脂质体介导转染bcl-2反义核酸进入HL60细胞的动力学模式和生物学效应

bcl- 2基因是重要的抗凋亡和耐药基因 ,在造血系统恶性肿瘤细胞中普遍高表达。利用 bcl- 2反义核酸有望抑制bcl- 2基因的表达 ,促进细胞凋亡 ,提高肿瘤对化疗的敏感性。　目的　应用阳离子脂质体介导或寡核苷酸直接转染技术 ,建立 HL6 0细胞摄入荧光素标记的 bcl- 2寡核苷酸的动力学模式 ,研究脂质体介导下 bcl- 2反义核酸对 HL6 0细胞的生物学效应 ,初步探讨脂质体的生物学作用。　方法　应用荧光素标记的寡核苷酸 ,凝胶电泳观察脂质体寡核苷酸复合物的形成 ,流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度和 bcl-2蛋白的表达 ,荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布 ,3H-Td R掺入法和 MTT法检测 HL6 0细胞的生长 ,RT- PCR法检测细胞内 bcl- 2 m RNA的表达水平。　结果　 (1)当脂质体与寡核苷酸的质量比合适时 ,两者可形成复合物。(2 )脂质体介导转染法显著提高 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入 ,当脂质体与寡核苷酸的质量比 (μg/ μg)为 2 .0 / 1时 ,细胞内相对平均荧光强度可达寡核苷酸直接转染时的 40倍 ,而且 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入与其浓度和作用时间有关 ,未标记的寡核苷酸竞争性抑制细胞对标记寡核苷酸的摄取。 (2 )细胞内的寡核苷酸可向胞外转运 ,脂质体介导转染后 ,胞内荧光强度衰减缓慢 ,t1 /2 约为 4h,     

葡萄球菌肠毒素A脂质体不良反应的初步研究

目的：观察葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A，SEA)脂质体的不良反应。方法：用逆相蒸发法制备SEA脂质体(L-SEA)，静脉注射L-SEA，用ELISA法检测小鼠血浆中细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素(IFN-γ)的水平，并观察L—SEA对新西兰大白兔血压、呼吸及体温的影响。结果：L-SEA组小鼠血浆中细胞因子水平较游离SEA组显著降低，对新西兰大白兔血压、呼吸及体温的影响也明显低于游离SEA组。结论：L-SEA可以显著降低SEA的不良反应，其机制可能是L—SEA能减少血浆中细胞因子的产生。     

盐酸西替利嗪脂质体凝胶的制备及初步药理学研究

目的 探讨盐酸西替利嗪脂质体凝胶的制备方法,并进行质量评价和初步药效考察。方法 采用薄膜分散法制备盐酸西替利嗪脂质体溶液,在单因素试验基础上以大豆卵磷脂与胆固醇质量比、盐酸西替利嗪用量、水化时间、磷酸盐缓冲液（PBS）用量为考察因素,包封率为考察指标,采用正交试验优化脂质体制备处方;以卡波姆-940为凝胶基质制备盐酸西替利嗪脂质体凝胶,观察其外观性状,测定pH,并通过离心试验及温度试验观察凝胶的稳定性。取24只C57BL/6小鼠,分为空白对照组（等体积生理盐水）、阳性对照组（5%米诺地尔酊,1 mL/次）、实验组（盐酸西替利嗪脂质体凝胶,1 g/次）,脱毛24 h后各组涂相应药物或生理盐水,每日1次,连续18 d。实验过程中,观察小鼠背部脱毛部位皮肤颜色变化及毛发生长情况,并于第4,6,10,13 d拍照;给药过程中,密切观察小鼠给药部位皮肤是否出现红肿、水疱或溃烂等接触性皮炎症状,以及小鼠生活习性等方面的改变。结果 盐酸西替利嗪脂质体最佳制备工艺为,大豆卵磷脂250 mg,胆固醇50 mg,盐酸西替利嗪25 mg,PBS 5 mL,水化温度50℃,水化0.5 h;在该条件下制备的脂质...     

