人BAFF转基因斑马鱼的构建及早期免疫基因表达检测

目的:建立人BAFF转基因斑马鱼模型,探讨其在自身免疫性疾病发病中的作用。方法：RT-PCR法由人淋巴瘤细胞克隆了人BAFF基因全长855bp蛋白编码区域,构建表达人BAFF重组质粒Tol2-hBAFF,体外细胞转染并通过免疫印迹法验证蛋白表达。重组载体经显微注射斑马鱼受精卵后,GFP荧光跟踪并筛选阳性鱼。qPCR法检测早期免疫相关基因表达情况。结果：人BAFF-GFP融合蛋白可成功表达,利用Tol2-hBAFF重组质粒显微注射斑马鱼受精卵可获得表达人BAFF的转基因斑马鱼,且表达人BAFF斑马鱼1dpf胚胎中TCRAC明显高表达,而Ikaros则表达量显著降低,表明在斑马鱼胚胎中表达人BAFF蛋白会造成早期淋巴系统中基因的过早表达。结果:研究所建立的表达人BAFF的转基因斑马鱼可为系统性红斑狼疮等与BAFF功能亢进密切相关的自身免疫性疾病的治疗及相关机制研究提供一种具有诸多优点的新型工具。     

血红素氧化酶1对移植肝脏缺血再灌注损伤的保护

背景：在肝移植过程中,肝脏的缺血再灌注损伤导致的移植肝原发性无功能一直困扰着广大移植专家学者。血红素氧化酶1参与多种疾病及病理过程,通过抗氧化、抗炎、抗凋亡等多种机制发挥组织器官保护作用。 目的：对血红素氧化酶1对移植肝缺血再灌注损伤的保护作用进行综述。 方法：由第一作者应用计算机检索PubMed数据库1992年1月至2009年12月及中国期刊网全文数据库2003年1月至2010年12月有关血红素氧化酶1对移植肝缺血再灌注损伤保护作用的文章,英文检索词为“heme oxygenase-1,ischemia-reperfusion injury,liver graft”,中文检索词为“血红素氧化酶1,移植肝,缺血再灌注损伤”。排除研究目的与课题无关及内容重复的研究,共保留34篇文献进行综述。 结果与结论：血红素氧化酶1可能是哺乳动物体内分布最广、保护作用最重要的基因。血红素氧化酶1及其催化产物组成了机体重要的内源性保护系统,参与多种疾病及病理过程,通过抗氧化、抗炎、抗凋亡等多种机制发挥组织器官保护作用,具有重要的临床应用潜能。血红素氧化酶1对移植肝的缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,如何通过转基因手段将其应用于临床,保护移植肝减轻缺血再灌注损伤,提高移植肝成活率,有着广阔的临床应用前景,也是未来所要研究的方向。     

Chromosomal position mediates spinal cord expression of a dbx1a enhancer

Dbx homeodomain proteins are important for the production of multiple spinal cord cell types. To examine the regulation of Dbx genes in more detail, we have generated transgenic zebrafish in which fluorescent protein expression is driven by predicted dbx1a enhancers. We identified three areas of sequence conservation upstream of the dbx1a coding sequence and generated fluorescent reporter constructs driven by these predicted enhancer elements and the endogenous dbx1a promoter. In multiple stable insertions of a 3.5‐kb enhancer fragment, we observed that there was additional reporter expression in the dorsal spinal cord not normally observed by dbx1a in situ hybridization. In addition, these lines exhibited only transient reporter expression, unlike the endogenous gene. Surprisingly, a single insertion line expressed the reporter in the endogenous pattern, indicating that other local regulatory elements modulate gene expression through the 3.5‐kb enhancer. Developmental Dynamics 238:2929–2935, 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

