TK自杀基因的构建及鉴定

目的利用分子生物学技术,构建胸苷激酶基因（TK）自杀基因并测定其结构,为该自杀基因的进一步研究提供良好的实验基础。方法以人类单纯疱疹病毒Ⅰ（HSV1）基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应（PCR）法,扩增出约为1 100 bp TK基因,定向克隆到载体PEGM-T,构建克隆载体。两端分别引入限制性内切酶NotⅠ、XholⅠ酶切位点,经PCR及酶切鉴定初步证实为重组体后,测序认证。结果经PCR、酶切鉴定和测序鉴定完成TK基因的构建,同源性高达98.70%,完全具备表达该目的基因的要求。结论成功扩增出TK基因,为继续研究打下基础。     

突变型胸苷激酶促进前体药物对小鼠T淋巴细胞的杀伤作用

目的研制表达单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV1-TK）及其突变体HSV1-SR39TK的T淋巴细胞,探讨给予更昔洛韦（GCV）和阿昔洛韦（ACV）后T细胞的生存率。方法采用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒系统共转染来源于人胚肾的293T细胞,表达HSV1-SR39TK和HSV1-TK的T细胞与不同浓度的GCV和ACV培养3d后,应用CCK-8法测定T细胞存活率。结果包装后慢病毒载体的滴度超过106IU/ml、ACV/GCV浓度在1～10μmol/L时,SR39TK＋T细胞的存活率下降明显,ACV组T细胞存活率从（98.4±2.7）%下降至（49.9±5.9）%,GCV组从（97.9±2.7）%下降至（33.7±5.3）%,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。当ACV/GCV浓度进一步升高时,T细胞活率下降不明显。TK＋T细胞对GCV敏感,T细胞活率从（97.9±2.7）%下降至（38.4±5.5）%,差异有统计学意义（P〈0.05）;但是对ACV不敏感,T细胞存活率从（98.4±2.7）%下降至（73.8±7.4）%,差异无统计学意义（P〉0.05）。IC50值测定结果显示,SR39TK＋T细胞对GCV和ACV的敏感性高于TK＋T细胞。结论表达HSV1-SR39TK的T细胞对GCV和ACV的敏感性均较HSV1-TK高。突变型HSV1-TK在体外可促进前体药物介导的杀伤小鼠T细胞的作用。     

改良多柔比星脂质体TAC方案治疗HER2阴性乳腺癌的临床研究

目的 探究改良多柔比星脂质体TAC方案治疗HER2阴性乳腺癌的临床效果。方法 选取2019年1月—2020年1月新乡市中心医院收治的98例HER2阴性乳腺癌患者进行前瞻性研究。随机分为对照组和治疗组,每组各49例。对照组患者采用TAC方案治疗,第1天静脉滴注注射用盐酸多柔比星,50 mg/m2;多西他赛注射液,75 mg/m2;注射用环磷酰胺,500 mg/m2。治疗组患者采用改良多柔比星脂质体TAC方案,第1天静脉滴注盐酸多柔比星脂质体注射液,30 mg/m2;多西他赛注射液,75 mg/m2;注射用环磷酰胺,500 mg/m2。21 d为1个周期,两组均治疗6个周期。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者肿瘤标志物糖类抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原（CEA）和糖类抗原15-3(CA15-3)水平,左室射血分数（LVEF）水平,心肌酶谱心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平,血清胸苷激酶1(TK1)、组织多肽特异性抗原（TPS）和微小核糖核酸-132(miR-132)水平,生活质量核心量表（QLQ-C30）评分及不良反应情况。结果 ...     

桥本甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌患者血清S100A4、HSP60和TK1检测的临床意义

目的 探讨桥本甲状腺炎(Hashimoto''s thyroiditis, HT)合并甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)患者血清中钙结合蛋白A4(serum calcium-binding protein A4, S100A4)、热休克蛋白(heat shock protein, HSP)60和细胞质胸苷激酶(cytoplasmic thymidine kinase, TK1)水平变化的临床意义。方法 分别抽取2010年1月至2015年6月122例TH合并PTC(TH+PTC组)、43例HT(HT组)和20例正常体检人(健康对照组)的血清标本,酶联免疫法检测各组血清S100A4、HSP60、TK1水平及其治疗前后变化,并探讨这些血清标志与HT+PTC组患者的HT和AJCC分期的关系。结果 HT合并PTC组和HT组的血清S100A4、HSP60和TK1明显高于健康对照组(P＜0.01)。其中,在HT合并PTC组,血清S100A4、HSP60和TK1随HT病情加重和PTC分期升高而升高(P＜0.01),但术后较术前明显降低(P＜0.01);S100A4与HSP60(r=0.865,P＜0.05)、TK1(r=0.679,P＜0.05),HSP60与TK1(r=0.575,P＜0.05)均呈正相关。结论 血清S100A4、HSP60、TK1联合检测有助于早期诊断HT合并PTC。     

