PHF19对宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨PHF19基因对宫颈癌细胞株Hela和HCC94的增殖、侵袭和迁移的影响.方法 培养人宫颈癌Hela细胞和HCC94细胞,用siRNA敲低PHF19基因的表达.RT-qPCR检测不同组细胞中PHF19基因mRNA水平的表达情况.采用CCK-8检测细胞的增殖情况.采用细胞划痕、Transwell实验观察PHF1...     

应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的：探究原肌球蛋白3（tropomyosin alpha-3 chain,TPM3）在大鼠胰腺癌细胞中对其侵袭转移能力的影响并初步阐述其可能的分子机制。方法：（1）将70只大鼠随机分为手术组40只[将7,12-二甲基苯并蒽（7,12-dimethyl-1,2-benzanthracene,DMBA]植入大鼠胰腺被膜下后荷包缝合被膜）,假手术组15只（只对胰腺进行荷包缝合而后关腹,不置入DMBA）,阴性对照组15只（不做任何处理）,建立大鼠胰腺癌模型。（2）通过组织免疫组化染色的方法对差异蛋白TPM3进行验证。（3）通过机械分离和酶阶段消化法分离胰腺癌组织的方法获取大鼠胰腺癌细胞,体外传代培养获得纯度较高的细胞后,应用siRNA敲低大鼠胰腺癌细胞中TPM3基因的表达;通过RT-PCR技术检测其沉默效果。（4）通过Transwell实验和平板克隆实验分别对细胞的侵袭、迁移能力及生长增殖能力进行观察。结果：（1）经病理验证模型组有37.83%（14/37）形成胰腺癌,证明大鼠胰腺癌模型建立成功。（2）免疫组化验证胰腺癌组织中TPM3阳性率（92.8%）明显高于正常胰腺组织（6.7%）。（3）RT-PCR结果显示,转染TPM3-siRNA的细胞中TPM3的表达量（0.31±0.02）明显低于其余各组,脂质体组（0.45±0.02）,阴性对照组（0.45±0.02）,空白对照组（0.43±0.02）（P＜0.05）,其余各组之间TPM3表达量差异无统计学意义（P ＞0.05）。（4）转染TPM3-siRNA的细胞其侵袭[（161.63±4.94）个]、迁移能力[（206.87±4.21）个]及生长增殖能力[（51.5±2.327）个]较对照组明显降低[分别为（39.7±1.40）个,（67.27±1.76）个,（5.900±0.767）个]（P＜0.05）。结论：体外化学合成的TPM3-siRNA可有效的抑制大鼠胰腺细胞TPM3的表达,TPM3表达降低后其侵袭能力、迁移能力及生长增殖能力下降。     

基于TGF-β/smad信号通路探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌AGS细胞上皮间质转化过程的影响＊

目的 探究七方胃痛颗粒对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人胃腺癌细胞AGS上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition， EMT）过程的影响及其潜在分子机制。方法 为了探究七方胃痛颗粒对TGF-β1处理的AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响，实验分为四组：AGS细胞对照组，EMT空白模型组，中药血清组，TGF-β/smad通路抑制剂组，分别利用CCK8、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。此外，通过免疫荧光检测EMT过程中相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3）的表达水平。结果 与AGS细胞对照组相比，TGF-β1诱导EMT过程，显著促进AGS细胞增殖、迁移和侵袭，下调了E-cadherin的表达，上调了N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3的表达；与EMT空白模型组相比，中药血清组、TGF-β/smad通路抑制剂组显著抑制了细胞增殖、迁移和侵袭，上调了E-cadherin的表达，降低了N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3的表达。结论 七方胃痛颗粒通过调控TGF-β/smad信号通路从而抑制人胃腺癌AGS细胞的EMT过程。     

miR-21调控STAT3信号通路对肾母细胞瘤细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨miR-21调控STAT3信号通路来对肾母细胞瘤细胞的增殖及迁移产生影响.方法 RT-PCR测定人肾母细胞瘤组织以及癌旁组织中miR-21的表达.将人肾母细胞瘤细胞分为空白组、si-miR-21组(转染si-miR-21)和simiR-21 NC组(转染si-microRNA-21 NC),Western b...     

