中国汉坦病毒H82O5株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达

从感染病毒乳鼠脑组织提取总RNA，采用RT－PCR和分子克隆技术将扩增到的G2糖蛋白基因插入含CMV启动子的pcDNA3.1/His质粒载体中，通过脂质体介导转染COS－7细胞，用SDS－PAGE、Western-blot及IFIA方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果证明获得正向插入的G2－pcDNA3.1/His重组表达质粒，表达产物的相对分子量为56ku，与理论预期大小一致，并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体起特异反应。表明构建的G2－pcDNA3.1/His重组质粒所表达的蛋白为中国汉坦病毒株特有，能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性，重组质粒可应用于汉坦病毒的DNA疫苗研究。     

新疆出血热病毒与流行性出血热病毒的生物学特性比较

本文通过免疫荧光(IF)和电镜(EM)技术对新疆出血热(XHF)及流行性出血热(EHF)病毒的生物学特性在Vero E_6及LLC-MK_2两株传代细胞上进行了比较。两种病毒感染两株细胞后免疫荧光染色有两种不同的荧光形态特征,两种病毒对细胞的敏感性明显不同,XHF病毒在LLC-MK_2细胞上感染后6～8天可出现明显的细胞病变,而EHF病毒感染此细胞后则不引起病变。电镜观察到两种病毒在LLC-MK_2细胞中都能形成与布尼病毒相似的形态特征。     

肾综合征出血热病毒的空斑法研究(简报)

肾综合征出血热(HFRS)病毒的定量,长期来都是依靠免疫荧光法检测细胞的感染剂量来确度.空斑法在许多其他病毒的研究中证明不仅可以精确地定量病毒,而且还可以进行毒株优选、病毒特征等方面的研究.可是HPRS病毒生长周期长,细胞需维持较长时间,因此本病毒出斑困难,在国内虽有不少单位研究,但尚未见成功的报道.我们于1987年接受解放军总后勤部卫生部关于"HFRS病毒定量方法的研究"招标课题,进行了本病毒的空斑法研究.在对细胞进行挑选的基础上对出斑条件作了摸索,现已在VeroE_6细胞上成功地用国际标准毒株118/76株及自病人血中分离的H_8205株病毒制出了空斑.空斑呈圆形,界限清楚,直径0.2～3mm,6～10天空斑基本出齐,空斑粒与接种病毒的稀释度成比例.此2株病毒滴度相近皆在10~5左右,经多次试验重复,证实出斑条件稳定.特异性试验证实空斑可被HFRS病人血清中和.HFRS病毒空斑法的建立为我国不同地区流行性出血热的病毒分型、毒株的纯化研究等工作提供了一个良好     

建立流行性出血热(EHF)实验动物模型的研究——Ⅰ.实验感染与电镜检查

近几年来由于发现流行性出血热的自然宿主——黑线姬鼠存在特异性抗原,并从其肺组织中分离到病毒,因而促进了本病的病原学研究;由于黑线姬鼠存在带毒感染,人工感染后又不显示任何发病征象,因此要用作动物模型很不方便;为此,本实验室用EHF病毒H8205株感染乳小鼠,建立起急性流行性出血热实验动物模型,现将所得结果予以报道。材料与方法病毒:EHF病毒的H8205株,在VeroE-6细胞传10代的细胞培养液用作毒种。动物:本院动物场饲养的上海种小鼠,分别用1日龄乳鼠、18—21天断奶鼠及70天龄成鼠。     

非典型流行性出血热误诊74例分析

我们以1981年全国出血热会议制订的诊断标准,结备免疫荧光(IFAT)和酶联免疫吸附试验(EUSA)检出血热IgM 及IgG 抗体升高为确诊依据,于1983～1986年从湖北、北京、河南及河北省市收集流行性出血热(出血热)住院者358例。曾误诊其它病78例,其中69例IFAT 为阳性,74例ELISA 为阳性,阳性者阻断试验确诊。74例非典型的出血热特殊临床表现分析如下:     

