shRNA特异性静默大鼠肺泡巨噬细胞TLR2基因对染尘大鼠肺纤维化的抑制作用

目的构建表达大鼠TLR2的shRNA慢病毒载体,并研究其在染尘大鼠肺组织内对巨噬细胞功能的抑制效应。方法设计并构建具有干扰效力的shRNA表达质粒,筛选出对TLR2干扰效果最好的一段序列,使用Gateway方法重组到慢病毒表达载体中进行包装,采用包装好的慢病毒感染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383,ELISA法检测TGF-β1、IL-1β、IL-6的表达情况;而后,在大鼠矽肺模型中引入TLR2慢病毒载体,观察矽肺发生和进展情况。结果成功筛选出具有良好TLR2表达干扰效果的shRNA,并成功包装入慢病毒,慢病毒滴度为1.0×106TU/ml,转染慢病毒的肺泡巨噬细胞释放TGF-β1、IL-1β、IL-6均显著减少(P<0.05);转导了干扰病毒载体的矽肺大鼠,其矽肺发生发展受抑情况均优于对照组。结论成功构建了表达大鼠TLR2 shRNA的慢病毒,具有良好的抑制TGF-β1、IL-1β、IL-6功能,并能有效抑制矽肺的发生发展,揭示TLR2可能成为治疗肺纤维化的潜在靶点。 更多还原     

石英粉尘所致豚鼠肺泡巨噬细胞化学发光的改变

本研究测定了石英粉尘对豚鼠肺泡巨噬细胞化学发光的影响,以二氧化钛粉尘为阴性对照粉尘,所采用的粉尘剂量分别为50、100和200μg/10~6细胞。结果表明,石英粉尘引起肺泡巨噬细胞化学发光强度随粉尘剂量增加而增强,有明显的剂量反应关系。石英组由低剂量到高剂量化学发光强度峰值分别为15.70、23.08及46.46(mV),对照组为10.25(mV)。而二氧化钛粉尘仅在200μg剂量组化学发光反应增强,峰值为18.83(mV)。值得注意的是,石英粉尘200μg剂量组在加尘后3分钟反应迅速达到高峰,而后随粉尘作用时间延长,发光强度明显减弱,至测定的60分钟,接近低剂量组水平。巨噬细胞化学发光的测定可以反映粉尘毒性大小和细胞的早期损伤,这对探讨尘肺的发病机理有重要意义。     

3种木尘体外细胞毒性的研究

本文对柯木、椿木、杏木3种木尘进行了体外巨噬细胞毒性和溶血作用的研究。结果表明:3种木尘溶血作用不明显,细胞存活率及培养液中乳酸脱氢酶含量均与盐水对照组相似(P>0.05)故认为3种木尘均为低细胞毒物质。     

硬质合金粉尘生物学作用的体外研究

本文应用体外细胞培养技术,通过测定豚鼠肺泡巨噬细胞培养液中乳酸脱氢酶活性、人胚肺二倍体成纤维细胞的DNA合成及扫描电镜观察,研究了我国有代表性的4种硬质合金粉尘的细胞毒性。结果表明,硬质合金粉尘可引起乳酸脱氢酶活性一定程度升高,和成纤维细胞DNA合成不同程度降低,以及细胞表面形态学改变,说明硬质合金粉尘具有一定的生物学作用,其细胞毒性明显低于二氧化硅粉尘。     

石英和石棉尘对体外不同种属肺泡巨噬细胞的毒性作用

吸入石英和石棉粉尘可导致肺组织发生一系列病理变化。肺泡巨噬细胞(AM)在机体防御机制和肺纤维化的发展过程中起了关键的作用。虽然有关石英、石棉以及其它粉尘对不同种属的AM的毒性作用的研究很多,但迄今尚无粉尘对不同种属AM毒性作用间比较的报道。本研究通过体外实验的方法比较研究裸露的及表面结构变化的石英和温石棉粉尘对大鼠(R)、牛(B)、狗(D)、猴(M)和人[吸烟者(HS)和肉瘤患者(HSP)]的AM以及人类单核细胞系U937细胞株的细胞毒性作用。     

