反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体pDOR-Bcl-2 cDNA.以脂质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞SGC7901,并经C418筛选,从2×10~5细胞中筛选出大约150个抗性克隆,转导率大于1‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而建立了Bcl-2表达阻断的胃癌细胞株,我们命名为7901anBcl-2 cells.通过Southern印迹法、Northern印迹法、Western印迹法检测显示,转导株与非转导株均有Bcl-2 cDNA的表达,但转导株Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显低于非转导株.说明在胃癌细胞中Bcl-2基因处于高表达状态,通过真核表达载体介导的转染,反义Bcl-2可成功地导入胃癌细胞,并有效地阻断Bcl-2表达.     

黏膜上皮细胞培养模型及其在给药系统评价中的应用

 目的 综述黏膜上皮细胞培养模型的建立、评价、实验方法及在给药系统中的应用,为此方面的研究工作提供参考。方法 查阅、总结近年来国内外有关文献。结果 黏膜上皮细胞培养模型可在体外有效地研究药物及制剂的摄取、代谢、排放、转运以及生物黏附等过程。结论 黏膜上皮细胞培养模型被广泛用于多种给药系统研究中。     

药用植物培养高产细胞系的选育

通过植物发酵培养获得有用的药用植物次生代谢物是解决药用植物资源问题的有效手段。然而，大多数有用的次生物质在植物细胞中含量极低。为此，在工业化生产中首先需要适时地对植物细胞进行选育和改良，以解决提高植物细胞中次生物质含量问题。本文对药用植物培养高产细胞系选育方法和研究作了概述，针对高产细胞系筛选、诱变育种和基因转移关键共性技术研究及对解决高产细胞系不稳定性问题进行了讨论。     

食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛甲基化的意义

目的研究食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛甲基化与其mRNA表达的关系。方法选取4种食管癌细胞系OE21，OE19，OE33和TE7，经重亚硫酸钠处理后，采用限制性酶切图谱分析(COBRA)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，在DNA甲基转移酶抑制剂5-氮2^ -脱氧胞苷(5-aza-CdR)处理前后，对其MT-3基因CpG岛的甲基化情况及mRNA的表达情况进行对比研究。结果4种食管癌细胞系的MT-3基因均存在不同程度的CpG岛超甲基化。经5-aza-CdR处理后，超甲基化状态解除，mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P=0.002)。结论食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛的超甲基化可抑制其mRNA表达。当其超甲基化解除后，MT-3基因的mRNA表达水平也会相应升高。     

人端粒酶逆转录亚单位(hTERT)基因特异性siRNA对MCF-7细胞生长抑制作用的研究

目的 研究人端粒酶逆转录亚单位（hTERT）特异性siRNA对MCF-7细胞体外生长及体内肿瘤形成能力的抑制作用。方法 设计并化学合成针对hTERT的siRNA，用脂质体转染法将其导入MCF-7细胞内，通过软琼脂克隆形成试验及接种裸鼠的肿瘤形成实验，观察hTERT-siRNA对人乳腺癌MCF-7细胞体外及体内的生长抑制作用。结果 软琼脂克隆形成试验显示，hTERT-siRNA转染的MCF-7细胞克隆形成数量明显少于对照组，抑制率达到84．1％。裸鼠体内实验结果显示，hTERT-siRNA转染组肿瘤生长速度也明显慢于对照组。结论 hTERT-siRNA在体内外均显示可以有效、特异地抑制肿瘤细胞的生长。     

泰索帝对人鼻咽癌细胞系放射增敏作用机制的初步研究

泰索帝(Taxotere)的抗瘤作用主要是促进微管蛋白聚合成微管并抑制其解聚，使细胞周期阻滞于G2 M期导致细胞死亡。有研究表明泰索帝对人鼻咽癌细胞系CNE-1有明显的放射增敏作用。笔者分析了其放射增敏作用是否有细胞周期依赖性，并观察它能否增强射线对CNE-1细胞凋亡的诱导作用。     

放射诱导胃癌细胞的凋亡及其相关基因的研究

目的观察放射诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的作用，并进一步研究bcl-2基因及家族、bax基因、p53基因在此过程中的作用。方法用不同剂量的9 MeV β线照射SGC-7901细胞，观察细胞在受照后的不同时间生长情况。电子透射电镜下观察细胞形态变化。琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带变化。流式细胞仪检测受照前后细胞周期及凋亡率的变化。免疫细胞化学法检测受照前后bcl-2、bax、p53基因的表达水平。结果单次剂量照射后，SGC-7901细胞凋亡率与时间、剂量有相关性。在放射诱导SGC-7901细胞凋亡的过程中，bcl-2基因表达水平下降，bax基因表达水平升高，而p53基因表达水平无变化。结论放射能够诱导胃癌细胞株SGC-7901凋亡，凋亡率在72h达高峰。bcl-2及bax基因参与了放射诱导凋亡的调控。细胞凋亡主要是通过p53基因非依赖途径。     

AFP启动子调控PNP载体的构建及分析

目的分别构建三种启动子调控的大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)基因表达载体,检测、分析三者的表达差异.方法构建三种启动子调控的PNP基因表达载体.将三个PNP基因载体转染不同细胞株,检测PNP基因在各细胞株中表达,分析三者表达的特点.结果AF 0.3和[HRE]AF调控的PNP基因在AFP阳性肝癌细胞中实现了靶向性表达,而且后者在AFP阴性肝癌细胞中也实现了靶向性表达.结论三种PNP基因表达载体的成功构建为利用PNP/MeP-dR系统进行肝癌的靶向性基因治疗打下坚实的基础.     

蛋白激酶C与K562/A02细胞多药耐药相关性的研究

目的 探讨蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)在K562／A02细胞多药耐药的产生及其逆转中的作用。方法 用放射免疫法检测了耐药细胞株K562／A02及其敏感株K562的静息PKC活性水平，并观察了柔红霉素(daunomycin，DNR)以及耐药调节剂粉防己碱(tetrandrine．Tet)、屈洛昔芬(droloxifene，Drol)单独或联合应用后细胞PKC活性的变化。结果 静息状态下耐药细胞株K562／A02的PKC活性显著高于敏感株K362，有效调节浓度的Tet、Drol单独作用于K562、K562／A02细胞均可显著下调其PKC活性，联合应用有显著协同性。1μg／mLDNR可显著下调K562细胞的PKC活性，部分下调K562／A02细胞的PKC活性，有效调节浓度的Tet、Drol单独或联合应用均可加强其作用。结论 PKC参与K562／A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的形成，Tet、Drol逆转K562／A02细胞的MDR可能与下调其PKC活性有关。     

Clinical Features and Surgical Treatment of A-pattern Exotropia

IntroductionAnA鄄patternexotropiashowssignificantlymoreexodeviationindowngazeversusupgaze,inwhichthechangeofbinocularalignmentresemblesthealphaberA.Accordingtopublishedreports[1～4],A鄄patternexotropiaisviewedastheleasttypeofAandVpatterns.However,thepr鄄evalenceofA鄄patternexotropiaratherincreasedinourclinicalstudies[5],inwhichparticularattentionwaspaidtoobservethedeviationindownwardgazeandassesssuperiorobliquefunction.Accordingly,clinicalcharacteristics,surgicaltreatmentandtreatmentoutcome…