β1整合素基因缺失对Gi蛋白分布的影响

目的 了解跨膜蛋白β1整合素对信号分子G蛋白细胞内构型的影响,为进一步研究β1整合素在信号传导中的作用打下基础。方法 采用荧光双标记及重叠合显微镜分析技术,观察野生型胚胎干细胞系（D3细胞）,β1整合素基因敲除胚胎干细胞（G201细胞）,β1整合素基因敲除后再植入胚胎干细胞（G201N）及小鼠胚胎心肌细胞中多种G蛋白（Gas,Gai1-3,Gao,Gai/o/t/z）细胞内构型特点和差异。结果 Gas,Gao,Gai/o/t/z在上述几种细胞系中均呈弥温性分布,未能发现明显差异,与此不同的是Gai1-3在D3细胞源性心肌细胞内呈网状分布,在非心肌细胞内呈线条状分布,而在G201细胞中Gi上述特异性构型被打乱,呈近似于弥漫样分布,值得注意的是在β1整合素重新恢复的G201N细胞Gi构型又呈网样或线条样分布,与野生型胚胎干细胞中Gi的构型相一致。结论 β1整合素能够影响信号分子Gi蛋白的细胞内定位,推测β1整合素可通过改变Gi的分布而影响Gi介导的信号传导。     

系膜增生性肾炎中单核细胞趋化蛋白-1的表达和单核巨噬细胞的浸润

目的观察在系膜增生性肾炎(MsPGN)中,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达和单核/巨噬细胞(MФ)的浸润情况.方法采用免疫组织化学和原位杂交技术观察17例MsPGN患者肾活检组织.结果①轻度MsPGN中,肾小球和肾小管间质中有少量Mφ浸润、MCP-1无明显表达(P＞0.05);②中度MsPGN中,肾小球、肾小管-间质中的Mφ浸润数、MCP-1表达量显著增高(P＜0.01).肾小球MCP-1+细胞数与肾小球内MФ数呈正相关(r=0.90,P＜0.01);MCP-1+小管数与小管间质内MФ数亦呈正相关(r=0.86,P＜0.01).结论①MФ参与中度MsPGN中肾小球和肾间质小管的炎症病变;②肾小球和肾小管间质中浸润的MФ可能受MCP-1趋化作用的影响.     

利用PCR技术构建GM-CSF/Fc_(γ2)~-融合蛋白真核表达载体

目的　对融合基因GM -CSF Fcγ2 进行定点突变 ,去除其补体结合位点 ,构建GM -CSF Fcγ2-融合蛋白真核表达载体。方法　通过设计突变引物 ,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM -CSF Fcγ2-。并通过T -A克隆策略 ,把突变后的融合基因GM -CSF Fcγ2-重组到真核表达载体pRc CMV2中 ,构建真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-并经过酶切和测序确证。结果　成功对融合基因GM -CSF Fcγ2-进行了突变 ,构建了真核表达载体pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-。结论　利用该PCR方法进行基因定点突变可行     

脊髓损伤后bFGF和GFAP的变化及其意义

目的：研究脊髓损伤后碱性成纤维细胞因子和胶质纤维酸性蛋白的变化及其两者的相关性,探讨脊髓损伤后脊髓的自身保护机制以及星形胶质细胞在脊髓损伤中的作用。方法：用免疫组织化学,组织学染色和图像分析的方法检测损伤脊髓碱性成纤维细胞及胶质纤维酸性蛋白表达的动态变化。结果：脊髓损伤后1d损伤脊髓中碱性成纤维细胞的表达明显增高,7d达到高峰,14d末回落,而胶质纤维酸性蛋白表达则在1－14d内呈进行性增高趋势,两指标相关性显著（r=0.777,P=0.001),结论：脊髓损伤后反应性星形细胞胶质化对脊髓的再生和自身修复起着重要作用,提示脊髓本身存在自身保护机制。     

精子膜蛋白Cyritestin单抗对鼠精卵结合和融合的抑制作用及其意义

目的 通过观察精子膜蛋白Cyritestin单抗对体外鼠精－鼠结合和融合作用的影响,探讨该蛋白在受精过程中的作用。方法 应用鼠Cyritestin单抗,通过体外受精试验观察该单抗预孵育不同浓度精子后,对精－卵结合和融合功能的影响;应用免疫细胞化学方法确定Cyritestin在精子表面的特异性定位。结果 不同精子浓度下,Cyritestin单抗均可显著降低体外精－卵的结合和融合能力;可使精－卵结合指数降低37.18%－79.00%,平均60.33%;使精－卵融合的受精指数降低51.66%－77.01%,平均66.90%;受精率下降32.28%－76.15%,平均57.41%。在精子项体反应前后,Cytitestin在精子表面均特异性定位于精子头部赤道区域和项体内膜区域。结论 Cyritestin在精－卵的结合和融合中均发挥重要生理作用。该蛋白作为精子靶抗原开发避孕疫苗的可能性值得深入研究。     

