全文获取类型
收费全文 | 4006篇 |
免费 | 150篇 |
国内免费 | 247篇 |
专业分类
耳鼻咽喉 | 12篇 |
儿科学 | 45篇 |
妇产科学 | 68篇 |
基础医学 | 521篇 |
口腔科学 | 42篇 |
临床医学 | 580篇 |
内科学 | 456篇 |
皮肤病学 | 43篇 |
神经病学 | 33篇 |
特种医学 | 183篇 |
外国民族医学 | 5篇 |
外科学 | 252篇 |
综合类 | 1257篇 |
预防医学 | 370篇 |
眼科学 | 9篇 |
药学 | 214篇 |
2篇 | |
中国医学 | 94篇 |
肿瘤学 | 217篇 |
出版年
2024年 | 4篇 |
2023年 | 33篇 |
2022年 | 41篇 |
2021年 | 50篇 |
2020年 | 49篇 |
2019年 | 51篇 |
2018年 | 22篇 |
2017年 | 45篇 |
2016年 | 67篇 |
2015年 | 67篇 |
2014年 | 123篇 |
2013年 | 133篇 |
2012年 | 144篇 |
2011年 | 230篇 |
2010年 | 182篇 |
2009年 | 205篇 |
2008年 | 183篇 |
2007年 | 177篇 |
2006年 | 217篇 |
2005年 | 275篇 |
2004年 | 242篇 |
2003年 | 226篇 |
2002年 | 218篇 |
2001年 | 229篇 |
2000年 | 146篇 |
1999年 | 98篇 |
1998年 | 101篇 |
1997年 | 124篇 |
1996年 | 105篇 |
1995年 | 92篇 |
1994年 | 133篇 |
1993年 | 79篇 |
1992年 | 85篇 |
1991年 | 61篇 |
1990年 | 66篇 |
1989年 | 56篇 |
1988年 | 18篇 |
1987年 | 17篇 |
1986年 | 3篇 |
1985年 | 5篇 |
1983年 | 1篇 |
排序方式: 共有4403条查询结果,搜索用时 31 毫秒
71.
目的 应用核酸扩增产物测定的固相杂交酶联显色法(RT-PCR-ELISA)检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度。方法 应用RT-PCR-ELISA。将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的疫苗病毒基因产物。与微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交,通过辣根过氧化物酶标记的链亲和素进行酶联显色。读取吸光度(A值)。判断结果。应用此法检测了11批甲肝活疫苗滴度。并与常规细胞培养法(CCID50)比较。结果 本方法与细胞培养法的敏感性相仿,具有简便、快速、特异的优点。结论 RTPCR-ELISA法有望代替常规细胞培养法应用于甲肝减毒活疫苗病毒滴度的检测。 相似文献
72.
牛碘酸转运体的cDNA在大鼠脑内的分布 总被引:2,自引:0,他引:2
为了观察牛磺酸转运体的cDNA的大鼠脑内的分布,用^35S标记的TAUTDNA探针,对大鼠全脑连续切片进行原位分子杂交,阳性反应广泛分布于脑灰质的不同区域,例如嗅球、梨状皮质,大脑皮质 、齿状回、海马和颗粒层细胞为阴性,而周围的胶质细胞为阳性,脑干的某些核,在灰质的神经元和社会胶质细胞观察到反应颗粒。 相似文献
73.
74.
正常人T淋巴细胞cDNA文库一未知DNA片段的克隆与分析(摘要)蔡铀庆,朱锡华(第三军医大学分子免疫学研究室重庆630038)本研究设计并合成了一对引物。从正常人T淋巴细胞cDNA文库中,采用聚合酶链式反应,经α-互补颜色筛选和PCR方法筛选,获得一... 相似文献
75.
目的 建立一种逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒(CVB1~6)进行分型诊断。方法 一对通用PCR引物,它能有效扩增所有CVB1-6型的特异性DNA片段;另选取6条各型特异性寡核苷酸探针,将它们分别共价结合在不同的微孔板上。经过一次PCR扩增,扩增后的产物分别与包被有不同探针的微孔板进行杂交检测,从而有效鉴别CVB各型。结果 本法与ELISA法的分型比较显示它们具有很好的一致性,无错误分型。对152例IgM抗体阳性标本的检测,该方法阳性率为71.7%。结论 本法可准确对CVB进行分型,为CVB的临床诊断及流行病学调查提供了一种有效的方法。 相似文献
76.
77.
白细胞介素—2是免疫应答过程中由T细胞释放的一种淋巴因子,具有较广泛的生物学作用。本文报告采用负向选择增富法处理人外周血淋巴细胞cDNA文库,用一种新型非放射标记技术制成地高辛素-dUTP-鼠白细胞介素-2cDNA片段探针,从中筛选到2个阳性克隆,使阳性率提高33倍。经限制性内切酶谱分析,所获克隆与公布的人白细胞介素-2cDNA顺序相符。该cDNA转染CoS-7细胞后表达的重组人白细胞介素-2可维持小鼠白细胞介素-2依赖株FI-2生长。 相似文献
78.
本文介绍一种在真核基因转录调控研究中,十分重要的检测技术——核Run-off转录活性的分析,并详细叙述了操作的具体步骤,特别强调了因各实验室选择样品材料的不同,需首先确定核转录的最适条件,如核染色体DNA模板数量,掺入同位素量和反应最适时间等,以便能成功地应用此项技术。 相似文献
79.
目的:建立一种灵敏度高、特异性强、定量、精确、操作简便的微孔板酶联夹心杂交技术,定量检测人IL-8 mR-NA。方法:针对人IL-8 mRNA逆转录聚合酶链反应产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针,其中一条为捕获探针,5′端用活性氨基修饰,与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,“竖直”地包被在微孔板内;另一条检测探针的3′端标记生物素,和辣根过氧化物酶结合。提取人外周血单个核细胞总RNA,进行RT-PCR扩增IL-8 mRNA,双链DNA产物经热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交,加入检测探针与已杂交的产物结合,经亲和素-辣根过氧化物酶系统检测杂交信号。结果:该法灵敏度为检出16个循环的PCR产物、5×103个PBMCs中的IL-8 mRNA、检测PCR终产物的最高稀释倍数为1∶256阳性;特异性试验非目的扩增片段酶联杂交检测未检出阳性杂交信号;精密度试验CV为5.2%。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点,适合IL-8 mRNA PCR扩增产物的定量检测。 相似文献
80.
目的克隆及分析与先天免疫相关的大劣按蚊差异基因。方法利用抑制性消减杂交 ( suppression subtractive hybridization, SSH)方法克隆大劣按蚊差异基因,并对与先天免疫相关的差异基因(文中命名为T6基因)进行生物信息学分析及半定量实验,分析约氏疟原虫感染前后其转录的变化,探讨它与按蚊抗疟原虫感染的先天免疫反应的关系。结果目前克隆的差异基因包含以下几类:①与先天免疫相关的酶类;②与能量代谢有关的酶:③与信号传递和调节有关的因子。对与先天免疫相关的分子进行的半定量实验表明,大劣按蚊T6基因的转录与感染疟原虫相关。结论本研究成功地克隆了与先天免疫相关的大劣按蚊差异基因,进一步的实验分析提示该基因可能与按蚊抗约氏疟原虫感染的黑化反应相关。 相似文献