三氧化二砷对U2-OS人骨肉瘤细胞形态及细胞凋亡的影响

目的研究三氧化二砷在体外对人骨肉瘤细胞(U2-OS)形态及细胞凋亡的影响。方法以不同浓度三氧化二砷(0.5、1.0、1.5μmol/L)作用骨肉瘤细胞,15 mg/L 5-FU作为阳性对照,采用荧光显微镜观察细胞核形态及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果各浓度的三氧化二砷对骨肉瘤细胞(U2-OS)的形态均有影响,随着三氧化二砷浓度的升高,细胞核发生固缩越明显,细胞凋亡率越高,与正常对照组相比,差异具统计学意义。结论三氧化二砷可导致骨肉瘤细胞(U2-OS)细胞核发生固缩坏死和凋亡,凋亡率与三氧化二砷浓度有依赖关系,在一定浓度范围内随浓度增高而增高。     

Vpr对人结肠癌细胞的抑制作用及其机制

目的 探讨人类免疫缺陷病毒1型( HIV-1)病毒蛋白r(Vpr)对人结肠癌细胞HCT-8的抑制作用及其机制.方法 将细胞分为空白对照组、空载体转染组和Vpr转染组.空白对照组:细胞不予干预;空载体转染组:对数生长期的细胞加入不同感染复数(MOI)的空载体腺病毒;Vpr转染组:加入不同MOI的含有HIV1-Vpr基因的重组腺病毒(Adv-Vpr).应用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及线粒体膜电位,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验;或采用双因素方差分析,组内比较采用t检验.结果 Vpr显著抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞MTT值为1.03±0.04,与空载体转染组(2.46 +0.15)及空白对照组(2.51±0.14)比较,差异有统计学意义(F=144.6,P＜0.05);Adv-Vpr转染48 h后(MOI=200),Vpr转染组处于G2/M期的细胞比例及线粒体膜电位下降的细胞比例增加,分别为37.31％±5.90％和32.07％±5.64％,与空载体转染组(18.30％±6.04％、3.32％±0.79％)及空白对照组916.66％±3.51％、2.76％±1.43％)比较,差异有统计学意义(F=10.08,64.45,P＜0.05).Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞凋亡率为37.62％±6.48％,与空载体转染组(3.44％±1.11％)及空白对照组(2.93％±1.07％)比较,差异有统计学意义(F=122.4,P＜0.05).Adv-Vpr处理48 h后(MOI=200),Westem blot检测发现Vpr导致了Caspase-9、Caspase-3剪切为活性片段,p-Chk1-S345磷酸化增加,而Fas、Fas-L、ERK1及ERK2表达未见上调.结论 Vpr在体外能够有效抑制结肠癌细胞株HCT-8增殖,并诱导其细胞周期G2期阻滞及凋亡,其机制分别与DNA损伤信号通路激活及线粒体凋亡通路启动有关.Vpr在结肠癌的治疗中具有潜在的应用前景.     

缺氧诱导因子-1α及基质金属蛋白酶-9在早期压疮中的表达及作用

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在早期压疮形成中的表达及其作用机制,以期寻找早期压疮干预靶点。方法将36只雄性SD大鼠随机分为3组,每组12只,10%水合氯醛麻醉。实验A、B两组采用特制压力装置在大鼠股簿肌处施压,两组压强相同但压力循环不同,A、B组分别给予3、5个缺血-再灌注循环(缺血2.0h,再灌注0.5h);对照组不予压力。实验终点,取受压中心(对照组取相同解剖部位)肌肉组织标本后实施安乐死。用实时荧光定量RT-PCR法测定HIF-1αmRNA表达水平,ELISA法检测MMP-9和丙二醛(MDA)含量,免疫组织化学染色法检测抗凋亡蛋白Bcl-2,TUNEL标记凋亡肌细胞。结果对照组、实验A组、实验B组HIF-1αmRNA表达水平分别为2.69±1.83、2.55±1.08、3.62±1.99,实验B组高于其他两组。三组MMP-9与MDA含量比较,差异有统计学意义(均P<0.01);实验A、B组显著高于对照组,实验B组显著高于实验A组(均P<0.01)。实验A组Bcl-2蛋白表达最高、对照组次之、实验B组最低;实验A组、B组、对照组凋亡指数(AI)分别为3.53%、7.00%、0.25%。MMP-9含量与AI、MDA呈显著正相关(均P<0.01),HIF-1αmRNA表达与Bcl-2表达呈显著负相关(P<0.01)。结论 HIF-1α在一定缺氧时间和程度范围内介导低氧反应,可对受压组织产生细胞保护作用,而在严重或持续缺氧时则可诱导受压组织细胞凋亡。MMP-9在压疮形成早期大量表达导致细胞外基质过度降解,可能促进受压组织不可逆损伤。     