Leptin对人单核细胞CD86和HLA—DR表达的影响

目的探讨Leptin对人单核细胞协同刺激分子和HLA—DR表达的影响,为阐明瘦素在抗感染免疫中的作用提供依据。方法采用流式细胞术检测THP-1细胞和人外周血单核细胞表面CD86和HIA—DR的表达变化。结果经高浓度瘦素处理后,THP-1细胞CD86和HLA-DR的表达明显增强（CD86未处理组：8．78±1．66,CD86keption10：50．76±4．29,CD86keption100：95．20±4．90;HLA未处理组：20．75±2．12,HLAkeption10 102．14±5．75,HLAkeption：104．32±4．75）。人外周血单核细胞表面的CD86和HLA—DR的表达也出现了类似增加的现象（CD86未处理组：17．91±1．78,CD86keption100：48．80±3．60;HLA未处理组：34．10±2．76,HLAkeption100：88．86±3．53）。结论瘦素可以上调人单核细胞表面协同刺激分子和MHC-II类分子的表达,从而增强单核细胞的抗原提呈功能。     

镍冶炼烟尘对豚鼠肺泡巨噬细胞的毒性及吞噬活性试验

本文用豚鼠肺泡巨噬细胞测试系统,比较了三种镍冶炼烟尘及三氧化二镍的细胞毒性和吞噬活性。用细胞半数致死浓度和吞噬率作为观察指标.结果表明,在受试样品中以镍精炼烟尘(取自火法处理硫化镍锍的镍精炼厂)的细胞毒性和吞噬活性为最强。     

受体介导内吞对巨噬细胞膜电位、胞浆和溶酶体pH的影响

本文利用荧光标记方法测量了刀豆素Ａ、麦芽凝集素、酵母多糖刺激引起的巨噬细胞膜电位、胞浆ｐＨ、溶酶体ｐＨ的变化。结果显示三种配体均导致细胞膜电位超极化,胞浆ｐＨ降低,溶酶体ｐＨ上升高,三个生理参量趋于稳定时间稍有不同。胞浆叫的降低可能有抑制内香的作用,溶酶体ｐＨ上升是触发溶酶体内容物外排的基本因素。内吞引起的这些变化是细胞代谢过程中自我调节和保护的表现。     

脂质过氧化在肺炎衣原体促进巨噬细胞泡沫化过程中的作用

目的：探讨肺炎衣原体（ Ｃｐｎ） 促进 Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ Ｊ 小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化的机制。方法：取 Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ Ｊ小鼠腹膜巨噬细胞培养２４ ｈ 让其贴壁后分为对照组、 Ｌ Ｄ Ｌ 组和 Ｌ Ｄ Ｌ 加 Ｃｐｎ 组３ 组培养,然后测反应液中自由基、 Ｍ Ｄ Ａ 及 Ｓ Ｏ Ｄ 含量。结果：反应液中自由基、 Ｍ Ｄ Ａ、 Ｓ Ｏ Ｄ 含量 Ｌ Ｄ Ｌ 加 Ｃｐｎ 组比 Ｌ Ｄ Ｌ 组高,存在显著性差异。结论：脂质过氧化是肺炎衣原体促进巨噬细胞泡沫化的机制之一。     

脾切除对小鼠腹腔巨噬细胞数量和功能的影响

目的：研究脾切除对小鼠腹腔巨噬细胞数量和功能活性的影响。方法：术后4周获取腹腔常居巨噬细胞和炎症巨噬细胞,检测其数量、吞噬功能和一氧化氨水平。结果：与正常对照组和假手术组比较,脾切除组小鼠的2种巨噬细胞不仅数量明显减少,而且它们的吞噬功能和一氧化氮水平呈明显下降。结论：提示脾切除造成的单核吞噬细胞继发性炎症反应的捐伤和巨噬细胞功能活性的降低,可能是脾切除后(凶险性)感染的重要因素。