谷氨酸脱羧酶抗体检测在2型糖尿病早期诊断中的意义

目的探讨谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)检测在2型糖尿病患者早期诊断中的意义。方法比较2型糖尿病患者GAD-Ab阳性组12例与阴性组86例的临床特征、体重指数、C肽、糖化血红蛋白等指标。结果GAD-Ab阳性组发病年龄低于阴性组,空腹及餐后2 h C肽值较低,使用胰岛素者比例较高,酮症酸中毒发生率高。结论检测2型糖尿病患者的GAD-Ab可帮助临床上早期发现迟发自身免疫糖尿病病人,尽早采用胰岛素治疗,对保护残存的胰岛功能有重要意义。     

酶活性法测定GAD抗体及其初步临床应用

目的建立测定谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）抗体的方法，以探讨该抗体对胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）的预测、早期诊断及其发病机制研究的意义。方法用专用酶反应试管建立放射性同位素底物测定ＧＡＤ活性的分析方法。结果底物浓度为４ｍｍｏｌ／ｍｌ（３７ｋＢｑ）时，酶活性测定在一定浓度范围内剂量效应呈直线关系（ｒ＝０９８９）。结合免疫沉淀与酶活性分析，建立了免疫沉淀酶活性分析测定ＧＡＤ抗体的方法，２份ＩＤＤＭ患者ＧＡＤ抗体阳性血清与酶活性免疫沉淀指数存在剂量效应关系。用免疫沉淀酶法测定１５例正常人及２０例病程１年以内的ＩＤＤＭ患者血清，两组酶活性免疫沉淀指数分别为０１９３±００８７和０３８１±０１２１，差异有显著性（Ｐ＜００１）。按照超过正常人组免疫沉淀指数ｘ＋２ｓ为阳性区分，２０例ＩＤＤＭ患者血清中ＧＡＤ抗体阳性９例，占４５％。结论该方法简单，能直接反映酶活性的改变，无需高纯度的ＧＡＤ，特别适用于刚开始从事ＧＡＤ抗体研究的实验室及阳性血清筛查。     

新生期大白鼠皮下注射谷氨酸单钠对成年后下丘脑α-促黑素细胞激素神经元免疫反应性的影响

本文用免疫组化方法研究了新生期大白鼠注射谷氨酸单钠(MSG)对成年后下丘脑α-促黑素细胞激素(α-MSH)免疫反应神经元的影响,结果显示MSG处理以后下丘脑弓状核区α-MSII免疫反应神经元减少甚至完全消失,但不影响下丘脑背外侧区的α-MSH神经元群。文中还讨论了这两群α-MSH神经元的生理作用。     

人参银杏复方制剂对缺氧复氧后大鼠海马CA1区GABA、Glu表达的影响

目的：探讨人参银杏复方制剂对缺氧复氧后海马CAI区神经元的保护作用机制。方法：应用低压氧舱仿海拔8000米高空缺氧模型，采用免疫组织化学及免疫荧光方法并结合图像分析等技术，观察预防性应用人参银杏复方制剂对缺氧24h复氧0h、24h时段海马CAI区GABA、Glu表达的影响。结果：缺氧24h复氧卟组海马CAI区GABA免疫反应阳性神经元数量、Glu免疫反应阳性神经元荧光强度分别较常氧对照组减少和减弱，复氧24h后上述变化更加明显。预防性应用人参银杏复方制剂后海马CAI区GABA免疫反应阳性神经元数量在复氧0h和24h时较常氧对照组多，以复氧0h时增加最明显；Glu免疫反应阳性神经元荧光强度在复氧0h、24h时段也较缺氧复氧实验组相应时段增加。结论：人参银杏复方制剂可增加缺氧复氧后海马CAI区GABA表达及防止Glu过度释放，对缺氧复氧性脑损伤具有保护作用。     

