国产rhGH的免疫原性及其对临床疗效的影响

目的　通过测定生长激素缺乏症 (GHD)患儿用国产重组人生长激素 (recom bined hum angrowth horm one,rh GH)治疗时血清生长激素抗体 (GH- Ab)水平及其结合特性 ,探讨 rh GH的免疫原性及其对疗效的影响。方法　对 6 1例 (男 49例 ,女 12例 ) GHD患儿用国产 rh GH治疗 ,每晚睡前皮下注射 rh GH 0 .1IU /kg共6个月 ;用放射免疫法测定治疗期间患儿血清 GH- Ab水平和滴度 ,并计算抗体结合容量、亲和常数 (Ka)。结果　48%患儿 (2 9/6 1)用药后 3个月血清 GH - Ab呈阳性至试验结束时仍未消失 ,其中 2 0例抗体为弱阳性 (结合率 <10 % ) ,9例呈强阳性 (结合率 >15 % ) ;5 2 %患儿 (32 /6 1)治疗期间抗体为阴性 ;血清 GH- Ab的结合容量、Ka及滴度均为低水平 ,分别为 (0 .1～ 4.8) pmol/L、(1.7× 10 7～ 6 .5× 10 8) L /mol和 1∶ 4～ 1∶ 8。GH- Ab阳性患儿治疗后的身高、身高增长速率及身高落后于正常 SD值的变化与同期阴性者比较无统计学差异 (P>0 .0 5 )。结论　本试验所用国产 rh GH对 GHD患儿身高增长具有确切的促进作用 ,其免疫原性所导致产生的 GH - Ab未对患儿体格线性增长产生负性影响     

乙型脑炎、麻疹胎传母体抗体的调查

86对母婴血清标本用间接酶联免疫测定法(ELISA)测定了乙型脑炎抗体,118对用血凝抑制(血抑)试验测定了麻疹抗体。结果发现,脐血乙型脑炎抗体阳性率为79.1％,母血为74.4％,几何平均滴度在脐血显著高于母血(t=5.1857,P<0.01),比值为1.2∶1。脐血和母血的麻疹血抑抗体阳性率分别为86.4％及84.8％,几何均值也是前者高于后者(t=4.0349,P<0.01),比值为1.3∶1。 108份婴儿血清标本测定结果显示,0～3个月婴儿乙型脑炎抗体阳性率为35％,4～9个月仅为13％,10个月及以上的婴儿全部阴性。此结果与近年上海市小于1岁组乙型脑炎发病率最高相一致,提示应考虑提早乙型脑炎疫苗的接种年龄。     

胞嘧啶脱氨酶的原核表达和多克隆抗体的制备

目的：在原核系统中表达并纯化大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase,CD)，制备鼠抗大肠杆菌CD多克隆抗体，方法：亚克隆CD基因到原核表达载体pMAL-c2和pBV222中，并转化入大肠杆菌DH5α内，诱导表达并纯化MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果：通过重组质粒的酶切筛选出重组阳性克隆，成功地表达和纯化出MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD成功制备了鼠抗CD多克隆抗体，并用6his-CD和GST-CD重组蛋白进行Western印迹分析，证实了抗体的正确性，结论：应用多克隆抗体可以检测体内外CD基因的表达，为临床前和临床上深入开展CD基因的生物治疗研究提供重要的实验材料。     

抗大肠癌噬菌体人单链抗体的初步鉴定及序列分析

目的 :对抗大肠癌细胞的单克隆噬菌体单链抗体进行初步鉴定和测序分析。方法 :采用细胞ELISA ,免疫组化 ,DNA序列测定和计算机分析方法 ,对 5个单克隆噬菌体抗体 (CH2 73,CH2 0 5 ,CH2 0 9,CHA12 ,CH72 3)进行初步鉴定和序列分析。结果 :5个抗体均对人大肠癌细胞、人胚肾上皮细胞和其它某些人肿瘤细胞反应 ,也与人正常肝细胞有弱阳性反应 ,但不与鼠源性的癌细胞和正常细胞反应。细胞免疫组化进一步证实了ELISA结果的正确性。大肠癌免疫组化对大肠癌组织有特异性的结合反应 ,而不与正常大肠组织反应。测序结果为CH2 73ScFv全长 732bp ;V ,D ,J分别属于VH3 30 D1 2 6 JH3 linker V1 13 JL2 ,GenBank序号为AY0 2 8777和AY0 2 8996 ;CH2 0 5全长 36 6bp ,V ,D ,J分别VH1 4 6 D6 13 JH3,GenBank序号为AF35 936 5 ;CH2 0 9,CHA12和CH72 3的ScFv基因完全相同 ,全长 72 3bp ,其VH DH JH与CH2 73ScFv基因中的VH DH JH 完全一致 ,V ,D ,J分别属于VH3 30 D1 2 6 JH3 linker L2 Jκ2 ,GenBank序号为AF36 3774。结论 :噬菌体抗体具有结合人大肠癌组织和细胞的活性 ,为进一步开发临床应用人源抗肿瘤抗体和小分子抗体片段奠定基础     