肾癌中Tiam 1的表达及临床意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)表达与肾癌发生、发展和转移的关系。方法:应用原位杂交及免疫组化方法检测正常肾组织、肾癌石蜡组织标本中Tiam 1mRNA和蛋白的表达情况。用三种不同浓度2μmol/L(T1低浓度)、4μmol/L(T2中浓度)、8μmol/L(T3高浓度)的索坦干扰786-0细胞24h、48h、72h;同时设正常对照组T4(常规培养液)。应用TUNEL法检测各组作用48h细胞凋亡率的变化。应用原位杂交及免疫组化方法检测各组Tiam 1mRNA和蛋白的表达情况。结果:68例肾细胞癌组织中Tiam 1阳性表达率63.2%(43/68),有淋巴结转移组Tiam 1表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.01);对照组10例正常肾组织中Tiam 1表达均为阴性。Tiam 1基因在786-0细株中表达与肾癌组织中表达相一致。结论:Tiam 1表达与肾癌转移存在密切关系,Tiam 1表达可作为肾癌转移过程中一个有价值的指标;索坦可抑制肾癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡,可特异性抑制肾癌786-0细胞中Tiam 1蛋白及mRNA的表达,且具有浓度和时间依赖性。     

当归水煎液对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

目的:探讨当归水煎液对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,用流式细胞术分析细胞周期及凋亡,用放射免疫法测定胶原合成。结果:当归水煎液能促进人脐静脉内皮细胞的增殖,且随浓度增大促增殖作用愈大。当归水煎液使S期和G2/M期细胞增多,G0/G1期细胞减少(P<0.05),凋亡率逐渐减小(P<0.05)。当归水煎液呈剂量和时间依赖性抑制人脐静脉内皮细胞合成胶原(P<0.05)。结论:当归水煎液呈剂量依赖性促进人脐静脉内皮细胞的增殖,抑制其凋亡,减少胶原合成。     

Resveratrol induces apoptosis associated with mitochondrial dysfunction in bladder carcinoma cells

Objective: Resveratrol shows chemopreventive activity in a variety of human cancers by targeting mitochondria and triggering apoptosis. The purpose of this study was to investigate the antitumor action of resveratrol in bladder cancer and its underlying mechanism. Methods: Using two different bladder cell lines, BTT739 and T24, the cytotoxicity of resveratrol were determined by MTT assay. The apoptosis induced by resveratrol was assayed by transferase dUTP nick end labeling staining. To show whether the mitochondrial dysfunction involved in the effects of resveratrol, mitochondrial function was detected by mitochondrial membrane potential, reactive oxygen species production and adenosine 5′‐triphosphate content. In addition, the markers of apoptosis in the intrinsic mitochondrial‐dependent pathway were analyzed by the release of cytochrome c and the activities of caspase‐9 and caspase‐3. Results: Resveratrol effectively decreased cell viability and induced apoptosis in a concentration‐ and time‐dependent manner. In addition, resveratrol significantly disrupted the mitochondrial membrane potential in both intact cells and isolated mitochondria. Resveratrol also increased reactive oxygen species production and reduced adenosine 5′‐triphosphate concentrations. Western blot analysis showed that resveratrol provoked the release of cytochrome c from mitochondria to the cytosol. Furthermore, resveratrol significantly promoted the activation of caspase‐9 and caspase‐3.

Conclusions:

These findings suggest that resveratrol efficiently triggers apoptosis in bladder cancer cells through the intrinsic mitochondrial‐dependent pathway, which is associated with mitochondrial dysfunction. Resveratrol might have great pharmacological promise in the treatment of bladder cancer.     