人工牛黄对实验性惊厥大鼠脑内海马及门区神经元丢失的抑制和GAD免疫反应阳性细胞的保护作用研究

目的:研究人工牛黄对致痫大鼠行为的影响，海马及门区神经元丢失情况和谷氨酸脱羧酶(GAD)免疫反应阳性细胞数目的改变，探讨该药的抗惊厥作用。 方法: 采用戊四唑急性惊厥模型，参照Racine标准观察行为学表现，用Nissl染色作海马及门区神经元计数，用免疫组织化学方法作GAD免疫反应阳性细胞计数。 结果: 牛黄防治组惊厥发作的潜伏时间较对照组长，发作次数较惊厥组少，而在海马及门区的神经元和在海马的GAD阳性细胞的丢失数量较惊厥组的少。 结论:人工牛黄能延长惊厥发作的潜伏期，减少发作次数，减轻神经元丢失和保护GAD免疫反应阳性细胞。     

大鼠新生期皮下注射谷氨酸单钠对成年后下丘脑ACTH神经元和正中隆起CRF神经纤维免疫反应性的影响

本文采用过氧化酶—抗过氧化酶(PAP)的免疫组织化学和荧光免疫组织化学的方法,研究了新生期大鼠皮下注射谷氨酸单纳(MSG)对成年后下丘脑弓状核促肾上腺皮质激素(ACTH)神经元和正中隆起内促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)神经纤维免疫反应的影响。新生期MSG处理后,弓状核中ACTH神经元的数目明显减少,正中隆起CRF样免疫反应末稍也大大减少,减少程度随MSG剂量增大而增加。提示MSG通过损伤前阿黑皮素(POMC)衍生的神经多肽,从而影响下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴的功能。     

谷氨酸脱羧酶65片段与IL－10双基因真核表达载体的构建与鉴定

 目的 优化以往构建的以预防 1 型糖尿病为目的的全长谷氨酸脱羧酶（GAD）65 DNA疫苗，尝试构建GAD 65片段与IL-10双基因真核表达载体。方法 从GAD65质粒中扩增出GAD190-315片段和GAD490-570片段的cDNA，以overlap PCR法将之分别与hIL-2信号肽cDNA拼接，得到SGAD190-315、SGAD490-570融合基因。以p43.2-mIL-10质粒为模板，用PCR方法扩增出IL-10基因。将SGAD190-315、SGAD490-570融合基因分别与IL-10基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCE4.1中，构建出2种双基因重组真核表达载体pBud-SGAD190-315/IL-10和pBud-SGAD490-570/IL-10。2种重组真核表达载体经测序鉴定正确后，用脂质体介导的方法转染COS-7细胞，转染后48和72 h以蛋白质印迹法检测细胞裂解产物及上清液中SGAD190-315和SGAD490-570融合基因的表达，ELISA方法检测细胞上清液中IL-10的表达。结果　核酸序列测定表明克隆的SGAD190-315、SGAD490-570融合基因和IL-10基因序列与报告序列一致。蛋白质印迹法和ELISA方法均检测到SGAD190-315/IL-10和SGAD490-570/IL-10重组真核表达载体在COS-7细胞中的表达。结论　成功构建了2种GAD65片段与IL-10双基因真核表达载体，为1型糖尿病的基因疫苗预防研究提供了实验基础。     

谷氨酸诱导海马神经元凋亡涉及线粒体释放细胞色素C

目的：建立体外谷氨酸诱导神经元兴奋损伤模型，探索其凋亡发生是否通过线粒体信号转导途径介导的细胞色素C（Cyt C）释放而实现，为今后干预性使用神经保护剂提供依据。方法:分离及培养新生Wistar大鼠海马神经元，选用合适谷氨酸浓度建立神经元损伤模型；利用LDH测定及流式细胞仪Annexin V/PI双染色法检测谷氨酸暴露后不同时点神经元凋亡及坏死的动态改变；采用Western blotting法检测caspase-3活性及线粒体内和胞浆内Cyt C水平动态变化。结果:谷氨酸诱导神经元损伤呈明显浓度及时间依赖性，50 μmol/L浓度可使LDH释放量明显增加 (18.4%,P<0.05)，暴露后6 h凋亡率显著增加；凋亡发生前，神经元caspase-3活性已明显增高（3 h），6 h达高峰；线粒体Cyt C释放发生在caspase-3增高前，30 min时胞浆内Cyt C水平即明显增加（P<0.05），3 h胞浆内Cyt C水平超过线粒体内，而线粒体内Cyt C水平进行性减少。结论:50 μmol/L谷氨酸可诱导海马神经元凋亡，凋亡机制可能是通过损伤线粒体膜，使Cyt C易位释放入胞浆激活caspase级联反应而致。