在悬液鸡胚纤维母细胞上进行委内瑞拉马脑炎病毒空斑法的研究

委内瑞拉马脑炎(VEE)病毒鸡胚细胞悬液空斑法比单层细胞空斑法在操作上能缩短24h,并能增加标本接种量,可提高检验、分离及鉴定病毒的效率。病毒变异株在悬液空斑上比在单层空斑上的滴度低,而原株则在两种方法上的滴度相近,因而悬液空斑法有可能作为病毒变异株的一种标记。本法对细胞沉渣也能利用,在虫媒病毒检验上有较大潜力。如在悬液空斑法制作前,先在底层琼脂中加入适量特异性病毒抑制物,从而使病毒空斑只能在抑制物扩散区之外出现,这种抑制区的面积与抑制物的浓度成正比。此法为VEE病毒鸡胚细胞悬液空斑抑制法,可用于检测抗血清、干扰素和抗病毒药物等的浓度,及用不同血清作鉴别诊断。此法滴定抗血清的精确度及敏感性低于悬液空斑中和法。但做法多样,能适应多种用途。     

建立流行性出血热(EHF)实验动物模型的研究 Ⅱ.应用免疫荧光法检查EHF病毒实验感染小鼠

流行性出血热(EHF)病毒通过传代可在小鼠乳鼠引起明显的症状。本文以免疫荧光作为判断指标,报告了感染小鼠体内EHF病毒抗原分布、血清抗体产生水平、病毒在体内繁殖动态等结果,并对流行性出血热的发病原理进行了探讨。材料和方法一、病毒、动物、感染方法参见前文报告。二、检查标本的取材及处理方法感染动物发病后,眼球放血致死,血清4℃保存备作抗体测定。横切鼠脑取视丘、海马、小脑、延脑等部位标本。内脏取肾、肺、心、肝、脾、肠以及胸腺、颌下腺等组织。皆切成大小约5×5×2mm的组织块,在95％乙醇     

抗鼠IgG和IgM免疫血清的制备研究

抗鼠IgG和IgM免疫血清是实验诊断及单克隆抗体研究工作中的重要试剂。为开展单克隆抗体研究工作,我们于1981年制备了羊抗鼠IgG及羊抗鼠IgM免疫血清。本文报告这一试验方法和结果。材料与方法正常小鼠血清:由本院动物处领取正常小鼠用腋下或颈动脉放血分离血清,取178只正常小鼠分离出47毫升血清,取同样小鼠166只在尾静脉注射10％羊红细胞盐水(0.2—0.3ml/只),6—7天后放血分离血清41毫升。兔抗鼠IgG及兔抗鼠IgM样品血清:由中     

微量酶联法检测IgM抗体在肾综合征出血热病人早期诊断中的应用

对肾综合征出血热(Haemorrhagic fever with renal syndrome以下简称出血热,HFRS),虽可用免疫荧光技术作病毒病原特异性诊断,但不够简便、敏感。于1983年我们用微量酶联免疫吸附试验(简称酶联,ELISA),间接法检测出血热病人血清中特异性IgG抗体(65例),与免疫荧光技术相比,不仅简便,还可提高诊断效果。但检测IgG抗体增长,多适用于流行病学调查,要解决临床诊断,则不够及时,需要建立在症状出现后短时间内,能从血清中检出IgM抗体的方法。为此,我们采用微量酶联免疫抗IgM固相法,检测101例出血热病人急性期血清     

肾综合征出血热鼠间传播规律的探讨

本文通过对总后嫩江基地某场肾综合征出血热(HFRS)疫源地的调查,综合鼠龄、性别、活动特点及HFRS抗体阳转情况等因素分析HFRS在鼠间传播的规律.经调查分析得出以下结果:不同鼠种对HFRS病毒普遍易感;鼠生后活动在传播中起重要作用,而体外寄生虫的叮咬对鼠间传播不起主要作用.黑线姬鼠为当地的优势鼠种,褐家鼠的活动与人类接触密切,在人类HFRS的流行中,两者作用都不能忽视.