2-(3-硝基亚苄基)乙酰乙酸乙酯的合成

2- ( 3-硝基亚苄基 )乙酰乙酸乙酯 ( 1 ) [1] 是合成中轻度高血压治疗药物尼群地平 ( nitrendipine)的中间体[1] 。本文参考文献[1～ 3 ] ,以间硝基苯甲醛 ( 2 )和乙酰乙酸乙酯 ( 3)为原料 ,硫酸为催化剂合成 1 ,并对催化剂的加入顺序进行了探讨。A法 :先在 3中滴加硫酸 ,再加入 2 ,由于在 2的溶解过程中同时也将生成 1结晶 ,二者混合成为糊状物 ,导致反应不充分 ,后处理困难 ,收率低 ,产品质量差 ;B法 :先将 3与 2混合 ,再缓慢滴加硫酸 ,随着酸的加入醛很快溶解 ,接着产物结晶开始生成 ,结晶颗粒大 ,后处理容易 ,3及硫酸用量少 ,反应时间…     

玉屏风散对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜NF-κBp65、GATA-3表达的影响

目的通过研究变应性鼻炎大鼠鼻黏膜NF-κBp65、GATA-3表达的影响,探讨玉屏风散治疗变应性鼻炎的可能机制。方法 60只SD大鼠按体质量随机分为6组,每组10只,分别为正常组、模型组、治疗组(玉屏风散低、中、高剂量组)、对照组。除正常组外,其余的大鼠均建立卵清蛋白诱导的变应性鼻炎模型。分组给药干预1周。应用HE染色检测鼻黏膜组织结构变化,应用western-blot及Realtime PCR技术检测NF-κBp65、GATA-3在鼻黏膜组织中的表达。结果模型组鼻组织病理学表现以组织重塑、上皮细胞脱落、杯状细胞化生、组织水肿、大量嗜酸性粒细胞浸润为主;治疗组的表现以鼻黏膜存在组织重塑表现,鼻黏膜上皮细胞脱落、组织间质轻度水肿、固有层可见少量嗜酸性粒细胞浸润,两组比较,有统计学差异(P<0.05)。模型组鼻黏膜中NF-κBp65、GATA-3蛋白及其mRNA呈高表达变化;给予玉屏风散治疗后,NF-κBp65、GATA-3蛋白及其mRNA表达下降,经统计学比较,有显著性差异(P<0.05)。结论变应性鼻炎鼻黏膜存在组织重塑,玉屏风散可能通过下调NF-κBp65、GATA-3表达,发挥防治变应性鼻炎的效应。     

线粒体STAT3介导的抗氧化机制促进伯基特淋巴瘤化疗多药耐药

目的 探讨人伯基特淋巴瘤（BL）细胞株Namalwa^?化疗多药耐药的机制。方法 构建多药耐药的BL细胞株Namalwa^?作为研究模型,采用短串联重复序列法鉴定细胞,确定研究模型的可靠性。采用流式细胞仪检测Namalwa^?细胞内活性氧水平的变化;ATP法检测Namalwa^?细胞的化疗敏感性;Western blotting及免疫荧光法检测线粒体STAT3在Namalwa^?细胞及其亲本细胞中的表达水平。结果 多药耐药的Namalwa^?细胞短串联重复序列鉴定结果与亲本一致,并与ATCC数据库比对100%吻合,排除了其他细胞污染。参与活性氧水平调控的线粒体pSTAT3^s727在多药耐药的Namalwa^?细胞中高表达。多药耐药Namalwa^?细胞的活性氧水平低于亲本细胞。Namalwa^?细胞的化疗敏感性受细胞内活性氧水平调控,细胞内活性氧水平降低可增加化疗抗性,升高则可增加化疗敏感性。结论 线粒体pSTAT3^s727介导的抗氧化机制可促进BL化疗多药耐药。     

