点。结论2014 — 2017年广州市禽类市场外环境H7N9禽流感病毒持续存在且病毒变异较快,呈现基因多样性。 2017年外环境已发现高致病性H7N9病毒,近年病毒HA基因归属于华南分支,呈现本土化,同时监测到来源于野鸟的另一独立分支的病毒存在,提示加强本地区野鸟H7N9禽流感病毒监测的必要性。     

广州市人群SARS血清IgG抗体检测结果分析

目的 了解广州市非典型肺炎人群血清中严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(CoV)IgG抗体的基本特征及有关影响因素。方法 采集恢复期SARS、非SARS肺炎患者及SARS患者家庭密切接触者、野生动物、蔬菜销售者、社区对照人群的血清标本,用ELISA方法检测血清中SARS-CoV IgG抗体,并对SARS患者进行流行病学调查。结果 上述人群中,临床诊断为SARS患者SARS-CoV IgG抗体检出率最高,为53.7％,野生动物销售人员次之,为16.7％,社区普通人群为0.9％。在临床诊断的SARS患者中,可溯源病例抗体阳性率为90.4％,高于不可溯源病例的抗体阳性率为19.6％;且可溯源病例中低年龄组和高年龄组抗体阳性率低于中青年组,而不可溯源病例中不同年龄组患者抗体阳性率无差异;不同性别SARS患者的IgG抗体检出率也无差异;SARS抗体检出率呈逐月降低的趋势。结论 SARS临床诊断病例的血清SARS-CoV IgG抗体检出率只有53.7％,剔除患者年龄、使用激素、试剂盒等因素外,主要原因在于存在临床误诊的可能;实验室检测与流行病学调查相结合可明显提高SARS患者诊断的准确性;SARS-CoV存在隐性感染的可能,其在病毒传播过程中的作用有待进一步研究。     

基于纳米孔测序技术对新型重组H3N2禽流感病毒的测序鉴定及其基因特征分析

目的 利用纳米孔测序技术对新型重组H3N2禽流感病毒进行测序鉴定并分析病毒的基因特征。方法 对2021年广州市某农贸市场外环境H3N2禽流感阳性样本进行鸡胚培养,联合病毒全基因组序列靶向扩增和纳米孔测序技术进行病毒高通量测序。通过生物信息学软件,分析病毒基因特点。结果 系统发育进化树显示,该毒株各基因片段均属于欧亚进化分支,宿主来源均为禽源。其HA基因与我国H3N6禽流感病毒亲缘关系较近。NA基因与2017-2020年我国H3N2禽流感病毒亲缘关系较近。PB1基因与2016-2022年我国广西壮族自治区、福建省H5N6禽流感病毒亲缘关系较近,与广州市H5N6禽流感流行株PB1基因亲缘关系较远。其余内部基因片段来源复杂,具有明显的遗传多样性。分子特征显示,该毒株具有典型的低致病性禽流感病毒分子特征,倾向结合禽源受体。生物特性相关重要蛋白位点上,该毒株发生PB2-L89V、PB1-L473V、NP-A184K、M1-N30D/T215A、NS1-P42S/N205S等致病性增强突变。结论 本研究通过纳米孔测序鉴定一株新型重组H3N2禽流感病毒,分析发现该病毒与H5N6禽流感病毒发生了基因重组。目前该病毒跨种传播能力较低,但有必要密切关注H3亚型禽流感病毒的流行和变异。     

广州市人感染H7N9禽流感疫情早期禽类从业人员知识、态度、行为分析

目的 通过在人感染H7N9禽流感疫情早期对禽类从业人员H7N9禽流感知识、态度和风险认知进行调查,探索其影响因素,为后续开展的健康教育及措施实施提供依据.方法 采用多阶段抽样方法,抽取广州市12个区共409名市场禽类从业人员,使用自行设计的问卷进行调查.结果 受访者中回答H7N9禽流感相关知识全部正确的占2.93％,认为自己可能因在市场工作而感染H7N9禽流感的占48.17％,接触活禽时戴手套和洗手的占69.68％和78.73％,支持永久实施中央集中屠宰活禽的占31.78％.从业人员的知识(G=22.052,P=0.002)和态度及风险认知(G =26.205,P＜0.001)与采取防护行为有显著性关系,态度及风险认知(G=27.385,P＜0.001)与防控政策接受意愿有显著性的关系.结论 提高从业人员H7N9相关知识及风险认知水平,将对其采取有效地防护措施和接受严格的防控措施起到促进的作用.     