β片层阻断肽对AD模型小鼠学习记忆及PI3K/AKT信号通路的影响

张力  谢英  刘树锋 《中国比较医学杂志》2012,(11):46-49,82

人TIMP-1转基因小鼠肾组织内外源基因功能表型的鉴定

目的 对人基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）转基因小鼠肾组织内外源人TIMP-1基因的功能表型进行鉴定,为深入研究TIMP-1在肾脏疾病进展过程中的病理生理作用奠定基础。方法 3月龄野生型小鼠（n=8,正常组）和hTIMP-1转基因小鼠（n=8）肾组织石蜡切片行PAS染色,观察肾脏组织结构变化。采用Northern杂交、Western印迹方法检测两组小鼠肾组织内h／mTIMP-1、mTIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、MMP-9、MMP-2和COLⅣa5mRNA及蛋白质表达;明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。反向酶谱法检测TIMP-1的活性。结果 hTIMP-1转基因小鼠与正常组小鼠相比,肾组织结构未见显著变化。与正常组小鼠相比,hTIMP-1转基因小鼠肾组织内h／mTIMP-1mRNA、蛋白表达及活性显著升高（P＜0．05）;TIMP-2、MMP-2mRNA和蛋白表达降低（P＜0．05）;MMP-9的活性增高（P〈0．05）,而MMP-2的活性则降低（P＜0．05）。两组小鼠mTIMP-1、TIMP-3、MMP-9和COLIVa5的mRNA表达没有显著性差异（P＞0．05）。结论 外源基因在人TIMP-1转基因小鼠肾组织内稳定表达并导致MMPs／TIMPs系统发生代偿性变化。     

提高青蒿素产量的生物技术研究进展

青蒿素是目前治疗疟疾的特效药,主要来自于中药黄花蒿。由于自然资源有限,人们试图通过各种栽培方法来获得高产量的青蒿素。对自青蒿素大量应用以来的获得高产量青蒿素的生物技术研究进行了比较详尽的综述,包括育苗栽培多次收割法、组织培养法、转基因克隆法。     

微囊化的人类心房肽cDNA质粒转染细胞对实验性高血压大鼠生理指标的影响

目的:探讨微囊化人心房肽(hANP)基因转染细胞治疗高血压的新途径和新技术。方法:将重组有hANP基因(cDNA)的质粒转染入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,然后将细胞包被在具有免疫隔离作用的聚己内酯(PCL)微囊内形成微囊化转基因细胞。移植微囊化hANPcDNA质粒转染细胞至两肾一夹(2K1C)的高血压大鼠腹腔内,检测其对高血压大鼠的血压以及多项生理指标的影响;同时研究微囊化hANPcDNA质粒转染细胞移植前后,2K1C高血压大鼠肾脏排泄的近日节律规律。结果:移植微囊化hANPcDNA质粒转染细胞至2K1C高血压大鼠腹腔内2周后,大鼠的血压上升水平明显不如对照组高,此作用至少持续5个月。在2K1C高血压大鼠体内,植入的微囊化转hANPcDNA质粒细胞可产生明显的利钠、利尿作用,且引起肾血流、肾小球滤过率、尿cGMP水平较对照组明显升高。此外,2K1C高血压大鼠的肾脏分泌的时间生物学特征研究显示:与对照组相比,植入微囊化hANPcDNA质粒转染细胞后,其近日节律的调整中值加大,振幅增高。结论:hANPcDNA质粒转染的CHO细胞通过植入高血压大鼠体内,可以降低高血压大鼠血压,将来可能适于植入人体。此项研究结果提供了一条心房肽治疗高血压或心衰的基因治疗新途径。     

转基因蓝藻制备α型重组人肿瘤坏死因子衍生物

应用ＤＮＡ重组技术将ａ型重组人肿瘤坏死因子衍生物（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａ，ｒｈＴＮＦａ）ｃＤＮＡ插到穿梭质粒ＰＤＣ－８上，构建成穿梭表达载体ＰＤＣ－ＴＮＦ，转入鱼腥藻ＰＣＣ－７１２２０中进行表达。