人截断型LBP基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

目的 构建人N端截断型脂多糖结合蛋白（tLBP)基因的杆状病毒表达载体,为后续的蛋白表达及其抗内毒素保护作用研究奠定基础。方法 采用PCR技术从人全长LBP基因cDNA中扩增长度为695bp的基因片段,经pGEM-T载体亚克隆筛选和序列分析后,应用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统,基因重组和外源基因转座分别构建转移质粒pFASTBACtLBP和穿梭质粒pBac-midtLBP。结果 经PCR、琼脂糖凝胶电泳、酶切分析及序列测定,所克隆的基因片段为700bp左右的tLBP,并证实其目的基因重组载体发生了特异转座和病毒重组。结论 本实验成功克隆了tLBP目的基因片段并构建其杆状病毒表达载体。     

去甲二氢愈创木酸对SHG-44胶质瘤细胞GFAP基因表达的影响

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞分化过程中中对GFAP基因表达的影响及其意义。方法：用免疫组织化学和原位杂交方法定性、定量检测人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞GFAP基因的表达水平。结果：NDGA处理后,瘤细胞GFAP蛋白及mRNA表达水平明显增高（P＜0.01）。结论：NDGA具有诱导恶性胶质瘤细胞GFAP基因表达的作用,推测GFAP基因表达上调可能是NDGA诱导胶质瘤细胞分化的作用机制之一。     

原发性闭角型青光眼房水蛋白含量的检测及其与中医证型关系的研究

对115例原发性闭角型青光眼和34例老年性白内障患者的房水蛋白进行了测定。结果：闭角型青光眼 疾病分类各组及中医证型各组均表现为房水白蛋白和总蛋白含量增高,与老年性白内障组相比,各组均有非常显著性差异（P＜0．01）。闭角型青光眼疾病分类组间比较及中医证型组间比较,房水白蛋白和总蛋白含量亦均有显著性差异（P＜0．05）或非常显著性差异（P＜0．01）。证明原发性闭角型青光眼患者的血－房水障碍功能遭受破坏,房水的粘度增加,房水淤积于眼内。     

冠心病患者炎症反应与血小板活化功能的关系

目的：探讨白介素－6,C－反应蛋白及α－颗粒膜蛋白与心绞痛的关系。方法：不稳定型心绞痛组25例（Ⅰ组）,分为急性（ⅠA组）和病情稳定（ⅠB两个阶段,稳定型心绞痛组（Ⅱ组）35例,正常对照组（Ⅲ组）30例。检测各组血清白介素－6浓度,C－反应蛋白水平,α－颗粒膜蛋白浓度。结果白介素－6,C－反应蛋白,α－颗粒膜蛋白水平ⅠA组均高于ⅠB组、Ⅱ组、Ⅲ组（P值均＜0．05）。ⅠB组、Ⅱ组3个指标比Ⅲ组高（P值均＜0．05）。ⅠB组、Ⅱ组比较差异无显著性（P＞0．05）,白介素－6,C－反应蛋白,α－颗粒膜蛋白浓度间彼此呈直线相关（P值均＜0．01）。结论①炎性细胞因子白介素－6及其诱生的急性相蛋白C－反应蛋白在心绞痛发病中起重要作用。②炎症反应影响心绞发生发展可能机制之一是通过激活血小板实现的。     

血清C—反应蛋白测定在女性盆腔包块鉴别诊断中的意义

目的;探讨C－反应蛋白（CRP）测定对女性盆腔包块鉴别诊断的临床价值。方法：分别测定盆腔炎性包块、良恶性肿瘤患者及无盆腔包块正常妇女血清C－反应蛋白。结果：炎性包块组、恶性肿瘤组血清CRP水平极显著地高于良性肿瘤组和正常对照组（P＜0．01）,且炎性包块组血清CRP水平升高的程度远大于恶性肿瘤组（P＜0．01）;而良性肿瘤组血清CRP与正常对照组无显著差异（P＞0．05）,两者均在正常范围。结论：血清CRP极显著升高者,首先应考虑炎性包块;较显著升高者,在排除感染,创伤及其他引起CRP升高者外要考虑盆腔恶性肿瘤的可能;CRP在正常范围者炎性包块的可能性极小。说明血清CRP测定是女性盆腔包块鉴别诊断的有用手段。