新城疫病毒活疫苗的制备、活性和临床前安全性试验研究

目的：探讨新城疫病毒活疫苗喷雾吸入剂的简便制备方法及其安全性。方法：用ＳＰＦ种蛋传种、扩增病毒,经超速离心等方法提纯后制成疫苗：以血凝试验等方法测定其滴度和活性;按生物制品的要求进行安全性试验。结果：本疫苗能保持较高的生物学活性,并能达到临床前安全性的内控质量标准要求。结论：用本法制备供肿瘤临床试验用的ＮＤＶ活疫苗是可行的。     

瘤内注射新城鸡瘟病毒的抗癌效应及其机理研究

本文报道了瘤内注射新城鸡瘟病毒（ＮＤＶ）对６１５系小鼠乳腺癌（Ｃａ７６１）治疗作用，并初步探讨了其抗瘤机理。结果表明：单纯ＮＤＶ瘤内注射有一定抑瘤作用，抑瘤率达３５．３％；联合环磷酸胺化疗，可使其抑瘤率提高至７４．１％，明显优于化疗对照组（Ｐ＜００１），而该病毒腹腔注射则无效。治疗后带瘤小鼠的瘤细胞电镜显示：ＮＤＶ颗粒主要位于瘤细胞的胞浆内及胞膜上。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测细胞膜上有该病毒相关抗原的表达，其分子量分别是：８０ｋＤ、５５ｋＤ、４９ｋＤ、３８ｋＤ、２９ｋＤ。进一步以ＭＴＴ比色分析法证实：治疗后小鼠脾细胞的ＣＴＬ杀伤活性明显增强，且具有一定的肿瘤特异性，提示ＮＤＶ瘤内注射可能通过肿瘤细胞“体内异种化”而增强机体的主动特异性抗癌免疫反应。     

新城鸡瘟病毒治疗肉瘤180小鼠的实验研究

肉瘤１８０（Ｓ_１８０）细胞注入到小鼠腹腔中制得荷瘤鼠模型，用新城鸡瘟病毒（ＮＤＶ）Ｂ１株治疗，观察１个月。青年鼠（７周龄）生存率达７６．７％，而老龄鼠（１年龄）和未经治疗的青年鼠均１００％死亡。病毒在Ｓ１８０腹水中基本不繁殖。进一步观察发现，经ＮＤＶ治疗的荷瘤鼠，７周龄鼠血清干扰素增高、ＮＫ细胞活性增强，而１年龄鼠中则未观察到此现象。７周龄鼠治疗后第４天可检测出抗病毒抗体，第８天时效价达１：１６００。用ＮＤＶ体外感染巨噬细胞也可诱生出较高浓度干扰素。结果提示，干扰素增高、ＮＫ细胞活性增强可能与抗肿瘤疗效有关，而抗病毒抗体与疗效间的关系，尚需进一步研究。     

Efficacy of multivalent recombinant herpesvirus of turkey vaccines against high pathogenicity avian influenza,infectious bursal disease,and Newcastle disease viruses

Vaccines are an essential tool for the control of viral infections in domestic animals. We generated recombinant vector herpesvirus of turkeys (vHVT) vaccines expressing computationally optimized broadly reactive antigen (COBRA) H5 of avian influenza virus (AIV) alone (vHVT-AI) or in combination with virus protein 2 (VP2) of infectious bursal disease virus (IBDV) (vHVT-IBD-AI) or fusion (F) protein of Newcastle disease virus (NDV) (vHVT-ND-AI). In vaccinated chickens, all three vHVT vaccines provided 90–100% clinical protection against three divergent clades of high pathogenicity avian influenza viruses (HPAIVs), and significantly decreased number of birds and oral viral shedding titers at 2 days post-challenge compared to shams. Four weeks after vaccination, most vaccinated birds had H5 hemagglutination inhibition antibody titers, which significantly increased post-challenge. The vHVT-IBD-AI and vHVT-ND-AI vaccines provided 100% clinical protection against IBDVs and NDV, respectively. Our findings demonstrate that multivalent HVT vector vaccines were efficacious for simultaneous control of HPAIV and other viral infections.     

新城疫病毒诱导人自然杀伤细胞杀伤喉癌细胞株Hep-2的体外研究

目的研究新城疫病毒（NDV）和紫外线灭活的新城疫病毒（NDV-UV）在体外诱导人外周血自然杀伤细胞（NK）对喉癌细胞株Hep-2的杀伤作用。方法用淋巴细胞分离液从外周血中分离单个核细胞，经贴壁黏附法去除Mφ小，尼龙毛柱去除B细胞，补体裂解法去除T细胞，得到富集的NK细胞后，用NDV和NDV—UV分别诱导NK细胞16h作为效应细胞，Hep-2细胞作为靶细胞，然后用MTT法测定NK细胞杀瘤活性，并进一步比较NDV和NDV-UV对NK细胞杀瘤活性的影响。结果NDV和NDV—UV诱导的NK细胞对Hep-2细胞的杀伤率高于未诱导组（P〈0．01），而NDV诱导组的杀瘤率高于NDV—UV诱导组（P〈0．05），随着效应细胞数量增大，NK细胞杀瘤活性逐渐增强（p〈0．01）。结论NDV和NDV—UV能在体外诱导人外周血NK细胞，使之杀瘤活性增强，NDV的诱导作用较NDV-UV强。     

