肺癌转移相关基因的差减文库的构建

目的发现与肺癌转移相关的基因.方法选择4例转移和5例非转移患者肺癌的RNA混合样品进行差减杂交.经过两步骤的杂交后,构建了转移相关基因的差减文库.对获得阳性克隆进行测序和同源性分析.结果一共获得了225个阳性克隆.在GenBank中序列比对的结果表明,它们分属124个基因.其中25个基因出现的频率大于一次,并有9个序列未找到同源基因.结论该结果将有助于各类肿瘤转移相关基因的研究.     

植物生长素对杂交人参发根生长和人参皂苷合成的影响[英]／Washida D…／／Biol Pharm Bull．

植物生长素能促进发根中次生代谢产物的生成。人参与西洋参的杂交种比亲本有更强的人参皂苷生产能力,但是用种子繁殖该杂交种几乎是不可能的。因此有人利用其愈伤组织、不定根和发根生产高含量的人参皂苷。作者研究了植物生长素对该人参杂交种发根生长及人参皂苷合成的影响。     

藏药紫金标抗HSV-1的作用机理研究

目的 :探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒 (HSV-1)的作用及机理 ,为进一步开发该药提供理论依据。方法 :采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV-1感染的Vero细胞 ,以 50%组织细胞感染量 (TCID₅₀ ) ,细胞病变效应(CPE) ,MTT法和核酸分子杂交作为评价指标。结果 :MTT法测得紫金标的 50 %抑制浓度 (IC₅₀ )为 29.46mg·L^-1,50%中毒浓度 (TC₅₀ )为 1 077mg·L^-1,治疗指数 (TI)为 36.56 ,结果表明紫金标有明显抑制HSV-1的作用 ,其作用强度和有效时间与药物浓度成正比。紫金标无直接灭活HSV-1的作用 ,也不能影响病毒的释放 ;但可干扰HSV -1对宿主细胞的吸附。不同浓度的紫金标能明显抑制HSV-1gD基因复制和mRNA表达。结论 :紫金标具有显著的抗HSV-1的作用 ,能抑制HSV-1对宿主细胞的吸附以及抑制HSV-1gD基因复制与转录。     

杂交手术治疗累及弓部的Stanford B型主动脉夹层的疗效分析

目的探讨杂交手术在治疗累及弓部的Stanford B型主动脉夹层(TBAD)中的有效性和安全性。方法前瞻性描述性研究。纳入2020年1月—2021年9月蚌埠医学院第一附属医院血管外科确诊为累及弓部的TBAD患者。其中男16例, 女5例;年龄32～81(59.7±12.9)岁。患者均采用外科转流术和胸主动脉腔内修复术相结合设计的新的杂交手术治疗。观察指标:患者手术时间、术中出血量、术中转流血管通畅情况、有无Ⅰ型内漏、术后卧床时间、住院费用、术后住院时间、术后并发症以及死亡等指标。术后随访观察有无支架移位、再干预、支架内血栓形成、支架内再狭窄、移植物感染、各型内漏, 转流血管通畅情况及真腔通畅情况。结果患者手术均成功, 术中均未出现Ⅰ型内漏。手术时间为(156.5±19.7)min, 术中出血量为(70.2±25.6)mL, 术后卧床时间为(4.3±1.7)d。11例患者使用人工血管行转流术, 术后住院时间为(9.6±3.1)d, 住院费用为(16.6±3.8)万元;另外10例使用自体大隐静脉, 术后住院时间为(14.1±6.3)d, 住院费用(剔除2例左颈总动脉植入支架病例)为(13.0...     

Xq25微重复智力障碍家系遗传学分析及产前诊断

目的对1例27岁的智力障碍患者及其家系进行临床表现和遗传学分析, 为家系提供遗传咨询和产前诊断。方法采用常规染色体核型分析G显带和微阵列比较基因组杂交(array comparative genomic hybridization, aCGH)技术分析先证者(Ⅲ-1)及家系成员的染色体核型和全基因组拷贝数变异(copy number variation, CNV), 并指导家系中孕妇(先证者之妹, Ⅲ-2)进行产前诊断。结果 G显带结果显示, 该家系成员染色体核型均未见异常。aCGH结果显示先证者(Ⅲ-1)及先证者母亲(Ⅱ-3)、二舅(Ⅱ-2)、妹妹(Ⅲ-2)的X染色体q25区域存在1 533 kb重复, CNV为致病性。Ⅲ-1与Ⅱ-2临床表型为智力障碍、言语不清、特殊面容;Ⅱ-3与Ⅲ-2无异常表型。Ⅲ-2羊水核型和aCGH未见异常, 选择继续妊娠, 足月阴道分娩1男性新生儿(Ⅳ-1)。随访至2022年2月, Ⅳ-1已3岁10个月, 于幼儿园就学, 体格、智力发育未见明显异常。结论 Xq25微重复可能是该家系中先证者出现智力障碍的原因, STAG2可能为Xq25区域关键基因。     

糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建

在多年糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾虚证的研究中,结果发现血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensin Ⅰ-converting enzyme,ACE)基因多态性与肾阴虚证密切相关[1].这提示肾阴虚证存在其相关基因.目前克隆疾病的相关基因有多种方法,其中抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)对研究复杂基因组的差异基因具有一定的优越性.目的:采用抑制性消减杂交技术(suppression sub-tractive hybridization,SSH)构建汉族人糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾阴虚证DNA消减文库.方法:选择汉族DN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交.用硅胶法抽提血白细胞DNA,用RsaⅠ酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建DN肾阴虚证DNA消减文库.结果:用SSH方法筛选出了DN肾阴虚证的差异DNA片段,得到586个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DN肾阴虚证的DNA消减文库.结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DN肾阴虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆DN肾阴虚证相关基因奠定了基础.     

两种检测人乳头状瘤病毒方法的相关性研究

目的探讨导流杂交基因芯片技术和第二代杂交捕获法检测宫颈液标本中人乳头状瘤病毒(HPV)感染的一致性,评价导流杂交基因芯片技术的临床应用价值。方法采用导流杂交基因芯片技术和第二代杂交捕获法对356例疑似HPV感染的标本进行基因诊断,对检测结果不一致的标本进行DNA测序,根据测序结果进行HPV分型,比较这两种方法对13种高危型HPV检测结果的符合情况。结果导流杂交基因芯片技术检测13种高危型HPV的检出率78.9%(281/356),其中单一感染217例,多重感染64例;第二代杂交捕获法检测结果阳性280例;两种方法检测13种高危型HPV的总符合率92.6%,总Kappa指数(KI)0.891,二者有很好的一致性。结论导流杂交基因芯片技术适合更临床筛查HPV感染及对HPV进行基因分型。     

湖北贝母的有性杂交及繁殖试验

湖北贝母Fritillaria hupehensis Hslao et K.G.Hsis历来采取无性繁殖。此法用种量大,抗病虫能力弱,不利于生产发展。现用能自花授粉的利川贝母Fritillaria lichunensis P.Liet C.P.Yang spnou为父本与其杂交,杂交后代大大提高了贝母的抗逆性,发展系数高达300～400倍。     

益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51表达的影响

目的 研究益气活血中药复方对CVB3乳鼠心肌细胞感染模型线粒体核糖体蛋白L51(mitochondrial ribosomal protein L51,MRPL51)表达的影响,以期从基因水平揭示CVB3心肌炎的发病机制及益气活血中药复方治疗病毒性心肌炎的作用机制,并进一步证实益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的有效性.方法 通过乳鼠心肌细胞培养,建立病毒组和益气活血中药复方组心肌细胞模型,以改良的抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),分离两组差异表达的基因,并通过荧光RT-PCR对上述结果进行验证.结果 SSH结果显示,MRPL51基因在益气活血中药复方组为低表达,而在病毒组则呈高表达状态,荧光RT-PCR结果显示益气活血中药复方组中MRRPL51基因达到阈值的循环数(Ct)明显多于病毒组,提示MRPL51在病毒组中的表达较中药组中高.结论 MRPL5基因表达上调可能是CVB3致病毒性心肌炎机制之一;益气活血中药复方通过下调MRPL5基因的表达而实现治疗病毒性心肌炎的目的 .     

生殖道人乳头瘤病毒感染与宫颈病变、宫颈癌相关性研究

目的 了解生殖道人乳头瘤病毒感染与宫颈病变、宫颈癌的关系，以便早期发现和治疗宫颈上皮内瘤样变（CIN）和原位癌。方法 应用TCT液基细胞学薄片检测法对宫颈病变做阴道细胞学分析，对CIN进行分级（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）鉴定。对高危病人（如ASCUS、CIN、宫颈原位癌）应用基因杂交捕获法（Hybrid Capture，HC-Ⅱ）分型检测HPV，同时用PCR法检测HPV—DNA，进一步做HPV分型鉴定。最后所有病人均进行阴道镜检查及病理组织学诊断。结果 2003年2月～2005年3月将标本送往广州金域医学检验中心进行TCT和HPV检测（HC—H），其中TCT检测1086例，发现不典型鳞状细胞39例、CINⅠ25例、CINⅡ3例、CINⅢ5例，原位癌3例。高危病人（如ASCUS、CIN、宫颈原位癌）进行HC—Ⅱ检测40例，阳性25例（其中原位癌、CINⅢ和CINⅡ均阳性）。结论 HPV感染与宫颈病变，特别是宫颈癌、宫颈癌前病变的发生有明显的相关性，病变越重，HPV的感染率越高。提示宫颈癌的防治重点应放在高危型HPV感染者。