功能型磁性纳米复合介质在肿瘤靶向治疗中的应用

恶性肿瘤严重影响人类健康,也是医学科学与技术发展所面临的巨大挑战,迅速发展的纳米技术可以为人类最终攻克肿瘤提供新的契机和希望。2004年,美国卫生及人类服务部、国立卫生研究院和国家癌症中心联合发表《肿瘤纳米技术》,指出“肿瘤纳米技术将从根本上改变人类诊断、治疗和预防癌症的策略”。     

三磷酸腺苷脂质体的研究进展

本文综述了近年来三磷酸腺苷(ATP)脂质体的研究进展.脂质体作为新载体可以提高ATP在体内的稳定性,并且能靶向于缺血的心肌和缺血的大脑,用于器官移植中能提高冷冻贮存器官的能级状态,提高移植的成活率,故制备稳定的ATP脂质体具有重要的意义.本文还综述了ATP脂质体的制备方法,探讨如何进一步提高脂质体的包裹率和靶向性,以用于临床.     

9-硝基喜树碱及其脂质体对HepG2、L02细胞周期和凋亡作用的研究

目的 研究9-硝基喜树碱及其脂质体对人肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞L02细胞周期、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 HepG2、L02细胞用含不同浓度9-硝基喜树碱及其脂质体的培养液孵育后,利用MTT法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,WesternBlot验证周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达变化.结果 9-硝基喜树碱及其脂质体对两种细胞生长呈时间和剂量依赖性抑制.药物处理后S期和G2/M期细胞明显增多,浓度大于0.1 μmol/L时24 h后HepG2细胞完全阻滞于S期;0.1 μmol/L孵育72 h后,超过95%HepG2细胞阻滞于G2/M期.药物对细胞凋亡的诱导作用也呈明显的剂量和时间依赖关系.Western Blot显示:Bax、Caspase3表达增高,Cyclin A、Cdk2、Cyclin E、Bcl-2表达减低.与L02相比,HepG2细胞对药物更加敏感.结论 9-硝基喜树碱及其脂质体可以通过调控细胞周期和诱导凋亡有效抑制细胞生长,其对肿瘤细胞的抑制作用强于正常肝细胞.9-硝基喜树碱脂质体体外抗肿瘤效果略强于9-硝基喜树碱单体.

Abstract：

Objective To investigate the modulating effects and explore their mechanism of 9-nitrocamptothecin and its liposomes to induce apoptosis and inhibit cell cycle in HepG2 and L02 cell lines. Methods Cells were incubated with 9-nitrocamptothecin(9NC) or with 9-nitrocamptothecin liposomes for 24 h, 48 h and 72 h, then, the cell viability was measured via MTT assay; cell cycle and apoptosis was evaluated by flow cytometry after stained by PI and Annexin V-PE/7AAD. Additional, Western Blot was used to evaluate the expression of cell cycle and apoptosis related protein. Results Both cells viability were apparently inhibited by the 9-nitrocamptothecin and 9-nitrocamptothecin liposomes, the inhibitory effect showed a time-dependent and dose-dependent manner. Both S and G2/M phases arrest were observed after incubated with drugs. HepG2 cell was completely arrested in S phase when 9NC concentration over than 0. 1 μmol/L after incubation for 24 h, while more than 95% cells arrested in G2/M phase when 9NC concentration is 0. 1 μmol/L after incubation for 72 h. Apoptosis induction effect also showed a time-dependent and dose-dependent manner. Western Blot results showed the expression of Bax and Caspase-3 were upregulated while Cyclin A, Cdk2, Cyclin E and Bcl-2 were downregulated. More importantly, the compounds were more cytotoxic to the cancer cell lines than to the normal liver cell. Conclusions 9-nitrocamptothecin and 9-nitrocamptothecin liposomes can potently inhibit cell growth via regulation of cell cycle and induction of apoptosis, and this effect was preferentially in cancer cell. Inhibitory of 9-nitrocamptothecin liposomes was slightly better than the 9-nitrocamptothecin.     