内部核糖体进入位点控制hytk基因和绿色荧光蛋白的表达

构建一种带有绿色荧光蛋白基因（ｇｆｐ）和ｈｙｔｋｃＤＮＡ（潮霉素磷酸转移酶和ＨＳＶ－ｔｋ的融合基因）的新型真核表达载体,用于简便、快速地了解自杀基因在恶性肿瘤听转染效率。利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖体进入位点,将ｇｆｐ的ＣＤＮＡ与ｈｙｔｋ真核表达载体重组,构建获得含ｇｆｐ和ｈｙｔｋ基因的重组质粒;Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导下分别转染ＣＯＳ－７细胞及人膀胱癌细胞株ＥＪ,并检测表达情况。结果示该载体在     

pGL3-hTERT-tk/GCV对胃癌细胞的促凋亡作用

目的:探讨重组质粒pGL3hTERTtk/GCV对胃癌细胞的促调亡作用。方法：以基因工程方法构建重组质粒pGL3hTERTtk和相应的荧光报告质粒pGL3hTERTtkLuc+;脂质体LipofectamineTM2000瞬时转染胃癌细胞系SGC7901并用GCV干预,荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率,TUNEL标记和流式细胞术观察转染后胃癌细胞的凋亡;以上实验均以正常肝细胞L02为对照。结果：经鉴定,重组质粒pGL3hTERTtk中tk片段的长度为1 100 bp。荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3hTERTtkLuc+均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞SGC7901,转染效率为(8.2±114)%。重组质粒转染胃癌细胞后与GCV共育4 d,细胞的凋亡率为(60.0±1.56)%;被pGL3hTERTtk转染的肿瘤细胞细胞周期发生了变化,处于细胞周期早期的细胞大量凋亡,早期凋亡率为（47.1±1.35）%。〖HT5W〗结论：〖HT5\"SS〗pGL3hTERTtk/GCV对胃癌细胞有强烈的杀伤作用,但不影响正常细胞的生长,有潜在临床应用前景。     

人结直肠癌组织中胸腺嘧啶核苷磷酸化酶和二氢嘧啶脱氢酶的活性变化及其意义

目的研究人结直肠癌组织及癌旁正常组织胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(thymidinephosphorylase,TP)和二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidinedehydrogenase,DPD)活性与结直肠癌临床病理特征以及与5-FU化疗效果的关系。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测68例结直肠癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织TP和DPD活性,其中40例患者术后接受5-FU结合甲酰四氢叶酸钙化疗。结果(1)结直肠癌肿瘤组织TP活性(120±102)U/mg明显高于癌旁正常组织(60±49)U/mg,P<0·01;组织分型差(低分化、黏液腺癌)、Dukes分期晚(C期和D期)、有淋巴转移的肿瘤组织TP活性明显增高;(2)在术后接受5-FU化疗的患者中,肿瘤DPD活性低和TP/DPD比值高的患者术后生存期明显好于DPD活性高和TP/DPD比值低的患者。结论人结直肠癌组织TP活性明显高于癌旁正常组织;肿瘤TP活性与结直肠癌恶性潜能相关,可能在肿瘤的发展中起一定作用;肿瘤DPD活性和TP/DPD比值可能是预测结直肠癌对5-FU化疗敏感性的指标之一。     

HSV-tk基因特异性杀伤大肠癌细胞的实验研究

目的：探讨单纯疮疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－tk)ad基因在大肠癌组织细胞中特异地表达, 以达到靶向基因治疗的作用。方法：构建以ＣＥＡ基因顺式转录调控序列（ＴＲＳ）驱动tk基因的组织特异性重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＡtkＮa,然后以重组逆转录病毒上清染法将重组组织特异性载体及非组织特异性载体分别转导入高分泌ＣＥＡ的大肠癌ＬoＶo细胞中,以Ｇ４１８筛选阳性克隆扩增后给予前药更昔洛韦（ＧＣＶ）进行敏感试验。结果：转导     

Hemophagocytic lymphohistiocytosis and primary immune deficiency disorders

Hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH) is characterized by uncontrolled immune activation and is traditionally associated with inherited gene defects or acquired causes. In addition to abnormalities in cytotoxic granules and lysosomes, various primary immune deficiency disorders (PID) have been identified among patients suffering from HLH. Our purpose was twofold: to better characterize and detail the association between PID and HLH.