2009年广州地区轮状病毒分子流行病学研究

目的了解广州地区引起婴幼儿腹泻轮状病毒（Rotavirus,RV）的血清型特征。方法采用酶联免疫吸附试验（ELASA）及巢式逆转录聚合酶链式反应（NestRT—PCR）,对2009—01／12来自广州地区5间监测医院的5岁以下腹泻门诊患儿粪便标本,进行RV抗原检测和血清型分型。结果检测腹泻门诊患儿粪便361份,男性228份,女性133份,经ELISA法检测RV抗原阳性的标本146份（阳性率为40．44％）,男性阳性率39．04％,女性阳性率42．86％;7～12月龄RV腹泻患儿最多,占45．21％;秋冬季为（1月,10～12月）为发病高峰季节,占76．71％;对132份ELISA阳性标本进行G、P分型,G分型中主要为G1型（43．94％）,其他依次为G3型（28．03％）,G1＋G3混合型（24．24％）,G9型（1．52％）,G1＋G9型、G1＋G3＋G9型及未分型均为（0．76％）;P分型中主要为P[8]型（47．73％）,其他依次为P[4]型（25．76％）,P[4]＋P[8]混合型（23．48％）,未分型（1．52％）,P[6]＋P[8]混合型（0．76％）;G型和P型组合情况以G1P[8]型多见,33株,G3P[8]次之,18株。结论RV是广州地区2009年婴幼儿腹泻的主要病原,RV腹泻阳性率男女无差异,主要高发于秋冬季,RV发病以7～12月龄人数最多,G、P分型分别以G1和P[8]为主要流行毒株,组合型G3P[8]为流行优势株,混合感染亦很常见。     

广州市甲型H1N1流感暴发疫点与监测人群病毒抗体检测

目的通过分析广州市甲型H1N1流感暴发疫点与监测人群病毒的抗体水平,了解甲型H1N1流感的流行趋势,为预防甲型H1N1流感疫情提供科学依据。方法应用红细胞血凝抑制(HI)方法检测流感甲型H1N1抗体,对比分析1570名疫区学生与1326名监测人群血清标本H1N1流感病毒的抗体水平。结果疫区学生甲型H1N1流感病毒感染率、流感罹患率分别为32.17%、22.23%,明显高于市区监测人群的22.62%、15.38%(P=0.000,P=0.000)。疫点学生与市区监测人群甲型H1N1流感隐性感染率分别为9.94%、7.24%,差异有统计学意义(P=0.012)。在已感染甲型H1N1流感病毒的疫点学生和市区监测人群中,甲型H1N1流感隐性感染率(30.89%、32.00%)差异无统计学意义(P=0.754)。疫点人群显性感染者的抗体滴度明显高于隐性感染者(t=4.701,P=0.000),监测人群中显性感染与隐性感染者的抗体滴度无显著差异(t=0.248,P=0.804)。结论疫点学生甲型H1N1流感隐性感染率明显高于监测人群。提示隐性感染人群具有潜在的传染力,应加强隐性感染者的监测。     

2011-2012年广州市禽类经营环境职业人群禽流感监测分析

目的了解2011-2012年广州市禽类经营环境中的职业人群H5及H9亚型禽流感的感染情况,为防治人禽流感提供科学的依据。方法采集广州市12个区从事饲养、销售和屠宰家禽的职业人群的静脉血572份,一般人群血清648份,通过血凝抑制实验进行抗体检测,采集禽类经营外环境标本415份,通过PCR进行核酸检测。结果职业人群中H5N1抗体阳性率为0.52%,一般人群H5N1抗体均为阴性,职业外环境中H5亚型标本阳性率4.10%;H9亚型阳性率1.69%。结论广州市禽类经营环境职业人群存在一定的隐性感染,职业环境中存在H5、H9亚型禽流感病毒的污染,具有感染高致病性禽流感的风险,应加强职业人群的禽流感监测,防止销售病死禽及提供充足个人防护用品,加强健康教育。