新城疫病毒HN基因构建的核酸疫苗抗肿瘤作用研究

目的 :探讨HN基因在NDV抗肿瘤上发挥的作用。方法 :以pVAX1为表达载体构建了含NDVHN基因的pVHN核酸疫苗 ,以脂质体介导方法在体外转染OS732细胞 72h后 ,用 3,5 二羟基甲苯法测定OS732细胞膜唾液酸含量的变化。 6周龄BALB/c鼠左后肢皮下接种 2× 10 6个S180肿瘤细胞 ,分别于肿瘤接种后的第 7天 (肿瘤直径为 2～ 3mm)和第 17天瘤内注射 10 0 μg核酸重组体 ,同时设pVAX1对照组和单纯荷瘤对照组。荷瘤鼠经治疗后框窦采血 ,分离血清 ,测定血清唾液酸含量。取脾 ,采用FACS方法测定淋巴细胞亚群数量的变化。结果 :pVHN体外转染OS732细胞后 ,能显著降低细胞表面唾液酸含量 (P <0 .0 5 )。pVHN应用于荷瘤鼠显著降低血清中唾液酸含量 (P <0 .0 5 ) ,引起CD8+ T淋巴细胞亚群数量的增加 (P <0 0 5 )。结论 :单独HN基因在体外转染能够降低肿瘤细胞表面唾液酸含量 ,体内表达后引起T淋巴细胞亚群数量改变。     

新城疫病毒对肿瘤细胞的杀伤及其作用机制研究

目的探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对肿瘤细胞的抑制机制及其体内抑瘤作用。方法采用基因组电泳法观察NDV感染对Hep-2肿瘤细胞基因组的影响。运用SDS-PAGE、Western blot等方法检测NDV感染对Hep-2肿瘤细胞内p53及Bcl-2蛋白表达量的影响。通过间接免疫荧光法检测NDV感染后其新城疫病毒HN基因在Hep-2肿瘤细胞表面的表达情况。另外,构建C57/BL小鼠荷H22模型,瘤内注射NDV,观察其对实体肿瘤的抑制作用,探讨NDV在动物模型体内所介导的抑瘤作用。结果NDV可致Hep-2肿瘤细胞的基因组断裂,电泳呈梯状条带。NDV感染能够上调p53的表达,且不影响Bcl-2蛋白的含量。间接免疫荧光实验显示,NDV感染Hep-2肿瘤细胞后可在其表面表达大量新城疫病毒HN蛋白。动物实验结果说明,NDV可抑制实体肿瘤生长。结论NDV可诱导Hep-2肿瘤细胞凋亡,且不受Bcl-2的影响;能够有效抑制体内实体肿瘤的生长。     

新城疫病毒长春株和四平株致细胞死亡方式的研究

目的：研究NDV长春株和四平株致细胞死亡的方式,方法：采用空斑试验、细胞抑制试验、琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法进行研究。结果：NDV长春株和四平株对鸡胚成纤维细胞（CEF）、BHK、HeLa,Hep-2,HCT和OS－732等肿瘤细胞产生明显的病变,而对人的羊膜细胞（Wish细胞）无明显影响。结论：长春株对肿瘤细胞的抑制作用强于四平株,长春株对肿瘤细胞的抑制不存在量效关系,只有量适剂量才引起最强的抑制作用,长春株和四平株在体外引起细胞死亡的途径不完全一致,长春株导致细胞死亡以凋亡为主,而四平株导致细胞死亡以坏死为主。     

肝螺杆菌感染对BALB/c小鼠免疫应答干扰的初步研究

[摘要] 目的 探讨肝螺杆菌（Helicobacter hepaticus，H.hepaticus）感染对小鼠骨髓源树突状细胞（DC）表面分子形态和机体免疫应答的干扰。方法 以H.hepaticus（ATCC 51450）灌饲SPF级BALB/c雄性小鼠，于末次接种后5个月体外分离培养骨髓DC，经粒细胞-单核细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素-4（IL-4），刺激DC增殖、分化，流式细胞仪分析DC细胞表面分子CD11c、CD40、CD80、MHCII的表达率。此基础上，用新城疫病毒（NDV）ZJ1株人工接种实验组和对照组小鼠，每周测定NDV血清抗体效价，比较抗体产生的差异。结果 实验组MHC II和CD40分子的表达率高于对照组。NDV抗体水平第1周实验组略低于对照组；第2至第5周内实验组小鼠的抗体水平均高于对照组，差异有显著性；第6周两组小鼠血清抗体均呈下降趋势，差异无显著性。结论 H.hepaticus感染对小鼠骨髓DC成熟有促进作用，能提高MHC II和CD40表达水平，可促进BALB/c小鼠产生抗NDV的抗体水平。