HPV_(16)E7-HSP_(70)融合表达质粒的构建及鉴定

采用分子克隆技术 ,首先将 HSP70 基因片段克隆到真核表达载体 pc DNA3 .1ˉ上 ,获得 pc DNA-HSP重组质粒 ,然后采用 PCR扩增技术 ,定点突变编码 HPV1 6 E7蛋白 C末端锌指结构的基因序列 ,将该突变的 E7基因插入 pc DNA-HSP重组质粒 ,通过粘端连接的方式构建 pcd-HPV1 6 E7-HSP70 融合表达质粒 ,最后通过限制性内切酶酶切、PCR和 DNA测序等技术鉴定。结果显示 ,重组融合表达质粒经酶切、PCR和 DNA测序证明其突变位点、碱基及阅读框架均准确无误。     

淋球菌膜蛋白疫苗的研究

目的设计淋球菌膜蛋白疫苗并构建原核表达系统,测定表达蛋白的免疫活性.方法PCR扩增淋球菌膜蛋白(PIA)基因片段,构建重组质粒,重组质粒宿主菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE分析PIA的表达情况.淋球菌标准株免疫BALB/c小鼠,体外凝集检测动物血清的免疫效果及ELISA法检测PIA的免疫活性.结果成功构建表达PIA蛋白的重组质粒,SDS-PAGE电泳图上显示1条相对分子量(Mr)约为40KDa的新生条带,能与免疫血清发生特异性结合反应.结论淋球菌膜蛋白疫苗原核表达系统的设计和构建正确,表达蛋白PIA具有免疫活性,为淋病疫苗的开发奠定了基础.     

连续消毒中大肠杆菌O157:H7对碘伏抵抗力的变化及其与质粒pO157关系的研究

[目的]研究分析在连续消毒中大肠杆菌O157：H7对碘伏抵抗力变化及其与质粒pO157关系。[方法]用碘伏连续消毒6株大肠杆菌O157：H7 10代，对比消毒前后试验菌对该消毒剂的抵抗力、质粒图谱以及质粒酶切图谱，用SDS-高温法消除原始菌与连续消毒后试验菌的质粒。[结果]连续消毒10代后，试验菌对碘伏的抵抗力增加；试验菌的质粒图谱以及质粒pO157的Cal Ⅰ酶切图谱均无明显变化；消除原始菌的小质粒后，细菌对消毒剂的抵抗力不变，消除原始菌的大质粒和连续消毒后试验菌的质粒后，试验菌对碘伏的抵抗力增加。[结论]结果提示，连续消毒会使试验菌对碘伏的抵抗力增加，抵抗力增加的原因可能与质粒pO157无直接关系。     

阴沟肠杆菌质粒型AmpC酶基因的研究

目的调查阴沟肠杆菌质粒型AmpC酶基因的流行状况及基因型。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法,对44株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感试验,PCR方法检测DHA和ACT型AmpC酶基因。结果44株阴沟肠杆菌呈多重耐药;36株质粒AmpC酶基因阳性(81.8%),DHA和ACT-1基因阳性率分别为11.4%、79.5%,而且3株阴沟肠杆菌同时携带DHA和ACT-1基因。结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重、质粒AmpC酶基因携带率高;阴沟肠杆菌中检出ACT-1基因为国内首次报道。     

志贺菌质粒图谱及耐药谱分析

目的了解深圳市龙岗区志贺菌耐药及质粒谱分布情况。方法对分离来自全区各镇医院的70株志贺菌流行株应用纸片扩散法测定细菌对14种抗生素的敏感性,并采用Kado法进行质粒抽提。结果龙岗区志贺菌耐药情况严重,多重耐药普遍(57.1%),耐药谱型分散,计有36种耐药谱型;共检出8种不同相对分子质量的质粒,120和140 Md单质粒检出率较高,分别为15.7%和54.28%;质粒谱型有12种,但以120和140 Md单质粒谱型为主,合计占69.98%。结论将耐药谱型与质粒谱型进行比较,具有相同质粒谱型的菌株,其耐药谱型可相同,亦可不同,两者关系有待进一步探讨。结合文献报道,估计120 Md是志贺菌毒力质粒,并推测140 Md是否为该地区的R质粒。     

60株肺炎克雷伯菌多重耐药性及主要耐药基因的研究

目的：了解临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及主要耐药基因存在状况。方法：采用Micmsean微生物鉴定仪，微量肉汤稀释法测定肺炎克雷伯菌对21种抗生素的敏感性。采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术分析超广谱B内酰氨酶(ESBLs)，质粒介导的AmpC酶和氨基糖苷类修饰酶基因型。结果：肺炎克雷伯菌对亚胺培南全部敏感，对其他抗生素均有不同程度的耐药。60株全部扩增出TEM基因，有25株检出CTX-M-I群基因，有54株扩增出DHA基因，59株检出共3种氨基糖苷类修饰酶基因。且有22株同时携带2～6种耐药基因。对其中4株细菌进行基因型测序，证实CTX-M-I群扩增产物均为CTX-M-3；DHA扩增产物均为DHA-1；氨基糖苷类修饰酶基因分别为aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-I和ant(3″)-I。其中CTX-M-3(AY635141)、DHA-1(AY635140)已注册GenBank(括号内为GenBank注册号)。结论：临床分离的肺炎克雷伯菌为多重耐药菌，同时存在2～6种耐药基因。     

以减毒沙门菌将重组细胞因子导向免疫系统的新免疫疗法

作者用减毒沙门菌作为编码白细胞介素4(IL-4)和IL-18的原核表达质粒传递系统，并评估其在不同实验模型中调节免疫应答的能力。     

多重PCR技术检测医院感染大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因型别

目的了解我地区大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌携带质粒介导AmpC酶的情况及基因型别. 方法用头孢西丁耐药表型筛选阳性可疑菌株,提取耐药质粒,然后采用多重PCR技术检测是否存在质粒介导的AmpC 基因及其基因型别;并对PCR产物进行测序. 结果 7株头孢西丁耐药的大肠埃希菌多重PCR均为阴性,4株肺炎克雷伯菌中3株多重PCR阳性,测序结果均为DHA-1型质粒AmpC酶. 结论多重PCR技术是一种灵敏、特异、快速的检测质粒AmpC酶及其基因型别的好方法;采用该方法在我地区首次检测出产DHA-1型质粒AmpC酶的肺炎克雷伯菌.     

pLKO.1-SOCS3-siRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的:构建人类SOCS3的慢病毒表达载体pLKO.1-SOCS3-siRNA.方法:设计以SOCS3为靶标的siRNA并克隆进入pLKO.1载体,用基因测序进行重组克隆验证.结果:PCR检测证实siRNA插入pLKO.1质粒,测序分析证实插入序列正确.结论:成功构建SOCS3基因的siRNA载体,为研究SOCS3基因对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响提供了稳定转染的骨架载体.