微小 RNA?204?3p通过靶向调控 Krüppel样因子 6对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨微小 RNA?204?3p(miR?204?3p)对高糖诱导小鼠足细胞 MPC5损伤的保护作用及其分子机制。方法采用高糖(30 mmol/L D?葡萄糖)处理 MPC5细胞。实时定量 PCR(qPCR)检测细胞中 miR?204?3p与锌指蛋白 Krüppel样因子 6(KLF6) mRNA水平。 MPC5细胞分为 NG组(正常对照)HG组(高糖刺激)HG+miR?204?3p组、 HG+miR?NC组、 HG+si?KLF6组、 HG+si? NC组, HG+miR?204?3p+pcDNA?KLF6组和HG+m,iR?204?3p+pcDNA组,。蛋白质印迹法(Western Blot)检测肌动蛋白微丝偶联蛋白(synaptopodin)、结蛋白(desmin)、 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白(Bax)与活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(cleaved?caspase?3)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡,生物学信息预测和双荧光素酶报告基因分析 miR?204? 3p和 KLF6的靶向关系。结果与正常对照相比,高糖可显著降低 MPC5细胞中 miR?204?3p表达量［(0.41±0.04)比(1.02± 0.08)］上调 KLF6 mRNA［(2.86±0.27)比(1.03±0.08)］和蛋白［(0.89±0.08)比(0.46±0.04)］水平,还可上调 KLF6、desmin［(0.81± 0.07)比(,0.34±0.03)］、 Bax、cleaved?caspase?3蛋白表达及细胞凋亡率［(22.46±2.08)%比(5.26±0.64)%］下调 synaptopodin蛋白［(0.34±0.03)比(0.76±0.07)］及 Bcl?2蛋白表达量(P＜0.05)。与 HG+miR?NC组比较, HG+miR?204?3p组明,显提高 synaptopodin［(0.67±0.06)比(0.32±0.03)］及 Bcl?2蛋白水平,降低 desmin［(0.41±0.04)比(0.83±0.08)］、 Bax、cleaved?caspase?3蛋白水平及细胞凋亡率［(11.25±1.65)%比(24.58±2.47)%］(P＜0.05)。与 HG+si?NC组比较, HG+si?KLF6组明显提高 synaptopodin［(0.62±0.06)比(0.28±0.03)］及 Bcl?2蛋白水平,降低 desmin［(0.49±0.05)比(0.86±0.08)］、 Bax蛋白水平及细胞凋亡率［(14.69±1.87)%比(25.47±2.68)%］(P＜0.05)。 miR?204?3p直接靶向 KLF6。与 HG+miR?204?3p+pcDNA组比较, HG+miR?204?3p+pcDNA?KLF6组显著增加高糖刺激小鼠肾脏足 MPC5细胞中 KLF6、desmin［(0.68±0.06)比(0.36±0.04)］、 Bax蛋白表达量和细胞凋亡率［(18.41±1.67)%比(11.05±1.02)%］,显著减少 synaptopodin蛋白［(0.38±0.03)比(0.69±0.07)］和 Bcl?2蛋白表达量(P＜0.05)。结论 miR?204?3p通过直接靶向 KLF6抑制高糖刺激的足细胞凋亡,保护细胞损伤。     

汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移

目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响。方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40μmol·L-1的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40μmol·L-1)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P0.05,P0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P0.05,P0.01)。结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关。     

九节龙皂苷Ⅰ对胶质瘤U87细胞侵袭和迁移的影响

目的 观察九节龙皂苷Ⅰ(从九节龙全草中萃取)对胶质瘤U87细胞体外侵袭、迁移等生物学行为的影响及作用机制的探讨.方法 体外培养U87细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测胶质瘤U87细胞经不同浓度九节龙皂苷Ⅰ作用24、48、72 h后增殖率的变化;细胞划痕实验观察九节龙皂苷Ⅰ对U87细胞移动能力的影响;Transwell侵袭转移模型评价九节龙皂苷Ⅰ对U87细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱法分析九节龙皂苷Ⅰ对U87细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP)活性的影响.结果 MTT法显示一定浓度的九节龙皂苷Ⅰ可抑制U87细胞生长,并随着浓度增加和作用时间延长而明显增加(P＜0.05);与对照组比较,经九节龙皂苷Ⅰ作用后U87细胞迁移和侵袭能力明显降低,MMP-2分泌减少.结论 九节龙皂苷Ⅰ可有效抑制脑胶质瘤U87细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与九节龙皂苷Ⅰ降低细胞MMP-2活性相关.     

沉默N-cadherin对人牙髓干细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨沉默N-cadherin对人牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）增殖和迁移能力的影响,为基于DPSCs的牙髓再生提供实验依据。方法采用N-cadherin sh RNA慢病毒转染DPSCs,q RT-PCR、Western blot检测N-cadherin的表达水平,验证沉默效率。实验分为阴性对照组（sh RNA-NC）和N-cadherin sh RNA沉默组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移能力。结果N-cadherin sh RNA可显著降低DPSCs的N-cadherin m RNA和蛋白的表达水平（P<0.001）。N-cadherin sh RNA组细胞增殖活性分别在细胞接种的第3、4天高于sh RNA-NC组,第6～8天低于sh RNA-NC组,差异均具有统计学意义（P<0.05）;在第3天时,N-cadherin sh RNA组处于S期和G2期的细胞比例大于sh RNA-NC组（P<0.05）;在第6天时,N-cadherin sh RNA...