基于网络药理学的黄瑞香抗胃癌作用机制探讨及实验验证

目的 采用网络药理学方法预测黄瑞香发挥抗胃癌作用的潜在机制,并通过体外细胞实验进行初步验证。方法 利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）筛选黄瑞香的有效成分,通过Swiss Target Prediction数据库和PharmMapper数据库筛选获得黄瑞香活性成分的相关靶点。通过GeneCards及DisGeNET数据库检索获得胃癌疾病相关靶点。利用Cytoscape软件构建黄瑞香活性成分-靶点网络;通过STRING、Metascape数据库对成分和胃癌疾病交集靶点进行蛋白质相互作用（PPI）网络和基因本体（GO）注释及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。采用MTT实验考察黄瑞香异戊烯基黄酮成分构树黄酮醇F（broussoflavonol F）、daphnegiravone D、daphgiflavone C体外对胃癌MGC803细胞生长的影响,采用实时荧光定量PCR方法检测这3种异戊烯基黄酮类化合物作用48h后胃癌MGC803细胞表皮生长因子受体（EGFR）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和蛋白激酶B（Akt）基因的表达。结果 筛选得到黄瑞香70个活性成分,黄瑞香作用于胃癌的42个相关靶点,其中表皮生长因子受体（EGFR）、鼠肉瘤病毒癌基因同源物B1（BRAF）、Ⅰ类磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基α（PIK3CA）、酪氨酸激酶（MET）以及丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）等为核心靶点。KEGG富集分析发现黄瑞香作用于胃癌主要富集在癌症、PI3K/Akt以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等通路中。活性测试结果发现,异戊烯基黄酮成分构树黄酮醇F、daphnegiravone D、daphgiflavone C对胃癌MGC803细胞生长具有较好的抑制作用。同时,与对照组比较,构树黄酮醇F、daphnegiravone D、daphgiflavone C可显著抑制胃癌MGC803细胞EGFR、PI3K和Akt基因的表达（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 黄瑞香可能以异戊烯基黄酮为主要的抗胃癌活性成分,以EGFR、BRAF、PIKC3A、MET等蛋白为核心作用靶点,主要经I3K/Akt以及MAPK等相关信号通路发挥治疗胃癌的作用。     

黄芪甲苷调节PI3K/Akt/FoxO1通路抑制糖尿病大鼠肝糖异生

目的:探讨黄芪甲苷对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝损伤保护潜在机制及肝组织磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子1(FoxO1),磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)和葡萄糖6-磷酸酶(G6Pase)蛋白表达的影响。方法:6周高糖高脂饮食后,链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射(0.035 g·kg^-1)建立T2DM大鼠模型,随机分为正常组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组及二甲双胍组。黄芪甲苷低、中、高剂量组灌胃黄芪甲苷0.02,0.04,0.08 g·kg^-1·d^-1,二甲双胍组灌胃二甲双胍0.2 g·kg^-1·d^-1;给药8周后,于末次灌胃24 h禁食不禁水后处死,测血清肝生化指标,肝脏指数等;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理形态学变化;马松(Masson)染色观察纤维化程度;过碘酸希夫(PAS)染色反应观察细胞内糖原等变化;免疫组化及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肝中PI3K/Akt/FoxO1信号蛋白及PEPCK,G6Pase蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组肝脏指数显著升高(P<0.01),肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)的含量显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著降低(P<0.01),大鼠体质量显著减轻(P<0.01),PI3K/Akt/Fox O1信号减弱(P<0.01),PEPCK,G6Pase蛋白表达水平显著增强(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量组及二甲双胍组肝功能指标ALT,AST,TC,TG的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),大鼠体质量明显增加(P<0.05,P<0.01),肝组织Fox O1,PEPCK及G6Pase蛋白水平明显降低(P<0.05,P<0.01),Fox O1的磷酸化水平明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪甲苷可能通过调节PI3K/Akt/Fox O1信号通路抑制高脂高糖加小剂量STZ诱导T2DM肝糖异生,从而起到延缓T2DM大鼠肝脏损伤作用。     

调肝与健脾对节育器致人子宫异常出血症子宫内膜组织ERK1/2、PI_3K信号通路的影响差异

目的:探讨柴胡止血液对置器后子宫异常出血患者的影响机制。方法:原代培养置器后子宫异常出血患者的宫内膜组织,给含药血清后,分别采用western blot和ELISA的方法测定ERK1/2和PI3K磷酸化的水平。结果:4号组织的归脾汤组升高了PI3K磷酸化水平,P<0.05;1号组织的柴胡止血液组有升高ERK1/2磷酸化水平的趋势;3号组织的柴胡止血液组有升高ERK1/2磷酸化水平的趋势;5号组织的柴胡止血液组有升高PI3K磷酸化水平的趋势;2号组织的归脾汤组有升高ERK1/2磷酸化水平的趋势;4号组织的归脾汤组有升高ERK1/2和PI3K磷酸化水平的趋势。结论:对于出血量大的肝旺患者,柴胡止血液可能通过激活ERK1/2通路来增强血管的收缩从而达到止血的目的;对于出血量较小的肝旺患者证,柴止血液可能通过激活PI3K通路来调节组织抗炎作用,从而达到治疗效果。     

