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61.
微矩阵基因芯片筛选喉鳞癌相关基因的研究 总被引:11,自引:1,他引:10
目的:应用基因微矩阵方法筛选喉鳞癌相关基因。方法:按一步法抽提喉鳞癌和对照喉正常组织的总DNA并纯化mRNA;将4096种人类基因PCR产物用CartesianPixsys7500点样仪按微矩阵排列点样于化学涂层的载玻片上,制成基因芯片;将等量的对照组织和喉鳞癌组织mRNA分别逆转录合成荧光分子掺入的cNDA-链做探针,混合后杂交上述基因芯片,经严格洗片后用ScanArray3000扫描仪扫描芯片 相似文献
62.
基因表达谱芯片在胰腺癌相关基因筛选中的应用研究 总被引:24,自引:0,他引:24
目的:探讨基因表达谱芯片技术在高通量筛查肿瘤相关基因群及研究胰腺癌分子病理变化中的应用价值。方法:应用含有4096条人类全长基因的cNDA表达谱芯片,对3例临床切除的胰腺癌及正常胰腺标本的基因表达谱进行分析。结果:在3例胰腺癌和正常胰腺组织中均有差异表达的基因398条,其中新基因289条,老基因109条。从老基因中筛选出有显著表达差异基因37条,其中在胰腺癌组织中上调基因20条,下调基因17条。结 相似文献
63.
The human liver cDNA clone UDPGTh2, encoding a liver UDP-glucuronosyltransferase (UDPGT) was isolated from a λ gt 11 cDNA
library by hybridization to mouse transferase cDNA clone, UDPGTm1. UDPGTh2 encoded a 529 amino acid protein with an amino
terminus membrane-insertion signal peptide and a carboxyl terminus membrane-spanning region. There were three potential asparagine-linked
glycosylation sites at residues 67, 68, and 315. In order to obtain UDPGTh2 protein encoded from cloned human liver UDP-glucuronosyltransferase
cDNA, the clone was inserted into the pSVL vector (pUDPGTh2) and expressed in COS 1 cells. The presence of a transferase with
Mr≈52,000 in transfected cells cultured in the presence of [35S]methionine was shown by immunocomplexed products with goat antimouse transferase IgG and protein A-Sepharose and analysis
by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and autoradiography. The expressed UDPGT was a glycoprotein as
indicated by electrophoretic mobility shift in Mr≈3,000–4,000 when expressed in the presence of tunicamycin. The extent of
glycosylation was difficult to assess, although one could assume that glycosyl structures incorporated at the level of endoplasmic
reticulum were always the core oligosaccharides. Thus, it is likely that at least two moieties inserted can account for the
shift of Mr≈3,000–4,000. This study demonstrates the cDNA and deduced amino acid sequence of human liver UDP-glucuronosyltransferase
cDNA, UDPGTh2. 相似文献
64.
65.
具强杀菌活性的兔Ⅱ型磷脂酶A2互补DNA克隆及其顺序确定的研究 总被引:6,自引:2,他引:4
目的:确定具强杀菌活性的兔Ⅱ型磷脂酶A2(PLA2)cDNA和蛋白质的一级结构,了解其杀菌功能与蛋白质一级结构的关系.方法:用PCR方法从兔骨髓cDNA库中克隆出Ⅱ型磷脂酶A2 cDNA并确定DNA顺序,推断出它的蛋白质一级结构;并与其它一些动物PLA2的结构进行比较.结果:成功获得了该磷脂酶A2的cDNA和蛋白质一级结构.它是目前上百种已知蛋白质一级结构的磷脂酶A2中碱性最强的蛋白,氨基酸组成中碱性氨基酸较丰富.其它具杀菌活性的哺乳动物Ⅱ型磷脂酶A2也都是碱性强的蛋白.结论:磷脂酶A2一级结构中富于碱性氨基酸是其具有杀菌功能的关键,而杀菌活性的强弱与其分子碱性强度呈正相关. 相似文献
66.
采用新近发展的cDNA代表性差异分析法筛选鼻咽癌中不表达的或表达降低的cDNA序列。结果显示:有9个与已知基因高度同源的cDNA序列。通过对这些已知基因的结构和功能分析,发现有与细胞骨架成分相关的基因:αactinin,ezrin和细胞角蛋白13;直接与瘤基因和抑瘤基因相互作用的基因:鲨烯合成酶和TRIP1基因;直接参与DNA合成以及调控基因转录和翻译的基因:TAFⅡ68和组蛋白H10;另外还有人类补体因子B及类转运RNA合成酶的基因。这些基因大多具有相当于抑瘤基因的功能。从而进一步说明鼻咽癌的发生是多基因相互作用的结果。 相似文献
67.
人肺癌相关抗原的基因克隆 总被引:4,自引:0,他引:4
目的克隆人肺癌相关抗原的基因。方法用λgt11Sfi-Not定向克隆载体构建人肺鳞癌细胞系L-78的cDNA文库,并以抗人肺癌单抗ALT-04为探针进行了筛选。对名为hlc-14的cD-NA克隆作了测序分析与进一步研究。用重组的pXJ41-hlc14质粒转染NIH3T3细胞,通过免疫组化法对克隆基因进行了表达检测与鉴定,还观察了转染细胞的软琼脂集落形成能力。结果建成1.4×106pfu/ml人肺癌cDNA文库,经过四轮免疫学筛选获得6个cDNA克隆,最大的cDNA克隆为hlc-14,长954bp。对该克隆的测序结果与基因库资料比较,未发现同源序列。hlc-14cDNA转染的NIH3T3细胞有明显的肺癌相关抗原表达,并且在软琼脂中的集落形成能力增强。结论hlc-14是一个新的肺癌相关抗原的cDNA序列。这一序列的发现为阐明肺癌的发病机理、探索肺癌基因治疗的靶基因提供了新的线索 相似文献
68.
69.
Cloning and characterization of a blood coagulation factor IX-binding protein from the venom of Trimeresurus stejnegeri. 总被引:1,自引:0,他引:1
A blood coagulation factor IX-binding protein (TSV-FIX-BP) was isolated from the snake venom of Trimeresurus stejnegeri. On SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, TSV-FIX-BP showed a single band with an apparent molecular weight of 23,000 under non-reducing conditions, and two distinct bands with apparent molecular weights of 14,800 and 14,000 under reducing conditions. cDNA clones containing the coding sequences of TSV-FIX-BP were isolated and sequenced to determine the structure of the precursors of TSV-FIX-BP subunits. The deduced amino acid sequences of two subunits of TSV-FIX-BP were confirmed by N-terminal protein sequencing and trypsin-digested peptide mass fingerprinting. TSV-FIX-BP was a non-enzymatic C-type lectin-like anti-coagulant. The anti-coagulant activity of TSV-FIX-BP was mainly caused by its dose dependent interaction with blood coagulation factor IX but not with blood coagulation factor X. 相似文献
70.
正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库的构建及差异基因的初步筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建人正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库.方法采用抑制削减杂交技术,以正常肝组织及有肝癌背景的肝硬化组织作为对比材料.分离出mRNA,经反转录后,通过两轮杂交、两次PCR和T/A克隆构建了两种组织间差异表达基因的cDNA削减文库.结果挑取70个克隆进行酶切和PCR鉴定,显示65个克隆有250~2000 bp插入片段.结论用SSH和T/A克隆技术成功构建了正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库.该文库的建立为进一步筛选、鉴定出肝癌发生过程中的相关调控基因奠定了基础,也有助于阐明肝硬化在肝癌发生过程中所起的作用. 相似文献