抗流行性出血热病毒人-人杂交瘤细胞株的建立(简报)

杂交瘤技术问世以来,单克隆抗体已被广泛应用于医学的各个领域,并获得了明显的社会和经济效益。由于鼠-鼠单克隆抗体在治疗和诊断上存在一定缺点,故制备人-人单克隆抗体的问题已引起世界科学家的重视。迄今未取得重大突破。我们进行了抗流行性出血热病毒人-人杂交瘤细胞株的建株研究,并初步获得了三株抗出血热病毒的人-人杂交瘤细胞株。     

反向被动血凝抑制试验（RPHI）快诊肾综合症出血热的研究

肾综合征出血热（HFRS）的实验室诊断方法,目前仍以免疫荧光技术为主。近年来学者们研究开展了ELISA、RIA、免疫酶、SPA染色等新的检测方法,由于手续复杂,推广应用尚有一定问题。     

登革Ⅰ型病毒E蛋白在293T细胞中的分泌表达

目的 分泌表达登革Ⅰ型病毒prM/E基因,为研究该蛋白的免疫学功能和特性奠定基础.方法 用RT-PCR法获得登革Ⅰ型病毒广州分离株全长prM/E基因,在prM基因前添加乙型脑炎病毒的信号肽或同时替换E基因羧基末端的20%为乙脑病毒E基因相应的部分,分别将其克隆入真核表达载体pcDNAS/FRT中,获得三种重组质粒DlprME-pc5,D1JsprME-pc5,D1JsprM80E20JE-pc5.用脂质体法分别将重组质粒DNA转入293T细胞,通过免疫荧光、Western印迹检测外源基因在真核细胞中的分泌表达.结果 用免疫荧光法检测到分别转染了三种重组质粒的293T细胞的胞质中均有登革Ⅰ型病毒蛋白的表达.Western印迹检测转染了D1prME-pc5重组质粒的293T细胞上清中没有特异蛋白条带,转染了经基因改造的重组质粒D1JsprME-pc5和D1JsprM80E20JE-pc5的细胞上清中均存在登革Ⅰ型病毒的特异蛋白条带.结论 转染了三种重组质粒的293T细胞均可表达登革Ⅰ型病毒prM/E蛋白,只有在prM基因前添加了信号肽的重组质粒转染后蛋白才获得分泌表达.     

登革2型病毒ZS01/01株E蛋白在真核细胞中的分泌表达研究

目的 对登革2型病毒(DENV-2)ZS01/01株E蛋白在哺乳动物细胞及昆虫细胞中的分泌表达进行研究.方法 RT-PCR扩增DENV-2 prM/E基因,通过融合PCR在prM基因前添加来自乙型脑炎病毒的信号肽序列,并将E基因羧基末端20%区域缺失或替换为乙型脑炎病毒SA14-14-2株E基因相应序列,将上述基因元件分别克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA5/FRT及昆虫细胞表达载体pAcUW51-M中,将重组质粒转染293T细胞或S19细胞,利用间接免疫荧光(Immunofluoreseence assay,IFA)及Western Blot检测E蛋白的表达与分泌.结果 各重组质粒分别转染293T细胞或Sf9细胞后,E蛋白在细胞内均有效表达,而仅有携带乙脑信号肽且缺失或替换E基因羧基末端20%区域的重组质粒转染293T细胞后,上清中可检测到明显的E蛋白分泌.结论 信号肽及E基因羧基末端20%区域对登革病毒E蛋白的分泌至关重要,宿主细胞对其亦有一定影响.     