肉苁蓉抗运动性疲劳机制的实验研究

目的观察肉苁蓉对负重游泳小鼠肝脏乳酸脱氢酶同工酶、糖原及一氧化氮合酶3（NOS3）的影响，探讨其抗运动性疲劳的作用机制。方法将昆明种小鼠随机分为正常对照组、运动对照组和肉苁蓉实验组。正常对照组和运动对照组每只每日灌胃生理盐水0．2mL，肉苁蓉实验组每只每日灌胃肉苁蓉水煎液0．2mL（3g／kg），共15d；末次给药1h后，运动对照组和肉苁蓉实验组小鼠尾部负重5％游泳90min，10h后连同正常对照组小鼠处死取肝脏，一部分用中性甲醛固定制备石蜡切片，一部分制成肝细胞匀浆检测乳酸脱氢酶活性；常规腿染色观察肝脏组织结构，糖原染色法显示肝脏糖原，S-P免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏NOS3的表达。结果运动对照组与正常对照组比较，乳酸脱氢酶活性高（P〈0．05），肝脏结构损伤严重，糖原含量减少，NOS3表达下降（P〈0．05）；肉苁蓉实验组与运动对照组比较，乳酸脱氢酶活性降低，主要是乳酸脱氢酶5（LDH5）下降，肝小叶结构较清晰，糖原丰富，NOS3表达上调（P〈0．05）。结论肉苁蓉可降低LDH5活性，上调NOS3的表达，促进肝糖原合成，发挥肝脏保护和促进体能恢复作用。     

三七3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因的克隆和生物信息学分析

目的克隆三七总皂苷甲羟戊酸合成途径中的1个关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A reductase,HMGR)基因,为进一步研究HMGR蛋白的功能及开展三七皂苷的合成生物学研究奠定基础。方法根据NCBI上已公布的同属人参的HMGR基因全长序列(登录号GU565097.1)设计特异性引物。利用RT-PCR技术,以三七愈伤组织总RNA反转录的cDNA为模板扩增基因片段;并对其编码的蛋白进行生物信息学预测和基因表达分析。结果序列分析表明,获得的三七HMGR(命名为PnHMGR)基因的cDNA序列大小为1 893 bp,该序列与人参、刺五加和杜仲中HMGR基因的一致性分别达到98%、93%、80%,且含有大小为1 725 bp的开放阅读框,经Genbank查询为一新的cDNA。生物信息学预测PnHMGR基因编码蛋白包含2个跨膜区,不含信号肽,具有HMGR催化作用的活性中心结构域。实时荧光定量PCR检测到PnHMGR基因在三七细胞生长30 d表达量最高。结论首次从药用植物三七中克隆得到HMGR基因的编码区序列,为进一步鉴定PnHMGR的功能和开展三七皂苷的合成生物学研究奠定了基础。     

丹参酮ⅡA在3T3-L1脂肪细胞中促进脂联素的组装(英文)

目的:研究丹参酮IIA对3T3-L1脂肪细胞中脂联素表达和蛋白多聚化的作用。方法:用油红染色鉴定3T3-L1脂肪细胞的分化状态。用Real-time PCR检测基因的mRNA表达水平。用2%15%梯度SDS-PAGE及Western blot检测脂联素三种聚体。用siRNA技术进行基因沉默。结果:本研究发现传统中药丹参中的萘醌二萜类成分丹参酮IIA在脂肪细胞中激活AMPK通路,同时抑制脂肪细胞分化,降低脂联素的表达。而在前体脂肪细胞分化过程或成熟脂肪细胞中加入丹参酮IIA进行处理,均明显促进脂联素的多聚化,增加高聚体的浓度。抑制AMPK通路能够解除丹参酮IIA对脂联素的作用。结论:丹参酮IIA通过激活AMPK在3T3-L1脂肪细胞中促进脂联素的组装。     

Didymin attenuates doxorubicin-induced cardiotoxicity by inhibiting oxidative stress

Objective: This study was designed to investigate the protective effects of didymin (Did) on doxorubicin (DOX)-induced cardiotoxicity. Methods: After pretreatment with Did (2, 4, 8 mg/kg intraperitoneal i.p.) for 7 d, the male C57 mice were injected with single dose of DOX (20 mg/kg i.p.). The cardioprotective effect of Did was observed on the 7th day after DOX treatment. Results: DOX delayed body growth and caused cardiac tissue injury, oxidative stress, and mitochondrial dysfunction. Similar experiments in H9C2 cardiomyocytes showed that DOX reduced cell viability, increased generation of reactive oxygen species (ROS) and fragmentation of DNA, decreased mitochondrial membrane potential, and induced cardiomyocyte apoptosis. However, all of these adverse effects were suppressed by Did pretreatment. Did increased protein expression of glutamate-L-cysteine ligase catalytic subunit (GCL), heme oxygenase 1 (HO-1), and nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2). Besides, Did also induced activation of PI3K/AKT. Conclusion: These findings indicated Did prevented DOX-induced cardiac injury and apoptosis via activating PI3K/AKT/Nrf2 signaling pathway.