Angiopep-2与转铁蛋白共修饰脂质体跨血脑屏障的研究

【摘要】目的：构建angiopep-2与转铁蛋白共修饰脂质体,并对其理化性质和跨血脑屏障能力进行评价。方法 采用薄膜分散法制备转铁蛋白（TF）与angiopep-2共修饰载脂质体（ANG/TF-LPs）,考察其粒径,电位,血清稳定性等理化特征。通过定量细胞摄取实验考察脑内皮bEnd.3细胞对ANG/TF-LPs的摄取效率。构建血脑屏障体外模型,考察不同脂质体的跨血脑屏障能力。结果 所制备的ANG/TF-LPs粒径为93±13.5 nm, Zeta 电位为7.55±1.85 mV。在24 h内具有良好的血清稳定性。体外细胞摄取实验表明,bEnd.3细胞对ANG/TF-LPs的摄取效率分别是TF-LPs、ANG-LPs和LPs的2.9倍、2.4倍和4.8倍,差异具有统计学意义（P<0.01）;ANG/TF-LPs的跨血脑屏障效率分别是TF-LPs、ANG-LPs和LPs的3.1倍、2.9倍和6.8倍,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 ANG/TF-LPs制备工艺简单,经过angiopep-2与转铁蛋白修饰后,脂质体的跨血脑屏障能力显著增强,是一种潜在高效的脑部靶向给药系统。     

脂质体在皮肤基因治疗中的应用

基因治疗 (Genetherapy)是指将遗传物质 (外源性正常基因 )转移入病变细胞或体细胞 ,并整合至染色体中 ,取代突变基因 ,补充缺失基因或关闭异常基因 ,产生正常基因表达产物 ,从而达到治疗机体疾病或有益于治疗的目的。脂质体 (Liposome)是 1 965年由Bangham首先发现的由类脂质双分子层组成的类似生物膜结构的封闭小囊。因其具有以下特点而被选择为基因载体 :无毒、无免疫原性 ,且制备简单 ,可被细胞生物膜利用 ;可以运载不同大小的基因片断、质粒DNA ,甚至可以运载整个染色体或细胞核 ,其内容物大大超过其他基因载体 ;不受宿主限制 ,可将…     

PD-1单抗影响复发性宫颈癌后线化疗1例报道

1 病例简介 患者,女,31岁,2014 年10 月因"宫颈非角化鳞状细胞癌Ⅱa2"行经腹广泛子宫切除术+盆腔淋巴结清扫术,保留双侧附件.术后病理示:宫颈中低分化鳞状细胞癌,肿物切面积4cm×2. 5cm,侵达颈管壁约4/5,左右宫旁及阴道壁断端未查见癌;左髂血管淋巴结查见转移.根据宫颈癌NCCN指南,应给予术后放化疗...     

多柔比星脂质体注射液与多柔比星注射液大鼠重复给药毒性的比较

目的研究大鼠连续静脉注射给予多柔比星脂质体注射液和多柔比星注射液后对大鼠产生的毒性作用及毒性异同比较。方法 SD大鼠90只,随机分为溶剂对照组、多柔比星脂质体注射液(1 mg/kg)和多柔比星注射液(1 mg/kg)组。各组大鼠每3 d静脉注射1次,连续给药13次,检测其体重、血液生化学、血液学、脏器系数等指标,并进行组织病理学检查。结果多柔比星脂质体注射液1 mg/kg可引起SD大鼠脱毛和溃疡,体重增长明显延缓,PLT、ALT、BUN升高,ALB降低,心脏和肾脏系数增大,胸腺和睾丸系数减小,组织病理学检查结果显示睾丸曲细精管生精上皮脱落,各级生精细胞消失,部分间质水肿;心脏心肌纤维断裂、溶解,横纹及部分细胞核消失;肾脏出现肾小管透明管型等病理组织学病变。与多柔比星脂质体注射液比较,相同剂量下多柔比星注射液亦可引起以上病变,但大鼠脱毛和皮肤溃疡率降低,肾脏毒性和心脏毒性明显增加。结论多柔比星脂质体注射液与普通注射液比较,心脏和肾脏毒性明显减轻,但皮肤毒性明显增加。