鸦胆子素D联合紫杉醇对胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的:探讨鸦胆子素D(BD)联合紫杉醇(Taxol)对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及可能机制。方法:以Capan-2细胞为对象,采用磺酰罗丹明B法检测不同剂量BD(5、10、15、20μmol/L)、Taxol(10、20、30、40 nmol/L)、BD+Taxol(5μmol/L+10nmol/L、10μmol/L+20 nmol/L、15μmol/L+30 nmol/L、20μmol/L+40 nmol/L)作用48 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率和药物合用指数(CI)。采用克隆形成试验检测BD(20μmol/L,下同)、Taxol(40 nmol/L,下同)、BD+Taxol(20μmol/L+40 nmol/L,下同)作用24 h后的细胞克隆集落形成情况,并计算克隆形成率;采用DAPI染色法观察BD、Taxol、BD+Taxol作用24 h后的细胞凋亡情况,采用Western blotting法检测的BD、Taxol、BD+Taxol作用后凋亡相关蛋白[Bcl-2、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、切割胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase-3);药物作用48 h]以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白(药物作用4、6、12 h)的表达情况。结果:经10、15、20μmol/L BD,20、30、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用48 h后,细胞的存活率均显著降低,且联用组显著低于BD、Taxol同剂量单药组(P<0.05),各联用组(BD 5μmol/L+Taxol10 nmol/L、BD 10μmol/L+Taxol 20 nmol/L、BD 15μmol/L+Taxol 30 nmol/L、BD 20μmol/L+Taxol 40 nmol/L)的CI值分别为0.63±0.04、0.68±0.08、0.89±0.12、0.84±0.05。经20μmol/L BD、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用后,细胞的克隆集落形成有所减少,并伴有不同程度的染色质浓聚和细胞核皱缩,细胞的克隆形成率(24 h)以及Bcl-2(48 h)、RAPR(48 h)、Caspase-3(48h)、JNK(4、6 h,Taxol单药组除外)的相对表达量均显著降低,Cleaved-caspase-3(48 h)、p-JNK(4、6、12 h)的相对表达量均显著升高,且BD+Taxol联用组均显著优于同时间点BD、Taxol同剂量单药组[JNK(4、6、12 h)、p-JNK(4 h)除外](P<0.05或P<0.01)。结论:BD、Taxol均可抑制人胰腺癌Capan-2细胞的增殖并促进其凋亡,且两者联合具有一定的协同作用,效果优于任一药物单用。上述作用可能与激活Caspase通路以及JNK磷酸化等途径有关。     

异种脱细胞真皮基质在开放式乳突根治术的临床应用

目的探讨开放式乳突根治术应用异种(牛)脱细胞真皮基质生物膜在促进术腔上皮化及抑制术腔肉芽增生的作用。方法收集昆明医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科2017年10月至2018年9月期间因慢性中耳炎或中耳胆脂瘤行开放式乳突根治术(由同一术者进行手术)的患者。分为试验组(A组,异种脱细胞真皮基质生物膜组) 40例,共45耳,其中乳突腔伴自体组织填塞(A1)组21耳,不伴自体组织填塞(A2)组24耳;对照组(B组,颞肌筋膜组) 37例,共40耳,其中乳突腔伴自体组织填塞(B1)组21耳,不伴自体组织填塞(B2)组19耳。逐一记录术后术腔上皮化时间,干耳时间,术腔肉芽增生情况及随访6个月以上眩晕等并发症发生率;同时于术后4周及6个月时分别以生理盐水术腔注射法测量术腔容积,计算容积差值(术后4周术腔容积值与6个月术腔容积值差值)。两组患者在术前耳流脓时间、眩晕发作、术后4周术腔容积均无统计学差异(P>0.05)。术后两组之间数值分别行两独立样本t检验,差异有统计学意义(P <0.05)。结果 A、B两组术后干耳时间分别为[(21.36±5.54) d,(43.93±12.15) d,P &... 更多     

HIV蛋白酶抑制剂利托那韦的合成工艺改进

目的改进HIV蛋白酶抑制剂利托那韦的合成工艺。方法以L-苯丙氨酸为原料,经三苄基保护、还原性缩合及格氏试剂偶联、α,β-不饱和酮还原、Boc保护、选择性脱苄基、缩合、脱Boc基、再次缩合得到利托那韦。结果与结论目标化合物的结构经~1H-NMR、~(13)C-NMR和MS谱确证,总收率为73.3%(以L-苯丙氨酸计),HPLC法测定纯度达99.8%。与文献报道的工艺相比,该路线操作简易、成品质量好、生产成本较低,有利于工业化生产。     

