外泌体在骨代谢中的作用

外泌体是多种细胞在生理或病理状态下主动分泌到细胞外的纳米级囊泡,富含蛋白质、核酸、脂质等生物活性物质,参与细胞间信息交流与传递.目前已有研究表明,外泌体能通过信号蛋白、miRNAs等调控成骨细胞、破骨细胞及骨髓间充质干细胞的增殖、分化,介导骨生成和骨吸收过程,在多种骨代谢疾病的发生、发展中起重要作用.     

肿瘤微环境中外泌体在肿瘤发生发展中作用及机制

外泌体(exosomes)是直径在30~100 nm,内含RNA、脂质和蛋白质的纳米级囊泡,来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,与细胞膜融合后释放到胞外,是肿瘤微环境中细胞间通讯和遗传物质的重要载体。肿瘤在发生、发展过程中可通过外泌体与肿瘤微环境中的免疫细胞、内皮细胞和肿瘤相关成纤维细胞之间相互作用从而促进肿瘤的进展,其携带蛋白质、脂质和核酸等内容物释放到细胞外随着体液运输改变肿瘤微环境、促进肿瘤细胞增殖、加快血管形成及促进癌症发展;肿瘤微环境是由肿瘤细胞、巨噬细胞、成纤维细胞及细胞外基质等共同构成的局部稳态环境,在癌症的发生、复发、转移和化疗耐药等过程中发挥重要的作用。本综述着重讨论外泌体的生物学特性及对肿瘤微环境的影响,为研究及诊断治疗肿瘤提供新的思路。     

应用PEG 6000探讨滑膜组织外泌体的提取与鉴定

目的:应用PEG 6000提取滑膜组织中外泌体并进行鉴定.方法:收集于北京中医药大学第三附属医院骨科行膝关节镜或关节置换手术过程中废弃的滑膜组织,用8％PEG 6000溶液对滑膜组织分泌的外泌体进行富集、提取,应用透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)、Western Blot对外泌体的形态、粒径大小以及标志蛋...     

多囊卵巢综合征患者血清外泌体中miR-184的表达水平及其对卵巢颗粒细胞增殖的影响

目的研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清外泌体中miR-184的表达水平及其对卵巢细胞颗粒增殖的影响。方法回顾性选取2018年2月至2020年4月期间盘锦辽油宝石花医院收治的60例PCOS患者作为PCOS组,另纳入同期30名健康成年女性作为对照组,提取2组受试者血清外泌体。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测2组受试者血清外泌体中及人卵巢颗粒细胞KGN和人正常卵巢上皮细胞IOSE80中的miR-184的相对表达。转染miR-184抑制剂的KGN细胞设为miR-184抑制剂组,转染抑制剂对照物的KGN细胞设为对照组,不做任何处理的KGN细胞设为空白组。应用MTT法检测各组KGN细胞的增殖情况,应用平板克隆实验检测各组KGN细胞的克隆形成率。结果PCOS患者血清外泌体中和KGN细胞中的miR-184的相对表达量为4.23±0.49、5.81±0.73,显著高于对照组(1.32±0.21)和IOSE80组细胞(1.19±0.15),差异有统计学意义(P<0.05)。miR-184抑制剂组KGN细胞在24、48、72、96 h的吸光度值分别为0.20±0.05、0.22±0.07、0.26±0.08、0.29±0.07,均显著低于阴性对照组(0.31±0.09、0.52±0.11、0.78±0.12、0.96±0.18)和空白对照组(0.31±0.08、0.53±0.10、0.77±0.14、0.94±0.18),克隆形成率(26.78±5.98)%显著低于阴性对照组[(45.98±4.12)%]和空白对照组[(43.56±4.34)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论PCOS患者血清外泌体和人卵巢颗粒细胞KGN中miR-184呈现高表达,PCOS的发病可能与miR-184促进卵巢颗粒细胞增殖有关。     

Regulation of exosome release from mammary epithelial and breast cancer cells – A new regulatory pathway

PurposeExosomes are small 50–100 nm sized extracellular vesicles released from normal and tumour cells and are a source of a new intercellular communication pathway. Tumour exosomes promote tumour growth and progression. What regulates the release and homoeostatic levels of exosomes, in cancer, in body fluids remains undefined.MethodsWe utilised a human mammary epithelial cell line (HMEC B42) and a breast cancer cell line derived from it (B42 clone 16) to investigate exosome production and regulation. Exosome numbers were quantified using a Nanosight LM10 and measured in culture supernatants in the absence and presence of exosomes in the medium. Concentrated suspensions of exosomes from the normal mammary epithelial cells, the breast cancer cells and bladder cancer cells were used. The interaction of exosomes with tumour cells was also investigated using fluorescently labelled exosomes.ResultsExosome release from normal human mammary epithelial cells and breast cancer cells is regulated by the presence of exosomes, derived from their own cells, in the extracellular environment of the cells. Exosomes from normal mammary epithelial cells also inhibit exosome secretion by breast cancer cells, which occurs in a tissue specific manner. Labelled exosomes from mammary epithelial cells are internalised into the tumour cells implicating a dynamic equilibrium and suggesting a mechanism for feedback control.ConclusionsThese data suggest a previously unknown novel feedback regulatory mechanism for controlling exosome release, which may highlight a new therapeutic approach to controlling the deleterious effects of tumour exosomes. This regulatory mechanism is likely to be generic to other tumours.     

