Wortmannin阻断PI3K/AKT途径对食管癌缺氧诱导因子-1α及糖酵解的影响

目的 探讨人食管癌细胞TE1、TE13中应用wortmannin阻断PI3K/AKT通路对缺氧诱导因子(HIF)-1α的抑制效果及对糖酵解相关基因表达的影响,分析PI3K/AKT-HIF-1α途径对食管癌细胞糖酵解通路之间的关系.方法 wortmannin(2μmol/L)预处理食管癌细胞TE1、TE13后常氧和缺氧培养,分为①常氧组(N);②缺氧组(H);③常氧处理组(N+W);④缺氧处理组(H+W).采用Western印迹检测细胞中HIF-1α蛋白及己糖激酶(HK)-Ⅱ、葡萄糖载体蛋白(GLUT)-1、乳酸脱氢酶(LDH )-A等糖酵解相关基因蛋白的表达;实时定量PCR检测HIF-1α及HK-Ⅱ、GLUT-1、LDH-A等糖酵解相关基因mRNA的表达;分光光度法测定胞液中LDH、HK-Ⅱ活性和培养上清液中乳酸浓度.结果 常氧状态下,在TE1细胞中存在HIF-1α蛋白的表达,wortmannin(2 μmol/L)能抑制HIF-1α蛋白表达,12 h后抑制效应最明显,故选取12 h为后续实验的缺氧时间.TE1、TE13细胞经wortmannin预处理后HIF-1α、HK-Ⅱ、GLUT-1、LDHA蛋白表达较未加药细胞明显减弱(P＜0.05);HIF-1α、HK-ⅡmRNA表达较未加药细胞明显减弱(P＜0.05).常氧和缺氧条件下加用wortmannin的TE1,TE13组食管癌细胞胞液LDH、HK-Ⅱ活性均较未加药细胞组明显减弱(P＜0.05),未加药细胞缺氧后酶活性增强(P＜0.05).常氧和缺氧条件下加用wortmannin组较未加药组细胞上清液乳酸浓度明显减低(P＜0.05),加wortmannin组细胞缺氧后表达增强(P＜0.05).结论 常氧及缺氧条件下,wortmannin能通过抑制食管癌细胞HIF-1α和糖酵解相关基因的表达导致乳酸水平降低,表明PI3K/AKT- HIF-1α途径与食管癌细胞糖酵解通路密切相关.     

HK2在肿瘤进展及产生耐药机制中的作用研究进展

己糖激酶（HK）是糖酵解的第一个限速酶。研究发现,HK2可通过提高肿瘤细胞有氧糖酵解促进肿瘤进展。HK2可与线粒体外膜上的电压依赖性阴离子通道（VDAC）结合,增强线粒体膜稳定性,进而抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤生存,从而抑制化疗药引起的凋亡,减少肿瘤细胞损伤,促使肿瘤对化疗药耐药。该文综述了HK2在肿瘤糖代谢及线粒体凋亡、耐药中作用的研究进展。     

癌相关成纤维细胞在肿瘤葡萄糖代谢中的作用

瓦博格效应认为,即便在氧气充足时,肿瘤仍大量利用葡萄糖进行有氧糖酵解,产生乳酸和少量ATP.虽产能效率低,但中间产物有利于改造肿瘤微环境,促进肿瘤恶性进展.近年发现,成纤维细胞作为肿瘤间质的重要组成部分,在肿瘤细胞诱导下具有癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast, CAF)表型,通过...     

siRNA沉默转酮醇酶样基因1下调人宫颈癌细胞HIF-1α表达及糖酵解关键酶活性

 目的：通过siRNA技术沉默宫颈癌细胞转酮醇酶样基因-1（TKTL1）后观察其在缺氧条件下低氧诱导因子1α（HIF-1α）表达水平及糖酵解途径中2个关键酶己糖激酶Ⅱ（HK-Ⅱ）和乳酸脱氢酶（LDH）活性的变化情况,旨在探讨肿瘤细胞TKTL1表达与糖酵解途径的关系。方法：用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转染HeLa细胞株,RT-PCR检测TKTL1 mRNA表达并结合转酮醇酶（TKT）活性测定判断其干扰效率;以未转染HeLa细胞为对照,进一步观察TKTL1沉默的癌细胞在缺氧条件下HIF-1α和HK-Ⅱ表达水平,以及HK-Ⅱ和LDH活性的变化。结果：siRNA沉默HeLa细胞TKTL1基因后TKTL1 mRNA表达下降,TKT活性显著降低（P<0.01）,HIF-1α和HK-Ⅱ表达水平及HK-Ⅱ和LDH活性较对照组细胞均显著降低（P<0.01）。结论：沉默肿瘤细胞TKTL1基因能下调HIF-1α表达并降低糖酵解代谢关键酶活性,从而影响肿瘤细胞的恶性表型。       

苯乙双胍联合己糖激酶抑制剂诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡

目的 探讨降糖药物苯乙双胍联合己糖激酶抑制剂2-脱氧葡萄糖（2-DG）对三阴性乳腺癌细胞4T1和MDAMB-231凋亡作用的影响。方法 苯乙双胍单独或联合2-DG处理4T1与MDA-MB-231细胞48 h,用SRB法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测培养上清液中葡萄糖消耗量和乳酸含量,多功能化学发光仪检测线粒体呼吸链复合物I活性,海马能量检测仪测定细胞线粒体耗氧量(OCR)。结果 苯乙双胍组的4T1与MDA-MB-231细胞上清液己糖激酶表达量（4.6±0.17,3.73±0.21）,葡萄糖消耗量（356±31,397±42）μg/105个细胞,乳酸浓度（5.59±0.52,7.83±0.78）μmol/L均高于空白组的已糖激酶表达量（1±0.15,1±0.12）,葡萄糖消耗量（289±25,301±32）μg/105个细胞,乳酸浓度（2.37±0.18,4.01±0.45）μmol/L(P <0.01);苯乙双胍联用2-DG组的细胞存活率（64.63±2.28,51.97±2.29）%,即使降低90%剂量,仍高于苯乙双胍组（86.70±1.83,85.53±1...     

糖尿病性酮症酸中毒患者心肌酶谱变化及意义

糖尿病性酮症酸中毒(DKA)可导致心肌损害,且随着糖尿病性酮症酸中毒程度的加深而显著地增加,已引起人们的重视。本文对33例糖尿病性酮症酸中毒患者的心肌酶谱的变化进行了临床观察,现报道如下。1临床资料1.1一般资料重度DKA组(动脉血pH<7.1):男9例,女9例,年龄35~70岁,平均52.2岁;轻度DKA组(动脉血pH>7.1):男8例,女7例,年龄25~70岁,平均49.0岁;同时随机抽取20例同期住院的非DKA的糖尿病患者作为对照组:男9例,女11例,平均61.9岁,全部来自本院2004年7月~2005年2月期间的住院患者。3组患者性别、年龄、职业等构成均无统计学差异,所有病例…     

HIF-1α在子宫内膜异位症中的研究进展

子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是育龄妇女的常见病,但其发病机制至今仍不清楚。越来越多的证据表明,低氧与EMs发生发展有密切的联系。在EMs异位组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达明显增高;HIF-1α通过调节雌激素产生、血管生成、细胞增殖和炎症等相关基因,促进EMs发展;HIF-1α是EMs有氧糖酵解过程中关键的调节因子;抑制HIF-1α的表达有助于抑制EMs的发生发展,表明HIF-1α在EMs的病理形成中的作用。本文介绍HIF-1α的研究进展,着重论述其在EMs中的作用。     

柠檬酸钠促胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探讨柠檬酸钠(SCT)促进胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及机制。方法:胃癌MGC-803细胞分别经SCT(5、10、20 mmol/L)和5-FU(0.5 mmol/L)作用,以未处理的MGC-803为阴性对照,用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;比色法检测细胞内乳酸含量、磷酸果糖激酶1(PFK-1)活性及三磷酸腺苷(ATP)水平;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、caspase-3及Cyt-c蛋白的相对表达量。结果:与阴性对照细胞比较,SCT处理的MGC-803细胞G2/M期阻滞与细胞凋亡明显增加;细胞内乳酸含量、PFK-1的活性和ATP水平均明显降低;细胞内Bcl-2的表达明显降低,而Bax、caspase-3和Cyt-c表达明显升高(均P0.05)。5-FU对MGC-803细胞乳酸含量、PFK-1的活性无明显影响(均P0.05),但其他作用与SCT相似。结论:SCT可促进MGC-803细胞凋亡,其作用可能与其抑制PFK-1的活性,降低糖酵解效率,并与线粒体凋亡通路的激活有关。     

3-溴丙酮酸联合阿霉素对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究3-溴丙酮酸(3-BRPA)联合阿霉素(ADM)对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响。方法:采用3-BRPA 80、160、320mol/L作用于MDA-MB-231乳腺癌细胞18 h后,测定其对细胞内ATP的影响;分别用3-BRPA 10、20、40、80、160mol/L和ADM 0.75、1.5、3、6、12mol/L,以及3-BRPA 80mol/L与ADM 0.75、1.5、3、6、12mol/L合用作用于MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48和72 h后,MTT法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖情况;3-BRPA 80mol/L组、ADM0.75mol/L组以及3-BRPA 80mol/L与ADM 0.75mol/L合用组作用于乳腺癌细胞MDA-Mb-231 24 h后,利用碘化丙啶染色,流式细胞仪检测其诱导乳腺癌细胞凋亡的影响;采用3-BRPA 16mol/L、ADM 0.2mol/L以及3-BRPA 16mol/L与ADM0.2mol/L合用作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231,5 d后观察对集落克隆形成的影响。结果:3-BRPA对乳腺癌细胞MDA-MB-231 ATP的生成有抑制作用;3-BRPA联合ADM后可明显增强ADM的细胞毒性作用;3-BRPA 80mol/L与ADM 0.75mol/L合用组诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231 24 h凋亡率为39.6%,均显著高于对照组、3-BRPA单用组和ADM单用组(P0.01);3-BRPA增强ADM对乳腺癌细胞MDA-MB-231集落克隆形成的抑制作用。结论:3-BRPA可以增强ADM对乳腺癌细胞MDAMB-231增殖的抑制作用以及增强ADM诱导乳腺癌细胞凋亡的作用。     

LDH5在舌鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨LDH5蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的表达特点,及其与临床病理和患者生存预后的关系?方法:应用免疫组织化学染色法检测LDH5蛋白在63例舌癌组织标本和16例正常舌黏膜组织标本中的表达?结合患者临床病理资料和随访资料,应用SPSS17.0软件分析LDH5的表达与相关临床病理参数(Fisher精确概率法)以及患者总生存率之间的关系(Kaplan-Meier法)?结果:LDH5在部分舌鳞癌组织中呈高表达(33/63,52.38%),与其在正常舌黏膜组织的表达水平相比有显著统计学差异(P < 0.01)?LDH5蛋白表达水平与肿瘤大小?颈淋巴结转移?临床分期具有相关性(P < 0.05),而与患者的性别?年龄?病理分级?局部浸润等无相关性(P > 0.05)?Kaplan-Meier 法分析患者总体生存情况结果显示:LDH5高表达组患者的总体生存率明显低于LDH5低表达组患者(P = 0.006,Log-rank检验)?结论:LDH5在部分舌鳞状细胞癌组织中呈异常高表达,其表达水平与肿瘤的病理学特征及患者预后具有相关性?