肾上腺素能β1受体亚型特异性抗体的制备及鉴定

【目的】制备和鉴定 β1受体亚型特异性抗体。【方法】人工合成 β1受体细胞膜外第二环 197 2 2 2位氨基酸序列作为抗原。连接钥孔冒贝血蓝蛋白 (KLH)增加抗原性后免疫兔获得抗血清。通过凝胶双扩散实验和ELISA法鉴定其效价 ;通过免疫荧光法及ELISA法鉴定其特异性 ;通过离体蛙心灌流实验鉴定其药理活性。【结果】该抗血清效价高 (分别为 1∶6 4和 1∶10 6)、特异性强 ,能和心肌 β1受体发生特异性结合 (1∶10 4 ～ 1∶10 5) ,为异丙肾上腺素的非竞争性拮抗剂。 (pD2 ′ =1 6 2 )。【结论】成功制备的 β1受体亚型特异性抗体可能成为进一步研究 β1受体分布、功能和定量的有力工具。     

SA脂质体介导GFP／bFGF基因在豚鼠耳蜗中的表达

目的 :观察天然碱性脂 (Stearylamine,SA)脂质体介导绿色荧光蛋白 /碱性成纤维细胞生长因子(GFP/bFGF)基因于不同时间段豚鼠耳蜗中的表达 ,为进一步研究耳聋的基因治疗提供实验基础。方法 :取豚鼠 1 6只 ,分成 4组 ,每组 4只。其中 3只右耳圆窗内注入SA -GFP/bFGF复合物 ,1只同法注入生理盐水作为对照。分别于术后第 2、7、1 4、2 1天取材。在荧光显微镜下观察GFP的表达 ,用免疫组化法检测bFGF的转导情况。结果 :荧光显微镜下见双侧耳蜗于术后第 2天开始部分细胞发出绿色荧光 ,第 7天达到高峰 ,支持细胞及内外毛细胞均显荧光 ,细胞轮廓清晰 ;第 1 4天开始减弱 ,第 2 1天消失。免疫组化染色显示 ,除血管纹外 ,耳蜗各回Corti器、螺旋韧带、螺旋缘及螺旋神经节细胞均有高浓度的表达产物 ,对照动物呈阴性表达。结论 :SA脂质体介导的GFP/bFGF基因单耳给药双侧耳蜗均有高效表达 ,为进一步研究基因治疗耳聋提供了可能。     

Characterization of gp 50, a major glycoprotein present in rat brain synaptic membranes, with a monoclonal antibody

Several cell lines secreting monoclonal antibodies (Mabs) against a major forebrain synaptic membrane (SM) glycoprotein, gp 50, have been raised. Western blots show that the Mabs react with a polypeptide doublet of Mrs 49 and 45 kDa. These polypeptides exist solely in a concanavalin A (Con A) binding form. Removal of the Con A receptors by digestion with endo-beta-N-acetylglucosaminidase H (endo H) lowers the Mrs of the glycoprotein doublet to 36.5 and 34 kDa. Western blots of 2D polyacrylamide gels indicate that gp 50 exists in several isoforms. Solid phase radioimmunoassay (RIA) and Western blots of brain subcellular fractions show the antigenic material to be concentrated in the SM fraction, but to be present in much lower amounts in synaptic junctions and postsynaptic densities. Gp 50 appears to be brain specific. Regional distribution studies show that it is present in all brain regions but is two-fold concentrated in cerebellum, brainstem and midbrain compared to forebrain. Immunocytochemical studies of several brain regions show that gp 50-like immunoreactivity is neuron specific and is concentrated in selected neuronal species, particularly granule cells. In both cerebellar and hippocampal granule cells gp 50-like immunoreactivity is localized in the perikarya and primary dendrites. Though immunocytochemistry did not show staining of synaptic regions this may be due to masking of the reactive epitope. The results are discussed in terms of the molecular properties of gp 50 and its subcellular localization in brain tissue.     

间接免疫荧光法检测特异性IgG抗体对流行性出血热诊断意义

本文报告用间接免疫荧光法检测特异性IgG抗体对流行性出血热的诊断意义。53例不同病期的出血热患者的血清,其间接荧光抗体的阳性率为49/53(占92.45％)。有77.36％的患者血清,检出IgG抗体的时间是在发病后的1～2周。血清中IgG的滴度与疾病的严重性无密切相关。另25例非EHF患者,其血清特异性IgG抗体均为阴性。可见检测特异性IgG抗体对EHF的诊断颇为有用。     

An epitope shared by central nervous system myelin and peripheral blood macrophages

Lewis rats were immunized with a homogenate of human spinal cord. Splenocytes from the immunized rats were fused with cells from the SP2/0-Ag14 cell line to form hybrids that were subsequently screened immunohistochemically for secretion of antibodies against myelin. Thirty hybrids secreting anti-myelin antibodies were cloned. One secreted antibody (774) that immunohistochemically stained central nervous system (CNS) myelin but not peripheral nervous system (PNS) myelin also bound to the surface of peripheral blood macrophages. Hence we have identified an epitope that is shared by peripheral blood macrophages and CNS myelin.