P2X家族受体在急性T淋巴细胞白血病小鼠腹腔巨噬细胞中的表达

本研究旨在探讨Notch1诱导的小鼠急性T淋巴细胞白血病模型中,腹腔巨噬细胞P2x家族受体的表达变化规律及其与巨噬细胞活化状态的相关性。建立小鼠急性T淋巴细胞白血病模型后,根据F4／80和CD206两个表面标记,用流式细胞术分别分选腹腔巨噬细胞以及CD206＋的M2样和CD206-的M1样腹腔巨噬细胞;用实时定量PCR法研究各亚群细胞中P2X家族受体的表达变化规律。结果表明：腹腔巨噬细胞、M2样和M1样腹腔巨噬细胞均表达除P2X5受体外的其他P2X家族受体,且表达强度中等。各受体的表达随白血病发展变化而有所不同,其中腹腔巨噬细胞中P2X1和P2X7受体的表达逐渐提高,P2X2和P2X3受体表达在白血病晚期显著降低,P2X4受体表达仅在中期有所降低,P2X6受体表达无显著变化。在白血病发展中期M2样和M1样腹腔巨噬细胞间P2X家族受体表达亦存在差异,其中M2样巨噬细胞P2X1受体的表达水平显著低于Mt样巨噬细胞,而M2样巨噬细胞P2X7受体表达水平显著高于M1样巨噬细胞,提示P2x家族受体表达与腹腔巨噬细胞活化状态相关。结论：白血病小鼠腹腔巨噬细胞P2x家族受体表达与白血病进程和巨噬细胞活化状态相关。本研究为深入探究巨噬细胞在白血病发展中的作用机制奠定基础。     

Notch1在牙根发育不同阶段牙髓中的表达

目的 研究牙根发育不同阶段的恒牙牙髓中Notch1蛋白的表达,探讨其在牙髓发育和成熟中的作用。方法 收集因正畸而拔除的人健康恒牙,拔除后立即取出牙髓,固定,石蜡包埋。按照牙根发育程度,分为3组:第1组（牙根刚开始发育）,牙根发育不足1/3,共10例;第2组（牙根发育中）,牙根发育1/3~2/3,共15例;第3组（牙根发育完成）,根尖孔闭合,共12例。采用SP法,对牙髓标本的石蜡切片进行Notch1的免疫组化染色。利用图像分析仪和Meta Morph/Cool snapfx/AX70软件系统对阳性染色部位的透光强度进行定量分析。应用SPSS 10.0软件包,采用方差分析进行统计学分析。结果 Notch1蛋白在恒牙牙根发育不同阶段的牙髓组织中均有表达,主要在牙髓成纤维细胞和血管内皮细胞的胞质内呈阳性着色;随着牙根的逐渐发育,Notch1在牙髓中的表达强度逐渐减弱（P<0.01）。结论 Notch1参与牙髓牙本质复合体的发育和成熟。     

阻断Notch1信号通路对慢性乙肝患者外周血T细胞免疫功能的影响

目的:观察阻断Notch1信号对慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)T-bet表达,Th1和Th2型细胞因子表达以及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞毒活性的影响,探讨Notch1信号通路在调节慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T细胞免疫功能的作用。方法:将慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC随机分为实验组,阴性对照组和空白对照组,分别给予抗-Notch1,IgG2b和RPMI-1640培养液,采用实时荧光定量PCR(real-time Q-PCR)检测各组T-bet mRNA的表达情况,采用ELISA法检测Th1型细胞因子IFN-γ,IL-2和Th2型细胞因子IL-4,IL-10的分泌水平,采用乳酸脱氢酶释放法检测CTL对靶细胞HepG2.2.15细胞毒活性的变化。结果:用抗体阻断Notch1信号通路后,慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC中T-bet mRNA表达增强,Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2浓度增高,而Th2型细胞因子IL-4和IL-10浓度减少,且CTL细胞毒活性明显增强,与阴性对照组和空白对照组相比差异有统计学意义(P均<0.01)。结论:阻断Notch1信号通路可增强慢性乙肝患者PBMC中T-bet mRNA表达,使Th1型细胞因子分泌增加,Th2型细胞因子分泌减少,且使CTL细胞毒活性增强,说明阻断Notch1信号通路可增强慢性乙肝患者T细胞免疫反应,Notch1信号通路可能参与慢性乙型病毒性肝炎患者机体的免疫耐受,且可能与T-bet有关。     

缺氧对滋养细胞Notch信号通路的影响

目的探讨缺氧条件下Notch信号通路在滋养细胞中的表达改变。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测二氯化钴(CoCl2)化学缺氧条件下人早孕绒毛滋养细胞株(the human first-trimester extravillous tropho-blast cell line,TEV-1)中Notch1及Jagged1 mRNA的表达情况。结果 (1)与正常对照组相比,缺氧条件下滋养细胞Notch1 mRNA表达量无明显变化(P>0.05)。(2)随着缺氧时间的延长,滋养细胞Jagged1 mRNA表达量逐渐降低,与正常对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧条件下滋养细胞Notch1及Jagged1表达平衡失调,可能参与滋养细胞功能调控。     

Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达水平及其意义

目的研究Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌临床病理特征的关系。方法采用Real—time PCR和Western blotting检测胃癌肿瘤组织和相应正常组织内Notchl和NUMB的表达。结果Notchl mRNA在胃癌中的平均表达水平是正常胃组织的1．67倍（P〈0．05）,且与肿瘤的分化程度和淋巴转移有关。NUMB mRNA在胃癌中的平均表达水平仅是正常胃组织的0．597倍（P〈0．05）,与肿瘤分化程度有关。Notchl和NUMB在胃癌组织中的表达呈负相关关系（r=-0．459,P〈0．05）。胃癌肿瘤组织中Notchl蛋白的相对含量为（0．348±0．133）,明显高于正常组织中Notchl蛋白的相对含量（0．208±0．140）（P〈0．05）,胃癌肿瘤组织中NUMB蛋白的相对含量为（0．490±0．440）,明显低于正常组织中NUMB蛋白的相对含量（0．746±0．390）（P〈0．05）。结论在胃癌中存在Notch信号转导通路的过度活化,Notchl的上调和NUMB的下调在胃癌发生、发展中可能发挥重要的作用。     

乙型肝炎患者外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白的表达

目的探讨CD4^＋T细胞Notch1蛋白在乙型肝炎病人发病机制中的作用。方法采用流式细胞仪检测23例慢性乙型肝炎患者、8例急性乙型肝炎患者和10例健康对照者的外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白表达水平,并应用荧光定量PCR方法测定上述研究对象血中HBV-DNA滴度。结果慢性乙型肝炎组外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白的平均百分率为（3.17±0.65）%,与急性乙型肝炎组（1.85±0.46）%和健康对照组（2.18±0.57）%比较都有极其显著差异（P〈0.001）;急性乙型肝炎组外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白的百分率与健康对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白的百分率与HBV-DNA滴度呈正相关。结论Notch1蛋白在慢性乙型肝炎患者外周血中表达增高,说明其可能参与乙型肝炎病情的发展及病毒的清除。     

Notch信号通路对人胰腺癌细胞NF—κB活性和侵袭能力的影响

背景：Notch信号通路在多种人类恶性肿瘤的发生、发展中起关键作用。研究显示Notch与NF—κB信号通路之间的交互作用可促进胰腺癌进展。目的：明确Notch信号通路对胰腺癌侵袭性的影响及其可能机制。方法：体外培养人胰腺癌细胞株BxPC3,以Notch-1siRNA下调其Notch-1表达,同时设置转染对照siRNA的阴性对照组和不予siRNA干扰的空白对照组。以Transwell细胞侵袭实验观察各组BxPC3细胞的侵袭能力,电泳迁移率变动分析（EMSA）检测NF—κB活性,蛋白质印迹法检测Notch-1、NF—KBp65、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP．9）蛋白表达。结果：经Notch-1siRNA干扰、Notch-1表达下调的BxPC3细胞,Transwell细胞侵袭实验穿膜细胞数较空白对照组和阴性对照组显著减少（26．5±1．3对78．5±2．4和76．7±2．2,P〈0．01）,NF—κB活性显著降低（P〈0．01）,NF-κB p65、VEGF、MMP-9蛋白表达显著下调（P〈0．05）。结论：Notch-1可通过激活NF—κB促进其下游基因VEGF、MMP-9表达,由此增强胰腺癌的侵袭性。     

Notch1和表皮生长因子受体在舌鳞癌及癌前病变中的表达

目的研究舌鳞癌（TSCC）及癌前病变中Notch1的表达,探讨其与表皮生长因子受体（EGFR）之间的潜在关系。方法免疫组化检测41例人TSCC、39例舌黏膜白斑（LP）和7例正常舌黏膜标本中Notch1和EGFR的表达。结果在正常舌黏膜和LP中,Notch1阳性表达主要位于角化层,部分颗粒层和棘层细胞也有表达,基底层无表达;而EGFR阳性表达主要位于基底层,棘层少见表达,颗粒层和角化层无表达。在TSCC中,Notch1阳性表达多见于癌巢中鳞状化生的角化细胞及类棘层细胞,周边细胞无表达;而EGFR阳性表达主要位于癌巢周边细胞,鳞状化生的角化细胞及类棘层细胞无表达。结论Notch1在舌黏膜上皮中促进细胞分化,在TSCC中起抑癌作用;而EGFR的表达可能抑制Notch1的表达,以维持细胞增殖,并促进TSCC发生发展。     

Notehl对人脐带问充质干细胞增殖、黏附及迁移影响的体外研究

目的探讨Notchl基因的重组腺病毒转染对人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）增殖、黏附及迁移能力的影响。方法按照不同腺病毒感染hUCMSCs分为实验组（Ad-Notchl）、阴性对照组（Ad—GFP）与空白对照组。以最佳MOI转染hUCMSCs,观察细胞形态变化以及GFP蛋白的表达。比较3组细胞增殖能力、细胞周期、黏附能力及迁移能力。WesternBolt检测3组细胞Notchl蛋白的表达水平。结果荧光下观察腺病毒成功感染细胞,阴性对照组和实验组均出现了GFP的表达,且随培养时间的延长表达量增高,可见光下观察实验组细胞增殖速度较快。实验组细胞的增殖能力（48、72、96h）、黏附能力（12、16、20h）及迁移能力均较阴性对照组及空白对照组增强（P〈0．05）。WesternBolt检测实验组细胞Notchl蛋白的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论Notchl能明显促进hUCMSCs的增殖、黏附和迁移。