靶向UCP-2基因siRNA慢病毒转染对胰腺腺泡细胞AR42J坏死、凋亡的影响及机制探讨

目的观察靶向解偶联蛋白2(UCP-2)基因小干扰RNA(siRNA)慢病毒转染对胰腺腺泡细胞AR42J坏死、凋亡的影响,并探讨其相关机制。方法构建靶向UCP-2基因siRNA慢病毒载体,转染AR42J细胞(实验组),并设立阴性对照组及空白对照组。荧光显微镜镜检确定感染效率,实时定量PCR检测各组细胞的UCP-2 mRNA。以1×108mol/L的蛙皮素刺激AR42J细胞,采用Annexin V/PI双标流式细胞仪检测蛙皮素刺激后不同时间点AR42J细胞的坏死率和凋亡率,同时检测细胞内的ATP、活性氧簇(ROS)。结果成功构建了滴度为5×108TU/mL的UCP-2基因siRNA慢病毒载体;实验组细胞UCP-2 mRNA表达明显降低,各时间点AR42J细胞凋亡率及其ROS、ATP水平显著高于阴性对照组(P均<0.05),细胞坏死率则显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论靶向UCP-2基因siRNA慢病毒转染可抑制AR42J细胞的UCP-2基因表达,促进细胞凋亡,抑制细胞坏死,其作用机制与其增加AR42J细胞内ROS、ATP表达有关。     

miRNA对VEGF介导肿瘤血管生成的调控作用研究进展

微小RNA(miRNA)是一类影响mRNA稳定性和翻译效率的小型调节RNAs,由20～24个核苷酸组成,通过对功能RNA蛋白翻译的抑制或mRNA的降解来调节基因表达。miRNA参与了血管生成、肿瘤的生长和转移等过程。血管内皮生长因子(VEGF)是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子,与内皮细胞上特异的VEGF受体结合,可促进血     

Apollon siRNA抑制肺癌细胞生长并提高放疗敏感性

目的 调查与Apollon小干扰RNA(siRNA)并用是否可以提高人肺癌细胞放疗敏感性.方法 采用转染野生型及突变型p53基因的两种非小细胞肺癌细胞株H1299/wtp53及H1299/mp53,通过siRNA技术沉默癌细胞Apollon表达,并以实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测Apollon基因表达.采用细胞克隆生成分析确定Apollon沉默的抗癌效果及放疗增敏作用.结果 以Apollon为靶点的siRNA转染细胞后,可观察到Apollon基因表达抑制.Apollon siRNA可抑制癌细胞增殖并提高H1299细胞放疗敏感性.结论 在肺癌放疗中,Apollon siRNA可能是一个潜在的放疗增敏剂候选者.     

RNA干扰沉默CXCR4基因对胃癌细胞SGC7901增殖和侵袭力的影响

目的探讨特异性抑制胃癌细胞SGC7901中趋化因子受体4(CXCR4)的表达及RNA干扰对胃癌细胞SGC7901细胞增殖及侵袭力的影响。方法将腺病毒载体CXCR4-shRNA转染至胃癌细胞SGC7901,RT-PCR检测转染后CXCR4 mRNA的表达量;MTT法检测癌细胞增殖情况;Transwell小室侵袭实验对胃癌细胞侵袭力进行检测。结果 (1)成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901;(2)空白组与对照组细胞增殖迅速,两组之间无显著性差异(P>0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著性差异(P<0.05);(3)shRNA-CXCR4腺病毒载体和空白组及对照组相比能显著抑制SGC7901细胞的侵袭力(P<0.05),抑制率为57.01%。空白组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体CXCR4-shRNA能有效抑制胃癌细胞SGC7901的侵袭,并在一定程度上抑制癌细胞增殖。     

Her2(+)/Her2(-)乳腺癌差异表达microRNAs的生物信息学分析

目的 通过文献挖掘与生物信息学分析的方法,探讨Her2(+)/Her2(-)乳腺癌之间差异表达的microRNAs可能涉及的生物学功能和信号通路.方法 在NCBI数据库的GEO子数据库及EBI数据库中的ArrayExpress子数据库开展检索,使用关键词“breast cancer”、“microRNA”进行检索,获取Her2(+ )/Her2(-)乳腺癌之间差异表达microRNAs.利用microRNAs靶基因预测软件预测所有差异表达microRNAs的靶基因,进行通路分析.结果 找到2个在Her2表型不同的乳腺癌中差异表达的microRNAs数据集,利用软件TargetScan预测差异表达microRNAs的靶向基因,取其合集进行富集分析,最后将富集得到的基因利用David数据库进行分析,从而得到了上述差异表达的microRNAs可能具有的生物学功能和参与的调节通路.结论 差异表达的microRNAs通过调节靶向基因参与不同信号通路,实现多种生物学功能.     