葡茶多酚对尿酸诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1表达的影响

目的研究葡茶多酚对尿酸诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1表达的影响。方法培养分离肾小管上皮细胞,分对照组、尿酸组、葡茶多酚组（在尿酸干预基础上,分别加入终浓度为0．2、0．4、0．8mg／L的葡茶多酚）共5组,MTT法测细胞增生率、TUNEI。测凋亡率、ELISA测TGF-β1分泌,RT-PCR测TGF-β1mRNA表达。结果与尿酸组相比,加入葡茶多酚干预后,肾小管上皮细胞增生率明显增高（P〈0．01）,葡茶多酚干预浓度愈高,肾小管上皮细胞增生率则愈高;葡茶多酚各浓度组在任一时间点凋亡率均明显低于尿酸组,差异有显著意义;葡茶多酚各浓度组之间相比,浓度愈高,则培养细胞凋亡率愈低,差异有显著意义,尿酸作用时间愈长,则培养细胞凋亡率愈高;葡茶多酚各浓度组在任一时间点培养上清TGF-β1浓度均明显降低,差异有显著意义;葡茶多酚各浓度组之间相比,浓度愈高,则培养上清TGF-β1浓度愈低,差异有显著意义,尿酸作用时间愈长,则培养上清TGF-β1浓度愈高;葡茶多酚各浓度组在任一时间点培养上清TGF-β1mRNA表达均明显降低,差异有显著意义;葡茶多酚各浓度组之间相比,浓度愈高,则培养上清TGF-β1mRNA表达愈低,但0．2mg／L葡茶多酚组与0．4mg／L葡茶多酚组、0．4mg／L葡茶多酚组与0．8mg／L葡茶多酚组差异无显著意义,0．2mg／L葡茶多酚组与0．8mg／L葡茶多酚组之间差异有显著意义,尿酸作用时间愈长,则TGF-β1mRNA表达愈高。结论高尿酸能抑制肾小管上皮细胞的增生,减少肾小管上皮细胞的凋亡及TGF-β1的表达与分泌。     

白芨水煎剂对结肠黑变病豚鼠结肠上皮细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的影响

目的 探讨白芨水煎剂对结肠黑变病（melanosis coli,MC）豚鼠结肠黏膜上皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白TNFα、Bcl-2和Bax表达的影响。方法 清洁级豚鼠40只,完全随机分为3组：正常组8只,模型组16 只和白芨水煎剂组16只。模型组及白芨剂组均予大黄提取液6g/kg&amp;amp;#183;d连续灌胃60d。造模开始2周后,模型组予生理盐水灌肠,白芨组予10%白芨水煎剂灌肠,每周3次。造模结束后,观察豚鼠肠壁色素沉着情况,行结肠组织HE染色和黑色素染色。应用TUNEL染色检测结肠上皮细胞凋亡,Western blotting检测TNFα、Bcl-2和Bax的表达。结果 与模型组（4.81&amp;amp;#177;0.40）相比较,白芨组豚鼠的结肠黑变病评分（2.88&amp;amp;#177;0.34）显著降低（p＜0.05）,结肠黏膜上皮细胞TUNNEL染色细胞凋亡阳性率（16.97&amp;amp;#177;1.46%）显著低于模型组（23.28&amp;amp;#177;1.94%）（p＜0.01）。与正常组相比较,模型组豚鼠结肠组织TNFα和Bcl-2的蛋白表达量显著增高,分别为正常组的4.27倍和3.68倍（均p＜0.001）。白芨组豚鼠结肠的TNFα和Bcl-2表达量较模型组显著下降,分别为模型组的54.6%和47.8%（均p＜0.001）。相反,模型组豚鼠结肠组织中Bax的表达量与正常组相比显著下降,为正常组的45.0%（p＜0.001）。白芨组的Bax表达比模型组显著增高,为模型组的1.96倍（p＜0.001）。结论 白芨水煎剂可能通过抑制MC豚鼠结肠组织TNFα和Bcl-2的蛋白表达,增加Bax表达,降低Bcl-2/Bax的比值,抑制结肠上皮细胞凋亡,从而改善MC。     

曲古抑菌素A预处理对小鼠脑缺血再灌注损伤皮质炎症反应和凋亡的影响*

目的 探讨曲古抑菌素A预处理在小鼠脑缺血再灌注损伤中对大脑皮质炎症反应和凋亡的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为3组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、曲古抑菌素A预处理组（预处理组）,每组10只。采用颈部切口大脑中动脉线栓（MCAO）法缺血1?h,再灌注24?h复制脑缺血再灌注模型,预处理组在复制脑缺血再灌注模型前连续3?d腹腔注射曲古抑菌素A 5?mg/kg。取脑皮质组织,光学显微镜下观察病理学结果,ELISA检测TNF-α、IL-1β,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3,TUNEL检测细胞凋亡。结果 3组TNF-α、IL-1β、Bax、Bcl-2及Caspase-3比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。与S组比较,IR组病理学损伤严重,TNF-α、IL-1β、Bax、Caspase-3阳性表达水平升高,Bcl-2降低（P?<0.05）;与IR组比较,预处理组病理学损伤减轻,TNF-α、IL-1β、Bax、Caspase-3阳性表达水平降低,Bcl-2升高（P?<0.05）。结论 曲古抑菌素A预处理能抑制炎症因子、凋亡因子的表达及减少细胞凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤。