端粒酶突变体对肝癌细胞端粒酶活性的作用

目的　观察端粒酶突变体对肝癌细胞端粒酶活性和生长抑制的作用。方法　利用质脂体转染法在培养的肝癌细胞中导入端粒酶突变体，并与维甲酸和人参皂甙对照，利用TRAP－银染方法对不同时期肝癌细胞进行了端粒酶活性的测定，并观察各期细胞生长情况。结果　在加入端粒酶突变体后肝癌细胞端粒酶活性明显降低，细胞出现明显凋亡现象，其作用效果与维甲酸基本相同。结论　端粒酶突变体对肝癌细胞的抑制作用可能是通过抑制端粒酶活性途径实现的。     

癌性胸腔积液端粒酶活性的检测

目的：探讨端粒酶活性水平检测对癌性胸腔积液的诊断价值。方法：采用Telomerase-PCR-ELISA法检测了30例癌性胸腔积液及21例良性胸腔积液的端粒酶活性水平，并与细胞学检查比较结果：癌性胸腔积液端粒酶活性阳性率76．6％，结核性胸腔积液20％（3／15），其他病因胸腔积液0％（0／6），癌性胸腔积液端粒酶活性高于细胞学检查率36．6％（P＜0．005），两者平行试验阳性率83．3％。结论：端粒酶活性的检测可能成为诊断癌性胸腔积液的重要辅助手段。     

银染端粒重复序列扩增法定量检测端粒酶活性的研究

目的：探讨运用简便、快速及无放射性污染的银染粒重复序列扩增法（silver staining telomeric repeat amplification protocol,SS-TRAP）定量检测端粒酶活性。方法：运用SS－TRAP法检测了293细胞、经加热处理的293细胞、空白对照及典型乳腺癌组织、良性乳腺病变标本中端粒酶活性，其结果予以定量。结果：该法有检测出10个以上293细胞中端粒酶活性，热处理及空白对照均为阴性；乳癌组织标本中银染条带清晰可见，而良性病变中未见端粒酶阳性条带。结论：非核素银染TRAP法可用于端粒酶活性定量检测，与TRAP法相比，同样具有较高敏感性和特异性，但更快速、简便。     

37例病毒性肝炎患者庚型肝炎病毒RNA检测结果分析

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术对３７例住院病毒性肝炎患者作庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ检测。结果７例阳性，阳性率为１８．９２％。其中１３例原因不明肝炎ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性４例，阳性率为３０．７６％。男、女均是ＨＧＶ的易感者，传播途径与丙肝、乙肝可能相似，有各种临床类型，肝功能损害程度较轻，ＨＧＶ可单纯感染，也可与其他肝炎病毒同时或重复感染。７例ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性者，其中４例作肝组织病理检查，例７见合胞体巨细胞     

T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA的方法

目的：建立一种应用T7 RNA聚合酶体外转录合成大量siRNA的方法。方法：以萤火虫荧光素酶为靶标，应用T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA，脂质体转染法将其导入HepG2细胞中，通过测定荧光素酶的量，评价siRNA对萤火虫荧光素酶基因表达的抑制作用。结果：合成了以萤火虫荧光素酶为靶标的siRNA，合成的siRNA能特异性地抑制荧光素酶基因的表达，抑制率为80％。结论：建立了一种经济简便的体外合成siRNA的方法。     

端粒、端粒酶与食管癌

在上个世纪 30年代 ,遗传学家Muller和Mc Clintock提出了端粒 (telomere)的概念 ,70年代Greider和Blackburn在四膜虫中证实端粒结构为简单的TTGGGG核苷酸重复序列[1 ] ,1 984年Greider和Blackburn又在四膜虫中发现了端粒酶(telomerase) [2 ] 。近几年对端粒和端粒酶的研究十分活跃 ,现就端粒和端粒酶的一些进展及其在食管癌方面的研究予以阐述。1　端粒 (telomere)端粒是位于真核细胞染色体末端的一种由 2～ 2 0kb串联的短片段重复序列 (TTAGGG) n 及一些结合蛋白组成的特殊结构 ,在染色体定位、复制、保护和控制细胞生长寿命等方面…     

抗端粒酶核酶抑制肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的研究

设计针对端粒酶RNA组分的特异性核酶，研究该核酶对肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响。构建含针对端粒酶RNA组分锤头状核酶基因的重组真核表达质粒pBBS212-RZ，以及建立人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤模型。将不同剂量的pBBS212-RZ用脂质体包裹后进行瘤体内多点注射，对照组注射生理盐水或空质粒载体pBBS212。连续注射2l天后，测量移植瘤体积和重量，检测瘤组织端粒酶活性。抗端粒酶特异性核酶使瘤组织端粒酶活性下降(抑制率为72％)，明显地抑制了肝癌细胞裸鼠移植瘤生长(抑制率为68％)，且存在剂量依赖性。抗端粒酶特异性核酶作为一种有效的端粒酶抑制剂，可抑制肝癌细胞的生长，有望在肝癌基因治疗中发挥作用。     

脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制真核表达载体构建及最佳短发夹样RNA分子筛选

目的构建并筛选大鼠胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达抑制短发夹样RNA（shRNA）真核表达载体。方法针对GFAP基因全编码序列设计并合成三对9bp茎环结构、19bp干扰序列特异性shRNA模板，体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体；通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型，脂质体介导RNA干扰分子转染，实时荧光定量RT—PCR及Wesem blot技术观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果．筛选最佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体。结果序列测定证实GFAP—shRNA重组质粒真核表达载体构建成功，三对shRNA模板在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81％、63％、56％。结论高效率的GFAP—shRNA真核表达载体在大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP基因表达，为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗中的应用奠定了前期基础。