siRNA靶向干扰APE1基因对脑胶质瘤细胞增殖凋亡及放疗敏感性的影响

目的观察小干扰RNA(siRNA)干扰脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)基因表达对脑胶质瘤细胞增殖与凋亡及其对放射治疗敏感性的影响。方法将含有APE1siRNA的表达质粒分别稳定转染人脑胶质瘤细胞U251细胞系和U87细胞系,并用G418筛选阳性克隆,应用Western blot杂交检测APE1的表达变化,MTT法及AO/EB染色观察脑胶质瘤细胞的增殖与凋亡情况,给予不同放射剂量照射后应用MTT法绘制细胞存活曲线。结果转染后,Western blot检测显示APE1siRNA组的APE1表达较阴性对照组及空载体组降低;MTT法显示APE1siRNA组中的细胞生长受抑明显;AO/EB染色显示APE1siRNA组的凋亡率较阴性对照组及空载体组高;MTT法显示APE1siRNA组照射后对放疗的敏感性增加。结论 APE1siRNA靶向干扰了APE1蛋白的表达,对脑胶质瘤细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,还可以提高对放疗的敏感性。     

siRNA反向转染法提高原代癌相关纤维母细胞转染效率的研究

目的探讨提高原代癌相关纤维母细胞转染效率的方法,并优化实验条件。方法对比正反两种转染方法转染siRNA至原代癌相关纤维母细胞的转染效率,并分析两种转染试剂在转染原代细胞方面的不同。结果反向转染组转染siRNA至原代癌相关纤维母细胞的转染效率高于正向转染组(P<0.05);两种转染试剂转染效率无统计学差异(P>0.05)。结论反向转染法可以显著提高原代癌相关纤维母细胞siRNA转染效率;两种转染试剂转染效率无明显差异。     

La、hVAP-33、eIF2B γ和HCV IRES特异性小干扰RNA抑制HCV的复制和表达

目的 证实La自身抗原、33kD人类囊相关膜蛋白(hVAP-33)和真核细胞翻译起始因子第3亚单位(eIF2B γ)是HCV在细胞内的协同感染因子,通过抑制Huh7细胞内这些因子的表达可抑制HCV复制和表达. 方法 分别设计合成3条HCV内部核糖体进入位点(IRES)的小干扰RNA(siRNAs),转染Huh7-HCV细胞后筛选出其中沉默效率最高的1条.以HCV假病毒感染Huh7细胞后48 h,分别以上述HCV IRES siRNA和之前试验中已经筛选出的La、hVAP-33和eIF2B γ特异性siRNAs单独或者不同组合转染Huh7-HCV细胞,利用荧光定量PCR方法检测HCV核心基因并计算△△CT值(相对定量法),比较不同siRNAs及组合对目的基因沉默的效率;同时以Western blot观察HCV核心蛋白表达量的差异.结果 La自身抗原与IRES特异性siRNA共转染对HCV表达的抑制效率最高,使HCV核心蛋白基因相对表达量下降了约41％;4种基因特异性siRNAs 对HCV在Huh7细胞中的复制和表达均有不同程度的抑制作用,La、hVAP-33和eIF2Bγ特异性siRNAs分别与IRES siRNA联合均较其单独转染对目的基因的抑制效率高.结论 可以认为La自身抗原、hVAP-33和eIF2Bγ是HCV在宿主细胞内的协同感染因子,通过对Huh7细胞内协同感染因子及HCV IRES基因沉默后可以显著减少HCV的表达.     

siRNA沉默PKM2对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的抑制作用

在恶性肿瘤组织中,丙酮酸激酶（PK）的组织特异性同工酶（L型、R型、M1型PK）表达减少,而PKM2表达升高,在肿瘤细胞生长、增殖、迁移等方面发挥重要作用。目的：探讨siRNA沉默PKM2对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移的抑制作用。方法：以蛋白质印迹法筛选出高表达PKM2的胃癌细胞株BGC-823。构建PKM2siRNA干扰质粒,稳定转染胃癌BGC-823细胞,同时以转染空质粒pU6作为阴性对照组。以荧光定量PCR和蛋白质印迹法在mRNA和蛋白质水平上验证干扰效果,以CCK8法和细胞迁移实验检测细胞增殖和迁移能力。结果：与阴性对照组相比,PKM2siRNA转染组PKM2mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力和迁移能力明显下降（P〈0．05）。结论：PKM2在人胃癌的发展中发挥重要作用,并对胃癌BGC-823细胞增殖和迁移有一定的促进作用。     

RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响

目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞NucleosteminmRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-timePCR和Westernblot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降;NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P<0.05;1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P<0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P>0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.