小鼠白血病细胞L1210外泌体微RNA表达谱及其功能分析

目的 对白血病细胞外泌体（LCEX）中微RNA（miRNA）的表达特点及其功能进行分析。 方法 以小鼠白血病细胞株L1210为模型,应用密度梯度超速离心法分离其培养上清,获得LCEX _L1210,应用基因芯片技术检测L1210细胞和LCEX _L1210中miRNA的表达,比较二者miRNA的表达,对部分差异表达的miRNA应用实时荧光定量PCR进行验证,通过Gene Ontology数据库分析。 结果 在LCEX _L1210中共鉴定出1 044种miRNA,L1210细胞中共鉴定出872种miRNA,其中732种miRNA为两者共有,两者共同表达的miRNA占L1210细胞的83.9%,占LCEX _L1210的70.1%,提示LCEX _L1210中70%以上miRNA来自于其母细胞。在LCEX _L1210中有312种miRNA在其母体细胞中没有鉴定出,为LCEX _L1210所特有。有些miRNA在LCEX _L1210中表达明显高于L1210细胞,如miR-16-1、miR-210及miR-195等,提示LCEX的miRNA表达与其母体细胞存在表达差异。对部分表达差异的miRNA应用实时荧光定量PCR验证显示,这些LCEX高表达的miRNA参与多种生物学功能及信号转导途径的调控。 结论 LCEX _L1210所含的miRNA与其来源细胞L1210细胞所含的miRNA有高度相似性,但有1/3的miRNA为其所特有。这些LCEX _L1210中高表达的miRNA参与多种生物学功能及信号转导途径的调控。     

骨髓间充质干细胞外泌体通过Notch信号通路促进移植脂肪血管化的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞外泌体(BMSC-Exo)通过调控Notch信号通路促进移植脂肪血管化的机制。 方法 获取1例2020年8月在空军军医大学第一附属医院整形外科行腹部脂肪抽吸术的30岁健康女性的废弃脂肪,处理后将脂肪颗粒分别移植于12只Balb/c裸鼠背部皮下左、右两侧,每侧注射0.5 ml,建立脂肪移植模型。左侧设为外泌体组,每周以50 μg的BMSC-Exo溶于100 μl PBS溶液中,移植后即刻在脂肪周围多点局部注射,然后每周注射1次,连续4次;右侧设为对照组,于同一时间注射同等剂量的PBS溶液。观测项目：(1)分别在术后4、8周获取2组脂肪移植物组织,用电子天平称其湿重并计算保留率。(2)术后8周,通过HE染色、免疫荧光检测脂肪移植物中脂滴包被蛋白A(Perilipin A)阳性细胞,观察2组脂肪细胞的结构和完整性;(3)术后8周,免疫组织化学法检测脂肪移植物中CD31阳性细胞、计算微血管密度,检测Notch1、Notch4阳性细胞、计算阳性细胞面积比例;(4)术后8周,实时荧光定量PCR检测脂肪移植物中Notch1、Notch4、VEGF mRNA相对表达量。应用Graphad Prism 8.0分析数据,组间比较采用 t检验, P<0.05表示差异有统计学意义。 结果 (1)术后4、8周,对照组脂肪湿重保留率分别为(41.15±9.68)%和(34.30±6.45)%,外泌体组分别为(61.77±10.98)%和(55.93±5.89)%,均高于对照组( P<0.05)。(2)术后8周,外泌体组较对照组中脂肪细胞结构完整性更好,具有较多的新生毛细血管;外泌体组中有较多的完整Perilipin A阳性脂肪细胞,而对照组中则较少。(3)对照组微血管密度为(4.67±0.57)个,显著小于外泌体组的(13.00±2.00)个( P<0.05);对照组每视野下Notch1和Notch4阳性细胞面积比例均低于外泌体组[(0.53±0.28)% vs.(1.67±0.11)%,(0.11±0.06)% vs.(1.20±0.24)%, P<0.05];(4)外泌体组Notch1、Notch4、VEGF mRNA相对表达量分别为1.53±0.20、1.50±0.26、2.56±0.55,均比对照组(1.00+0.00)明显上调( P<0.05)。 结论 BMSC-Exo可能通过上调VEGF mRNA的表达水平激活Notch信号通路,从而促进移植脂肪血管新生,提高移植脂肪保留率。     

外排体与缺血性卒中

外排体是由多种类型细胞分泌的直径约40～100 nm的膜性小囊泡。外排体携带有脂质、蛋白质、mRNA、微小RNA等,在细胞通讯中扮演着重要角色。文章对外排体的来源、一般特性、生物学功能以及在缺血性卒中病理生理学和神经功能恢复中的可能作用和机制进行了综述。