在昆虫细胞表达汉坦病毒的核蛋白及其在血清检测中的初步应用

杆状病毒是应用广泛的真核表达系统 ,利用杆状病毒核多角体启动子 ,可以在昆虫细胞高效表达外源基因。由于在昆虫细胞中表达的蛋白可以进行翻译后修饰 ,是表达汉坦病毒结构的理想系统。我们用昆虫细胞分别表达了姬鼠型和家鼠型汉坦病毒的糖蛋白和核蛋白 ,并进行了检测抗体的研究。使用PCR分别扩增姬鼠型汉坦病毒A9株、家鼠型汉坦病毒L99株的M和S片段编码区序列 ,克隆到昆虫细胞表达穿梭质粒pAcUW5 1,在杆状病毒核多角体启动子控制下。将质粒转Sf9细胞 ,通过 3轮空斑筛选重组病毒 ,用Western blot和免疫荧光证实了这些基因在昆虫细胞得…     

我国一些地区人血清的虫媒病毒抗体调查

本文调查了28个省、市、自治区的人血清对18种虫媒病毒抗原的血凝抑制抗体,发现我国广大地区主要存在乙组虫媒病毒,但也存在甲组和布尼安病毒的可能。甲组病毒的抗体阳性数占总阳性数的16.7%(58/347),新疆、青海、黑龙江、山西、福建、甘肃省占甲组虫媒病毒抗体阳性数的84%。布尼安病毒中特别是Aino病毒的抗体阳性率较高,占总阳性数的12.7%(45/347),黑龙江8/10人阳性,其HI滴度都大于1/80,最高为1/1280,平均滴度为1/320,黑龙江、新疆、福建、北京占布尼安总阳性数的70%。乙组虫媒病毒则以乙脑为主。但其它病毒的抗体如Zika、 Kunjin的抗体阳性也很高,故推测我国除已知有乙脑、森脑、登革热外,尚有其它乙组虫媒病毒存在的可能。     

登革热Ⅳ型病毒McAb的研究

将SP2/0-Ag小鼠骨髓瘤细胞与经登革热病毒Ⅳ型H_241株免疫的瑞士种小鼠脾细胞融合,获得1株分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞,经克隆化得6E_5和6F_4两个细胞株。此McAb用免疫荧光法检查属型特异性,而用血凝抑制试验检查则呈组特异性。此抗体和一些蚊媒病毒和虫媒病毒Langat株有交叉反应。用6E_5组织培养上清液标记荧光素获得成功,这使从蚊     

流行性出血热单克隆抗体的研究

实验用流行性出血热病毒免疫的BALB/C鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地获得了三株杂交瘤细胞株(25号、32号、19号),能分泌高滴度高特异性的流行性出血热单克隆抗体。以此种细胞株制备的小白鼠腹水单克隆抗体的滴     

乙脑病毒McAb对乙脑病毒实验治疗的研究

本实验用经我们杂交获得的乙脑病毒51-8McAb进行。用乙脑强毒株A_2及SA_(14)株分别皮下或腹腔感染3周龄小鼠,治疗组分别于感染后24、48和120小时用51-8McAb腹腔一次注射,对照组注同量正常腹水,观察两组动物的死亡率,并计算其保护率。结果感染后24、48和120小时治疗的保护率分别为60～100％,60～83％及20～28％。数次实验结果经统计学处理,证明有显著性意义。     

化学发光酶联免疫法检测汉坦病毒IgM抗体的研究

目的建立化学发光酶联免疫分析法（CLEIA）检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清中IgM抗体。方法以抗人IgM-μ链抗体包被黑色不透明聚乙烯板，辣根过氧化物酶标记汉坦病毒核蛋白作为检测抗原以及luminol-H2O2作为发光底物，建立CLEIA法并对CLEIA与IgM抗体捕获酶联免疫吸附法（MacELISA）进行比较。结果CLEIA与MacELISA相关系数0．97；对于51份确诊的HFRS患者急性期血清CLEIA检测敏感度100％，MacELISA为90．2％；对48份正常人血清两种方法检测特异度均为100％；CLEIA次内变异系数范围5．02％-12．7％，次间变异系数范围0．4％～7．0％，与MacELISA相当。结论化学发光酶联免疫分析法是一种更为灵敏，准确和稳定的方法，适用于检测HFRS早期患者血清中IgM抗体。