双歧杆菌四联活菌片对溃疡性结肠炎患者免疫功能及Fas/FasL表达的影响

目的:探讨溃疡性结肠炎患者应用双歧杆菌四联活菌片联合奥沙拉嗪治疗临床疗效,及对免疫功能和Fas/FasL表达的影响.方法:本组96例溃疡性结肠炎患者随机分为观察组(n=48)和对照组(n=48).对照组口服奥沙拉嗪治疗,观察组在对照组基础上结合双歧杆菌四联活菌片治疗.两组均以2周为1个疗程,连续服用2个疗程评价两组临床疗效,对血清炎症因子、免疫功能、C-反应蛋白及Fas/FasL表达的影响.结果:观察组治疗2个疗程后总有效率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);观察组治疗后白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量均明显低于各组间治疗前及对照组治疗后,差异具有统计学意义(P＜0.05);观察组治疗后CD4+、CD4+/CD8+表达高于治疗前及对照组治疗后,而CD8+明显低于治疗前及对照组治疗后,差异具有统计学意义(P＜0.05);两组治疗后Fas、FasL表达均低于各组间治疗前,差异具有统计学意义(P＜0.05);观察组治疗后C-反应蛋白水平低于各组间治疗前及对照组治疗后,差异具有统计学意义(P＜0.05);两组均无明显不良反应发生.结论:溃疡性结肠炎患者应用双歧杆菌四联活菌片联合奥沙拉嗪治疗临床疗效明显,双歧杆菌四联活菌片可使CD4+/CD8+比值恢复正常范围,经逆转Fas/FasL表达异常,而诱导淋巴细胞凋亡,故而具有重要临床研究价值.     

P15和ANRIL基因在结、直肠癌中表达的临床意义

目的:探讨P15和ANRIL基因在结、直肠癌中表达的临床意义。方法:57例结、直肠癌及对应癌旁正常组织标本用免疫组化SP法及实时定量PCR分别检测长非编码RNA ANRIL及P15基因表达情况。结果:P15在癌组织中的表达量明显低于癌旁正常组织(P<0.05),ANRIL在癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。结论:P15和ANRIL表达与结、直肠癌的发生、发展密切相关。     

基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建

目的构建基因组不稳定细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步探讨该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具。方法根据CDT1基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列。利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测。通过转染293T细胞进行慢病毒的包装。利用ELISA和荧光法分别进行滴度的检测。再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测CDT1表达量。结果测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T。过表达病毒滴度为4.3×108TU/ml;RNAi病毒滴度为2.0×108TU/ml。过表达慢病毒能有效上调CDT1的表达,过表达效率为65%。RNAi干扰慢病毒能够有效抑制CDT1的表达,抑制效率为88%。结论成功构建基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步研究CDT1在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具。     

电磁脉冲诱导大鼠左心室肌组织基因表达谱的变化

目的:用基因芯片技术研究电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)辐照对大鼠左心室肌组织的生物效应。方法:10只雄性同窝SD大鼠随机分为辐照组与正常对照组2组,每组5只。在锥形平板GTEM小室内对辐照组大鼠进行EMP辐照,EMP辐照参数为:场强200 k V·m-1,脉冲前沿3.5 ns,脉宽14 ns,重复频率1 Hz;正常对照组进行假辐照。辐照后18 h取大鼠左心室肌,提取RNA,经反转录后用Cy3、Cy5荧光标记,获得两组动物来源c DNA探针,c DNA探针与基因表达谱芯片进行杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果:筛选出差异表达基因108条,表达增强的有51条,其中功能已知或部分已知的11条,占22%;表达减弱的有57条,其中功能已知或部分已知的15条,占26%。差异表达基因主要涉及代谢、神经递质、肌肉收缩、凋亡、应激等方面。其中蛋白激酶C、热休克蛋白70、辅酶Q10、亚甲基四氢叶酸脱氢酶、5-羟色胺受体2C、锌指蛋白10、干扰素γ、雄激素调节蛋白、雌激素调节蛋白等可能在EMP对大鼠心脏生物学效应方面起重要作用。结论:EMP辐照可诱导大鼠左心室肌组织多个基因特异性表达。     

荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴不同器官组织中黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因的mRNA表达差异的比对

目的 分析荧光定量PCR 与半定量PCR 检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶（XDH/XO）的mRNA的相对表达量的差异,其结果具有一定的参考价值。方法 提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中总RNA,使用相同的引物序列及内参基因,分别用荧光定量PCR 与半定量PCR 进行相对定量检测,结果做比对分析。结果 两种检测方法的特异性没有差异,荧光定量PCR较半定量PCR灵敏性高,均显示猕猴不同组织XDH/XO的mRNA表达在肝脏组织中表达水平最高,对于表达量较低的其他组织,荧光定量PCR 与半定量PCR检测结果有一定差异。结论: 荧光实时定量PCR优于半定量PCR 法。     

猕猴B病毒囊膜蛋白gD基因真核细胞表达载体? 的构建及表达

目的 构建猕猴B病毒囊膜蛋白gD的真核表达载体, 并且检测其在293T细胞内的表达情况。 方法 首先通过基因合成手段获得含B病毒gD蛋白的基因片段, 在经由PstⅠ和NotⅠ双酶切后连接到pEGFP-N3载体, 随后将构建的pEGFP-N3-GD重组质粒转染到人胚胎肾上皮细胞系293T细胞。再用Western blot检测所提蛋白其在细胞内的表达情况, 并用激光共聚焦分析其在细胞内的表达定位情况。 结果 成功获得携带gD基因的阳性重组质粒pEGFP-N3-GD, 且pEGFP-N3-GD重组质粒能在293T细胞的表面正常表达。 结论 利用真核表达系统, 既能够在细胞表面产生B病毒gD蛋白的特异性重组抗原, 而且可用于B检测抗原的制备。     

TALE-TFs构建方法的建立及优化

目的：在传统方案的基础上建立一种经济有效且易于操作的类转录激活效应子转录因子（TALE‐TFs）的构建和功能检测方案。方法采用基于PCR的Golden gate克隆法分别尝试构建类转录激活效应物（TALEs）的六聚体、五聚体、四聚体和三聚体,比较构建结果,选择最优效果方案进行TALE‐TFs的构建。采用片段置换反应（FSR）构建了含有 TALE‐TFs结合片段的RFP质粒pminCMV ,并与TALE‐TFs进行共转染,观察红色荧光验证TALE‐TFs的转录活性。结果 TALEs中所含的串联重复模块越少,获得的构建产物越多。共转染时,TALE‐TFs使得pminCMV成功启动表达。结论该研究为不同条件下实验方案的选择提供了依据,并利用含有TALE‐TF结合片段和红色荧光的质粒建立了快捷直观的转录活性验证方法。     

老年慢性阻塞性肺疾病患者应对与心理调适的关系

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary dis‐ease ,COPD）是一种具有气流受限特征的肺部疾病,大多中年以后发病,其症状干扰生活的各个方面,呼吸困难和疲劳是主要问题领域,重度 COPD患者可能引发抑郁、孤僻、焦虑或恐惧等心理障碍,严重威胁患者生活。将慢性疾病评价作为挑战意味着应对努力的开始,应对是指当个体外在、內在耗损超过个人资源所能负荷的状况时,个体会改变认知与行动来符合其认知、行为及情感的改变,并试着控制环境或內在压力源的自我调试过程［1］。如果个体将潜在风险事件评估为压力,将引起应激反应。有关应对与压力的研究表明采用回避应对将增强心理困扰。江雅惠［2］论文中提到发现癌症、高血压、糖尿病、类风湿性关节炎患者认知重建的应对机制与良好的心理调适相关,而幻想、情感表达、自责等应对机制与较差的心理调适相关。但有关COPD老年患者应对和心理调适的文献资料有限,本研究旨在了解COPD患者应对与心理调适状况,并探讨二者之间的关系,为卫生专业人员实施心理干预提供参考和依据。     

益心解毒方对Nox2和Nox4亚基过表达的心肌细胞NADPH氧化酶活性的影响

目的通过观察益心解毒方含药血清对Nox2、Nox4亚基过表达的H9c2心肌细胞NADPH氧化酶活性的影响,揭示其作用环节是否与干预相应亚型的NADPH氧化酶调控环节有关。方法采用PCR方法扩增Nox2、Nox4基因全长序列,经双酶切、连接载体和转化后提取重组质粒,经酶切鉴定的阳性质粒进行DNA测序,测序正确后按照lipofectamine 2000试剂的说明书瞬时转染H9c2细胞,转染后的心肌细胞分组给予不同的药物干预,24 h后检测NADPH氧化酶活性。结果 1含有Nox2/Nox4亚基的重组质粒载体通过测序鉴定,结果与Gen Bank报道的完全一致。2通过荧光显微镜下观察转染72 h后的H9c2细胞,可见大量发绿色荧光的细胞,流式细胞术计数结果显示转染率均在60%左右,符合实验要求。3空质粒载体组、模型组、益心解毒方组的NADPH氧化酶活性表达明显高于正常组(P<0.01,P<0.05);模型组和益心解毒方组的NADPH氧化酶活性表达高于空载体组(P<0.01);模型组NADPH氧化酶活性表达均明显高于其他各组,而益心解毒方各组的NADPH氧化酶活性表达均明显低于模型组(P<0.01,P<0.05)。结论成功构建大鼠心肌细胞Nox2、Nox4亚基的重组质粒载体,该重组质粒载体可以在心肌细胞中过表达,益心解毒方可以有效地降低NADPH氧化酶活性的表达。提示此复方治疗心衰的机制可能是抑制了Nox2和Nox4型NADPH氧化酶的表达。     

骨碎补总黄酮与淫羊藿苷对人骨髓基质干细胞增殖及蛋白表达的影响

目的：观察骨碎补总黄酮与淫羊藿苷对人骨髓基质干细胞增殖及蛋白表达的影响。方法：采用人骨髓基质干细胞单独培养,按照干预药物浓度（mmol·L－1）分为：骨碎补总黄酮10－4 mmol·L－1组、10－6 mmol·L－1组、10－8 mmol·L－1组和淫羊藿苷10－4 mmol·L－1组、10－6 mmol·L－1组、10－8 mmol·L－1组。运用噻唑蓝比色法（MTT法）,分别在实验第1天、第3天、第5天、第7天时观察其增殖情况。同时,运用蛋白免疫印迹方法（in-cell western blot）分别测定人骨髓基质干细胞培养时骨源性碱性磷酸酶蛋白的表达情况。采用一般线性模型的重复测量方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果：药物作用第5天,骨碎补总黄酮10－6 mmol·L－1、10－8 mmol·L－1组和淫羊藿苷10－4 mmol·L－1、10－6 mmol·L－1、10－8 mmol·L－1组增殖能力优于对照组,与对照组比较,差异具有统计学意义（P＜0．05）。在药物作用于人骨髓基质干细胞第9天时,骨碎补总黄酮10－6 mmol·L－1组、淫羊藿苷10－6 mmol·L－1组骨源性碱性磷酸酶的表达量是优于对照组的,但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：骨碎补总黄酮、淫羊藿苷可以促进人骨髓基质干细胞的增殖,10－6 mmol·L－1的骨碎补总黄酮、淫羊藿苷对BALP表达无显著影响。