布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究

目的 观察布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）对破骨细胞增殖及分化的影响,探讨BTK对根尖周炎骨破坏的作用。方法 破骨前体细胞RAW264.7经100 ng·L ^-1核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导5 d后,通过观察细胞形态、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法,验证破骨细胞是否诱导成功。破骨细胞诱导成功后,转染BTK-小干扰RNA（siRNA）24 h,利用RT-qPCR检测TRAP mRNA的表达,采用CCK-8和TRAP酶活性检测法检测破骨细胞的增殖及分化情况。结果 RAW264.7细胞经RANKL诱导5 d后,可见大量体积较大,外观呈圆形、椭圆形,周围有不规则突起及TRAP染色阳性的多核破骨细胞。经BTK-siRNA转染24 h后,破骨细胞TRAP mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）,其增殖及分化能力也明显受到抑制（P<0.05）。结论 抑制BTK表达,可以抑制破骨细胞的增殖及分化;BTK可作为抑制破骨细胞的新靶点。     

VAMP4 and its cognate SNAREs are required for maintaining the ribbon structure of the Golgi apparatus

Background

The Golgi apparatus is at a crossroads between anterograde and retrograde trafficking. It exhibits a twisted ribbon-like network in the juxtanuclear region of vertebrate cells. Vesicle-associated membrane protein 4 (VAMP4) is a unique v-SNARE expressed exclusively in trans-Golgi networks (TGN), where it regulates retrograde trafficking from the early endosome to the TGN with its cognate SNARE partners Syntaxin 6, Syntaxin 16, and Vti1a.

World Workshop on Oral Medicine VII: Targeting the microbiome for oral medicine specialists—Part 1. A methodological guide

Advances in high‐throughput sequencing technologies have allowed for a rapid increase in knowledge about the human microbiome in both healthy and diseased states, which is expected to increase our understanding of multifactorial diseases. The World Workshop on Oral Medicine VII chose the microbiome as one of its topics of focus. Part 1 of this review provides updated knowledge in the field of microbiome research, describes the advantages and disadvantages of currently available sequencing technologies, and proposes a seven‐step “recipe” for designing and performing studies that is supported by contemporary evidence. Part 2 of this review in a companion paper discusses the results of high‐throughput sequencing studies published to date on the microbiota associated with oral mucosal diseases. The goal of this collective enterprise is to encourage more oral medicine specialists to become engaged in multidisciplinary collaborations to investigate the role of the microbiome in relation to oral diseases, which could potentially lead to enhanced diagnosis, risk assessment and treatment of these patients.     

环状RNA在免疫炎症反应中的作用及其在口腔疾病中的研究进展

环状RNA（circular RNA，circRNA）由单个RNA分子末端共价形成，无5′及3′核糖核苷酸末端结构，是调控转录后基因表达的新成员。近年研究表明，由不同位置基因组产生的参与转录及转录后基因表达调控的circRNA在人类免疫炎症反应中发挥着至关重要的作用，提示circRNA可能参与牙周炎症的调控过程。除此之外，已有文献报道circRNA还参与其他口腔疾病的生物学过程。文章就circRNA在免疫炎症反应中的作用及其在口腔疾病中的研究进展做一综述。     

生物材料表面固定粘附肽调节小鼠成骨细胞骨钙素的表达

目的：观察材料表面固定粘附肽RGD对小鼠成骨细胞骨钙素mRNA表达的影响。方法：采用自组装单层结构法含RGD的粘附肽PGDC共价结合在试件表面,建立RDGC和空白对照组。接种小鼠原代成骨细胞,分别收集培养第10,15,21天的细胞,提取总RNA,Northen印迹杂交法检测骨钙素mRNA的表达。结果：RGD组第15天即开始出现明显的骨钙素基因表达,对照组的基因表达出现在第21天。结论：材料表面固定RGD有促进骨钙素基因表达,影响小鼠成骨细胞分化的功能。     

脂质体介导反义hTR基因转染对腺样囊性癌细胞系SAcc83的影响

目的 检测SAcc83细胞系端粒酶活性并观察人端粒酶模板hTR封闭后细胞生长行为的改变及与凋亡的关系。方法TRAP-PCR-ELISA法检测SAcc83细胞系端粒酶活性,脂质体介导真核表达载体PBBS212-ahTR转染SAcc83,PCNA免疫组化染色以证实其增殖活性改变,TUNEL法及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果转染反义hTR后SAcc83细胞增殖能力明显下降,群体倍增时间延长,转染细胞约30天后死亡。各项凋亡检测均证明细胞凋亡的存在。结论hTR反义基因通过封闭端粒酶模板RNA抑制了端粒酶活性,并可能通过某种途径激活细胞的凋亡程序,这为以端粒酶为靶子治疗恶性肿瘤提供了方向。     

舌鳞癌组织长链非编码RNA的Ion Torrent高通量检测和分析

目的 研究舌鳞癌组织及其癌旁组织之间长链非编码RNA( long non-coding RNA,LncRNA)表达谱的差异,探讨LncRNA在基因调控中的作用. 方法 应用Ion Torrent高通量测序技术对1例新鲜舌鳞癌组织及其癌旁组织的LncRNA表达谱进行检测比较. 将测出的LncRNA序列和Ensemble 6. 8数据库中LncRNA的数据进行比对,用Bowtie2的方法挑出LncRNA的读序,然后用Cufflinks方法计算LncRNA每百万读序中来自某基因每千碱基长度的读序数( reads per kilo bases per million reads,RPKM). 截取癌症组织比癌旁组织RPKM值大于10和小于0. 1的LncRNA作为候选目标. 结果 纳入候选目标LncRNA的有52个,其中表达上调的有28个,表达下调的有24个. 结论 舌鳞癌组织和癌旁组织中存在差异表达的LncRNA分子,提示其靶基因有可能成为舌鳞癌基因治疗的潜在靶点.     

恒温核酸扩增方法的建立及其扩增产物的鉴定

目的建立一种快速、简便的恒温核酸扩增（ＮＡＳＢＡ）方法。方法用由ＡＭＶＲＴａｓｅ、ＲＮａｓｅＨ、Ｔ７ＲＮＡ聚合酶以及相应的缓冲成分组成的恒温扩增系统，对４例丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区ＲＮＡ序列进行扩增，并通过Ｎｏｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及限制性内切酶对扩增产物进行鉴定。结果经９０分钟或１８０分钟反应后均可扩增出预期大小的产物，放射自显影在预期位置出现阳性杂交信号。扩增产物经聚合酶链反应（ＰＣＲ）及内切酶ＳｍａⅠ消化后产生预期大小的１４４ｂｐ和３５９ｂｐ的片段，第１次ＰＣＲ产物经转录实验后与ＮＡＳＢＡ直接扩增的产物具有较好的同源性。结论ＮＡＳＢＡ法是一种快速简便的核酸扩增方法，此法扩增出的产物具有良好的特异性。