喹硫平血药浓度监测中血清代用品的研究

考察以牛血清代替人血清制备标准曲线时,使用高效液相色谱法（HPLC）检测喹硫平血药浓度是否存在差异。人、牛血清制备的标准曲线在50.0～1000.0 ng·mL-1浓度范围内斜率存在差异,且在不同基质中患者血药浓度测得值有显著性差异（P＜0.01）。喹硫平在2种基质中的提取回收率也存在显著性差异（P＜0.01）。结果表明,HPLC法测定喹硫平血药浓度时以牛血清代替人血清作为空白基质检测存在差异性。     

阿利吉仑对高血压肾病小鼠肾的保护作用及其作用机制

目的探究阿利吉仑对高血压肾病小鼠的保护作用及其对磷脂酰肌醇激/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法用微渗泵灌注血管紧张素Ⅱ制备高血压小鼠肾病模型。按照体重将小鼠随机分为6组:假手术组、模型组和低、中、高3个剂量实验组(灌胃阿利吉仑12. 5,25. 0,50. 0 mg·kg^-1)与对照组(卡托普利30 mg·kg^-1),每组15只;造模后给药,每日1次,连续灌胃2周。以实时定量PCR法测定肾组织中胰岛素受体底物2(Irs2)、磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)、蛋白激酶B(Akt) mRNA表达;以免疫印迹法测定Irs2、PI3K、Akt与Caspase-3蛋白表达情况。结果给药4周,假手术组、模型组、对照组和高剂量实验组的PI3K mRNA表达分别为1. 14±0. 21,0. 34±0. 08,1. 07±0. 23和0. 96±0. 22;这4组的Akt mRNA表达分别为1. 23±0. 27,0. 45±0. 13,1. 05±0. 16和0. 91±0. 15,模型组与假手术组比较或高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。这4组的小鼠肾组织Caspase-3蛋白表达水平分别为0. 29±0. 06,1. 06±0. 13,0. 31±0. 06和0. 37±0. 08,模型组与假手术组比较或高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论阿利吉仑对高血压小鼠肾具有一定的保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制Caspase-3表达有关。     

制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的 采用高渗盐一胰蛋白酶法制备脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)并进行组织学观察和微生物学检测,探讨这种方法的可行性和机制。方法 SD大鼠4只,分别麻醉后以8％硫化钠溶液脱去躯干部皮毛,常规消毒铺巾,切取大鼠背部全层皮肤制成厚约0.4mm的中厚皮,1mol／LNaCl溶液37℃浸泡48h分离表真皮,以0．25％胰蛋白酶 0.1％乙二酸二乙胺(EDTA)溶液37℃分别热消化60、70、80、90min脱去细胞成分,并进行冷冻干燥处理。ADM作光镜、电镜观察和微生物学检测并比较分析每只大鼠不同时间消化处理的ADM的差别和不同大鼠经相同处理得到的ADM的差别。结果消化时间不同的ADM均具有柔软、一定的柔韧性和伸展性、弹性好、弯曲不断裂的特点,组织学观察见表皮细胞均完全去除,但是消化90min,ADM的基底膜(Basement membrane complex,BMC)和胶原纤维的结构与排列有不同程度的破坏;消化60、70min的ADM虽然基底膜和胶原纤维的结构与排列正常存在,但脱细胞不完全;消化80min制备的ADM组织学检查基底膜完整连续．胶原纤维、弹力纤维结构及排列完整规则,没有细胞成分存在。不同SD大鼠经同样的处理所得的ADM一般形状和组织学没有明显差别。微生物学检测没有细菌生长。结论采用高渗盐一胰蛋白酶法制备脱细胞真皮基质的方法能达到既完全脱去细胞成分又使基底膜完整连续,胶原纤维和弹力纤维结构及排列正常的双重目标,ADM柔韧性好、不断裂,无细菌生长。     

MMP-9在复发性阿弗他溃疡中的表达及意义

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP-9)在复发性阿弗他溃疡中的表达及意义.方法:采用免疫组化和RT-PCR方法分别检测56例复发性阿弗他溃疡患者口腔黏膜组织中MMP-9的表达.结果:复发性阿弗他溃疡患者中MMP-9的表达明显的高于正常口腔黏膜组织,且重型患者的表达明显的高于轻型和疱疹型患者.结论:MMP-9的表达在复发性阿弗他溃疡患者中明显增高,提示其可能参与了病理过程.     

金属蛋白酶解离素28在牙齿发育中的研究进展

金属蛋白酶解离素28（a disintegrin and metallo2 proteinase 28，ADAM28）是ADAM家族最近发现的一种分泌性糖蛋白，它同样具有ADAM家族的生理功能：参与细胞增殖，分化，胞外基质重建，裂解基质蛋白和细胞迁移等。研究显示，ADAM28基因参与了牙胚的发育过程，并在牙源性间充质细胞的增殖、分化和凋亡中发挥重要的调控作用。同时ADAM28基因具有金属蛋白酶活性，因而它对于细胞外基质的形成和蛋白的外功能区脱落有重要的调节作用。本文着重回顾了近年来国内外关于ADAM28生物学功能的研究及其在牙齿发育中的作用机制。